植物水解酶法快速测定环境水样中有机磷及氨基甲酸酯类农药

应用植物水解酶抑制技术快速检测水样中有机磷及氨基甲酸酯类农药 ,对反应的温度、pH和时间进行优化 .常用的几种有机磷及氨基甲酸酯类农药的测定限在 0 .0 0 15～ 0 .33mg·L-1范围内 .

番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析

为研究番茄果实中表达有机磷水解酶(OPH)降解有机磷农药的活性,经农杆菌介导,将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE8OP遗传转化番茄子叶,通过抗性筛选和分子检测,获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。酶活分析发现,酶促反应最适温度为30℃,稳定性较高。酶的最适保存pH值为9,最适试验pH值为8.0。与1 mmol/L Zn2+条件下酶活相比,Co2+提高了酶活2.1倍,Ca2+、Cu2+、Fe2+、Mg2+、Mn2+、EDTA、SDS、TritonX-100、β-ME和DTT都不同程度地抑制了酶活。检测重组表达OPH降解蝇毒磷、毒死蜱和对硫磷的酶活。表明,降解蝇毒磷的Km最低,为4.04μmol/L。重组表达OPH有助于提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。

广谱降解有机磷农药的真菌酶解研究

从农药污染土壤中分离出的一株真菌具有广谱降解有机磷农药的能力。菌体培养物经硫酸铵分级沉淀、SephadexG＿100凝胶过滤、DEAE＿SephroseCL6B柱层析纯化广谱有机磷农药水解酶。研究结果表明该酶为胞内酶,主要定位在细胞膜上。酶的最适反应温度为45℃,最适pH7 5,在50℃以下以及在pH6～9 5范围内活性稳定。Hg2+、Fe3+、对氯高汞苯甲酸、碘乙酸和N＿乙基马来酰亚胺对该酶有强烈的抑制作用,而Cu2+、巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、谷光甘肽和去污剂对酶有不同程度的激活作用。该酶不仅可以作用于含PO键的有机磷农药;而且也能水解含PS键的有机磷农药。以甲基对硫磷和内吸磷为底物的Km值分别为63μmol L,256μmol L;Vmax分别为306μmol·min-1,189μmol·min-1;Kcat分别为1102s-1,610s-1。

有机磷水解酶对不同有机磷农药降解功效的评价

通过2种检测方法测定了有机磷水解酶对不同有机磷农药的降解功效,一种方法是通过气相色谱法直接检测降解产物中农药的残留量来评价有机磷水解酶对不同农药的降解功效;另一种方法是利用有机磷类农药可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性,受抑制的胆碱酯酶不能将靛酚乙酸酯(红色)分解为靛酚(蓝色)和乙酸的原理,通过测定有机磷水解酶降解后有机磷农药的残留量对胆碱酯酶的抑制作用来评价有机磷水解酶对不同有机磷农药的降解功效。研究结果发现:有机磷水解酶对甲基对硫磷、对硫磷、喹硫磷和敌敌畏具有高效降解作用,降解率在82.2%～98.7%;其次是氧乐果、久效磷和敌百虫,降解效率在28.1%～45.4%;其他的降解效率均在20%以下。

有机磷农药广谱降解菌A1A18菌株(Brevundimonas sp.)的筛选、鉴定与降解特性分析

从宁夏有机磷农药污染土壤中筛选对毒死蜱、氧化乐果和水胺硫磷等3种常用有机磷农药残留具有降解能力的菌株,确定其降解能力的代际稳定性及其对土壤中有机磷农药的降解特性。采用选择培养法和牛津杯法筛选目标菌株,依据细菌形态学特征、生理生化反应及分子测序结果进行分类鉴定,气相色谱法检测液体培养环境和土壤中有机磷农药的残留量。结果表明:分离、筛选获得1株有机磷农药广谱降解菌A1A18菌株,鉴定为短波单胞菌属(Brevundimonas sp.);在液体培养环境中,A1A18菌株对毒死蜱、氧化乐果和水胺硫磷3种有机磷农药的降解率分别为45.82%、9.52%和13.96%;经10代培养,确定该菌株对3种有机磷农药的降解能力具有很好的遗传稳定性。在有机磷原药质量分数为1.0 mg·kg-1干土的土壤中施用A1A18菌株,降解菌初始数量密度为0.2×108 CFU·g-1干土,施药后第21天,土壤中毒死蜱和水胺硫磷的降解率分别达到88.81%和87.75%,较对照提高16.24%和24.62%;施药后第7天,土壤中氧化乐果降解率达86.19%,较对照提高12.69%。短波单胞菌A1A18菌株能促进土壤中毒死蜱、氧化乐果和水胺硫磷的降解,具有较好的田间应用潜力。

转基因表达有机磷水解酶(OPH)提高黄瓜降解蝇毒磷能力的初步研究

为快速提高黄瓜降解有机磷农药残留的能力，选取能广泛降解有机磷农药的有机磷水解酶（OPH）为表达蛋白，构建CaMV35S启动子驱动有机磷水解酶基因（opd）的植物表达载体pSOP，经双酶切证明重组载体含有插入位置和方向皆正确的目的片段。通过农杆菌介导遗传转化黄瓜子叶节，诱导和筛选出9株抗性苗，获得3株GUS染色和PCR阳性转化苗。酶活性分析表明，转基因黄瓜降解蝇毒磷能力是对照（非转基因株）的4．7～9．7倍，最高达到7．8μmol／（mg·min），有助于加快降解黄瓜中的有机磷农药残留，为食品安全研究提供借鉴。

有机磷水解酶传感器及其应用研究进展

介绍了有机磷水解酶传感器的基本原理、组成和分类,分析了各个类型传感器的特点,重点介绍了近年来国外有机磷水解酶的固定化技术和有机磷水解酶传感器的进展情况,并分析了未来有机磷水解酶传感器的发展趋势。

有机磷水解酶及其细胞表面展示研究进展

对有机磷水解酶在酶学特性、蛋白结构和细胞表面展示等方面的研究进行了综述,并且对该领域的研究趋势进行了展望。

番茄果实特异性表达有机磷水解酶的农药降解活性分析

为研究番茄果实中表达有机磷水解酶（OPH）降解有机磷农药的活性，经农杆菌介导，将携带表达元件E8-OPD的植物表达载体pSE80P遗传转化番茄子叶，通过抗性筛选和分子检测，获得6株GUS染色和PCR扩增阳性的转基因番茄植株。

有机磷水解酶对甲基对硫磷的快速降解及检测

甲基对硫磷是一种毒性较强的有机磷农药,常被用作菜农用作杀虫剂,有机磷水解酶可通过切断甲基对硫磷中的P=0键实现对甲基对硫磷的快速、高效降解。通过对有机磷水解酶降解条件进行优化,得到有机磷水解酶最优的农药降解条件:酶浓度为1∶1 000、pH值为8、降解温度为37℃、降解时间为10 min。通过气相色谱法测得有机磷水解酶对1、5、10μg/mL甲基对硫磷的降解率均达到98%以上,因此在生产中有机磷水解酶可作为针对甲基对硫磷的高效快速降解酶进行推广使用。

MET70对有机磷农药的广谱降解特性及降解乐果机理研究

为找寻处理磷化工污水的高效菌株,以筛选鉴定出的嗜麦芽寡养单胞菌MET70为材料,测定了其降解5种有机磷农药的最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC),以及pH值、温度对降解效果的影响,并采用HPLC初步分析了MET70对乐果的降解机理。结果表明:MET70对氧乐果、乐果、敌敌畏、甲基对硫磷和毒死蜱5种农药有广谱降解效果,降解5种农药的最适pH分别为8.0、8.0、9.0、7.0和9.0,对应的降解率分别为64.8%、46.36%、50.22%、31.36%和84.01%;最适温度分别为30℃、35℃、30℃、30℃和35℃,对应的降解率分别为64.21%、47.83%、45.8%、32.98%和77.7%。MBC从大到小依次为:乐果(1024)>氧乐果(1024)≈敌敌畏≈甲基对硫磷>毒死蜱(256),对乐果的耐受能力最强。在摇瓶实验中,MET70在120h里,对50mg/L乐果的降解率达89.66%。其中,MET70对乐果和氧乐果的降解稳定性最好。用HPLC检测分析MET70降解乐果过程中,没有新的物质出现,从而初步判断MET70对乐果的降解是完全矿化作用。对有机磷农药而言,MET70是一株具有广谱耐受力和降解能力的菌株。

七株有机磷农药降解菌的降解特性比较

对分离自同一有机磷农药污染土壤的7株有机磷农药降解菌的降解特性进行了比较,7株降解菌都能利用甲基对硫磷为唯一碳源生长,并生成中间代谢产物对硝基苯酚.对硝基苯酚的降解经过一段延滞期,不同菌株降解对硝基苯酚的能力和延滞期有很大差异.降解菌株对多种有机磷类农药和芳香族化合物具有降解能力,其降解谱表现了一定的差异.用PCR方法从7株降解菌中克隆了有机磷农药水解酶基因.

有机磷农药生物降解研究进展

有机磷农药是目前我国使用量最大的农药 ,对农业的发展有重要的作用 ,但同时造成了严重的环境污染 .利用微生物或微生物源酶制剂来降解农药是近年来的一个主要努力方向 .至今 ,已经陆续分离到许多有机磷降解菌 ,并对其相应的降解酶的生化性质进行了鉴定 ,相关的基因也被克隆、鉴定和改造 .另外 ,基因工程及生物技术方面的进展为开发微生物或酶制品奠定了基础 .本文综述了有机磷农药降解菌、降解酶以及有机磷农药生物降解技术等方面的研究现状 .表 1参 6

用植物酯酶法快速检测蔬菜中的有机磷农药

为了快速检测蔬菜中的有机磷农药残留状况,分别从京9428、京9583、京东8、京2小麦中提取植物酯酶,将这些酶用于有机磷农药的检测,采用分光光度法比较了不同质量浓度的对硫磷对小麦酯酶活力的抑制情况.结果表明,不同品种小麦酯酶对于对硫磷的敏感度不同,在所研究的小麦酯酶中,京2酯酶对对硫磷最为敏感,其检测限达到3.0×10-7mg/L.同时对酶促反应的温度、时间和pH值进行了优化,并应用此方法对蔬菜样品中的有机磷农药进行了检测.

有机磷农药的微生物降解研究进展

微生物因种类和代谢多样性在有机磷农药降解中表现出独特的优势。对微生物降解有机磷农药的机制、微生物的获得、基因工程菌的构建及研究展望进行了综述。

有机磷农药微生物降解研究进展

微生物降解是有机磷农药在环境中去毒降解的主要方式,是治理环境污染的一项有效手段。该文综述了有机磷农药降解菌的分离鉴定、降解机理与代谢途径、降解基因的克隆及表达、降解菌制剂和酶制剂的应用、以及有机磷农药微生物降解研究趋势五个方面的研究现状。

有机磷农药生物电化学传感器的研究进展

为了监测有机磷农药给人类及整个生态环境所造成了的危害和影响 ,本文综述了最近几十年来电化学生物传感器技术在有机磷农药 (OPs)检测领域的研究进展。

转基因表达OPH提高番茄果实降解有机磷农药能力的研究

拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株基因组中,为1个拷贝。HPLC比较分析发现,转基因番茄果实能显著提高降解毒死蜱和对硫磷的能力,大大减少了番茄中的农药残留。

果蔬中有机氯、有机磷农药残留检测技术研究

有机氯农药是一种广谱杀虫剂,具有性质稳定、不易分解等特性。我国虽禁止生产,但已生产的产品在一定范围内仍在使用,因而它在粮食、水果、禽蛋、茶叶、中药材中均有检出。特别是六六六(BHC)、滴滴涕(DDT)曾广泛适用于粮食作物、果蔬和中药材栽培中。有机磷农药的发展较有机氯农药要晚一些,是世界上生产和使用最多的农药品种。其生产品种将近40个,像甲胺磷、敌敌畏、敌百虫、乐果等年产量均在万吨以上。它具有品种多、药效高、应用范围广,在环境中降解快、残毒低等特点。

生物酶蔬果清洗剂对有机磷农药降解效果的评价

[目的]对市售的生物酶蔬果清洗剂的农药去除效果进行评价。[方法]测定超声辅助和室温处理下,A品牌生物酶蔬果清洗剂对小白菜中有机磷农药的降解情况。并考察A、B 2种生物酶蔬果清洗剂对水生动物生存环境中的敌敌畏降解效果。[结果]生物酶蔬果清洗剂可有效地降解小白菜中的有机磷农药,超声辅助可促进农药的降解。不同的水生生物对有机磷农药的敏感程度有差异,适当使用生物酶可降解水生环境中的有机磷农药。[结论]该研究为开发适合于家庭使用的蔬果清洗试剂和清洗设备提供了依据。