广金钱草多糖指纹图谱的建立、含量测定及其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性研究

目的:建立广金钱草多糖的指纹图谱,分析其单糖组成及含量,并考察广金钱草多糖对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用。方法:采用水提醇沉法提取广金钱草多糖,经三氟乙酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后,采用高效液相色谱法(HPLC)建立指纹图谱(以葡萄糖峰为参照),并进行单糖组成及含量分析。含量测定色谱柱为Phenomenex Luna C18,流动相为乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用氢氧化钠调节pH至6.8),梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,检测波长为250 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。以阿卡波糖为对照,采用对硝基苯-α-D-葡萄糖吡喃苷法考察广金钱草多糖对α-葡萄糖苷酶的体外抑制活性。结果:18批药材样品的HPLC指纹图谱有9个共有峰,其中15批药材样品的相似度大于0.90;共指认甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等7个共有峰。其中,鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的含量分别为0.471~2.092、1.379~8.919、2.560~35.679、1.194~6.905、0.566~4.158 mg/g;以鼠李糖为基准,其余4种单糖的摩尔比分别为1.58~4.07、2.26~19.95、2.20~4.21、1.31~2.86。广金钱草多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性呈现随剂量升高而增强的趋势,其半数抑制浓度为0.70 mg/mL,低于阳性对照阿卡波糖(7.76 mg/mL)。结论:不同批次广金钱草的多糖组成均以葡萄糖为主,各单糖含量有所差异。广金钱草多糖对α-葡萄糖苷酶具有明显的体外抑制作用,且活性强于阿卡波糖。

响应面法优化广金钱草多糖的酶法提取工艺

目的研究酶法提取广金钱草多糖的最佳工艺条件。方法在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken试验设计原理,采用加权评分法以广金钱草提取物中多糖得率和多糖含量为综合评价指标,建立二次多项式回归方程的预测模型,构建以综合评分为响应值的响应曲面和等高线图,考察酶解温度、酶解时间和酶用量3个主要因素对多糖提取效果的影响以及因素间的交互作用。结果回归模型拟合性良好,置信度较高。酶法提取广金钱草多糖的最佳工艺条件为:料液比1∶40,pH 5.5,酶解温度49.94℃,酶解时间1.53 h,酶添加量为2.00%。主要因素对提取效果的影响程度为:酶解时间>酶解温度>酶用量。各因素之间存在交互作用,且达到极显著水平。结论酶法处理可提高广金钱草多糖的提取效率。本实验优选的工艺稳定可行,可为相关生产加工企业提供有益的参考。