尿路感染细胞实验中庆大霉素对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用及细胞毒性研究

目的在尿路感染体外细胞实验中,比较不同浓度庆大霉素(0、10、20、50、100、200μg/mL)对尿路致病大肠杆菌(UPEC)的杀伤作用,对尿路上皮细胞及炎性细胞如巨噬细胞的毒性作用。方法比较不同浓度庆大霉素对不同量UPEC J96菌株(10^(8)、10^(7)、10^(6))的杀伤情况;CCK-8实验检测不同浓度庆大霉素在不同时间内(2 h或24 h)对原代培养的C57BL/6雄鼠肾小管上皮细胞、腹腔巨噬细胞、人膀胱上皮细胞系J82的毒性作用;根据实验选择合适的庆大霉素浓度和作用时间,检测J96对小鼠肾小管上皮细胞的黏附、入侵以及小鼠巨噬细胞对J96的吞噬、清除作用。结果庆大霉素(≥10μg/mL)对J96的杀伤作用均强于1%的青霉素/链霉素双抗(P<0.0001),高浓度庆大霉素(≥100μg/mL)可在30 min内完全杀伤高达10^(8)的J96。50μg/mL庆大霉素作用2 h可对人膀胱上皮细胞系J82产生毒性作用(P<0.05)。结论本文明确了不同细胞体外实验时适宜的庆大霉素处理浓度及时间,人膀胱上皮细胞系J82对庆大霉素更为敏感。

葛根素对庆大霉素毒性小鼠p53-ROS通路和螺旋神经元的细胞学的影响机制研究

目的:探讨葛根素注射液在庆大霉素毒性小鼠中的作用效果及对p53-ROS通路和螺旋神经元细胞学的影响。方法:购置SPF级C57BL/6J小鼠30只,随机取10只为空白对照组;其余小鼠建立庆大霉素耳毒性模型,建模成功后随机分为模型对照组和葛根素组各10只。空白对照组和模型对照组不采取任何措施,葛根素组采用葛根素注射液腹腔注射,比较3组小鼠听力水平、耳蜗形态学变化及p53-ROS通路关键蛋白水平。结果:葛根素组ABR低于模型对照组(P < 0.05);高于空白对照组(P < 0.05);模型对照组ABR高于空白对照组(P < 0.05);葛根素组干预14 d后听力水平0.75 kHz、1.0 kHz、2.0 kHz、4.0 kHz及8.0 kHz小鼠DPOAE水平高于模型对照组(P < 0.05);HE染色结果表明,葛根素组经药物干预后耳蜗部位毛细胞数量减少,耳蜗底转血管纹细胞未见水肿,形态正常。葛根素组Bax、Bcl-2及Cytochrome C mRNA及相关蛋白水平低于模型对照组(P < 0.05)。结论:葛根素用于庆大霉素毒性小鼠动物模型中效果显著,能抑制p53-ROS通路,改善螺旋神经元的细胞学水平,有助于提升小鼠听力水平。

细胞凋亡在庆大霉素致MDCK细胞急性肾损伤中的作用

为了探讨细胞凋亡在急性肾损伤中的作用,试验以庆大霉素处理的MDCK细胞为急性肾损伤细胞模型,利用cck-8测定细胞活性,ELISA法检测肾脏损伤因子KIM-1和NGAL水平,Westernblot检测Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果表明：随着庆大霉素浓度的增加和时间的延长,与对照组相比,细胞活性呈显著或极显著下降（P〈0.05或P〈0.01）;细胞上清液中KIM-1含量随着庆大霉素浓度的增加呈显著或极显著上升趋势（P〈0.05或P〈0.01）,而NGAL含量随着庆大霉素浓度的增加呈先上升后下降的趋势,但无统计学意义;随着庆大霉素浓度的增加和时间的延长,Bax蛋白表达水平逐渐增加,Bcl-2蛋白表达水平逐渐降低。说明细胞凋亡在急性肾损伤中扮演着重要角色。

庆大霉素氟米龙治疗翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术后患者的疗效及对眼表功能的影响

目的 观察庆大霉素氟米龙治疗翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术后患者的疗效及对眼表功能的影响。方法 选取2020年1月—2022年12月福建省汀州医院收治的翼状胬肉行翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术患者80例为研究对象,按治疗方式不同将患者分为对照组和观察组,各40例。翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术后,对照组予以氟米龙滴眼液,观察组予以硫酸庆大霉素氟米龙滴眼液,2组患者均连续治疗1个月。比较2组临床疗效,术后眼部舒适度、角膜愈合时间,治疗前及治疗1个月后血清炎性因子[白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)以及白介素-2(IL-2)]、眼表疾病指数(OSDI)、泪膜破裂时间(BUT),随访6个月疾病复发情况、不良反应。结果 观察组治疗总有效率高于对照组(97.50%vs.75.00%,χ^(2)=8.538,P=0.003)。观察组术后6个月视觉清晰度、眼干涩感、眼红程度及角膜表面状态评分低于对照组,角膜愈合时间短于对照组(P<0.01)。治疗1个月后,2组血清IL-6、IL-1β及IL-2水平低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.01);2组OSDI评分低于治疗前,BUT长于治疗前,且观察组降低/延长幅度大于对照组(P<0.01)。观察组随访6个月疾病复发率为5.00%,低于对照组的22.50%(χ^(2)=5.165,P=0.023)。观察组不良反应总发生率低于对照组(2.50%vs.20.00%,χ^(2)=4.507,P=0.034)。结论 翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术后患者采用庆大霉素氟米龙治疗可增强疗效,减轻炎性反应,改善眼表功能,提高眼部舒适度,且可降低疾病复发率,安全性较高。

局部注射地塞米松加庆大霉素治疗浆细胞性乳腺炎的效果分析

探究及其研究庆大霉素联合局部注射地塞米松对浆细胞性乳腺炎进行治疗的临床效果。方法 选取柳州市柳铁中心医院纳入且收治的20例浆细胞性乳腺炎患者,均分为对照组及其观察组,对照组对患者实施我医院的常规脓肿切开引流,观察组对照组基础上对患者实施我医院的局部注射地塞米松加庆大霉素。统计两组的临床疗效。结果 经统计学研究分析显示,观察组浆细胞性乳腺炎患者症状改善时间、生活质量、炎症因子水平等对比对照组均更具优势(P<0.05)。结论 对于浆细胞性乳腺炎患者应用局部注射地塞米松加庆大霉素治疗效果较好。

基于CRISPR/Cas9技术的全基因组基因编辑MDCK细胞文库的构建

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,首先靶向犬全基因组设计合成转录sgRNA的DNA文库,并将DNA文库全部克隆于lentiCRISPR v2慢病毒转移载体上,高通量测序结果显示文库覆盖度高、均一性良好。将质粒文库和慢病毒包装系统质粒共转染293T细胞,收取含慢病毒样病毒的上清液感染MDCK细胞,在最适浓度嘌呤霉素筛选下,收集嘌呤霉素抗性细胞,冻存于-80℃,提取一部分细胞的基因组,通过PCR扩增转录sgRNA的DNA,将PCR产物插入到T载体后,挑取单克隆菌落,测序表明细胞文库中转录的sgRNA具有较好的覆盖度。本实验成功构建了犬全基因组范围转录sgRNA的质粒文库,并成功构建了MDCK细胞全基因组范围的基因编辑细胞库,该文库可作为后续筛选病毒复制关键宿主因子的细胞平台。

MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感疫苗研究与生产中的应用进展

流感是一种常见的呼吸道疾病,由流感病毒引起,接种疫苗是预防流感的有效手段。MDCK细胞(Madin-Darby Canine Kidney Cells)具有易于培养和高产量的特点,可以支持流感病毒的复制和增殖,被广泛用于流感疫苗的研究和生产。随着对流感病毒研究的不断深入,为了进一步拓展MDCK细胞用于流感病毒研究和工业应用的能力,研究人员开始发展MDCK细胞无血清全悬浮培养技术。通过长期的培养和优化,驯化的MDCK悬浮细胞株可以更好地适应流感病毒的生长环境,提高流感病毒的产量和感染性。总之,MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感病毒研究和工业应用中发挥着重要作用,为流感疫苗生产和抗流感药物研发提供更好的工具。同时也必须重视MDCK细胞的安全性,采取合适的措施来确保其应用的安全性和可靠性。

碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素肾损害保护作用的体外实验研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对庆大霉素引起的体外培养的大鼠肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法 大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消化,进行肾小管上皮细胞的体外培养。经Cytokeratin18抗体进行鉴定后,用庆大霉素建立损伤模型,观察bFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果 ①经形态学观察、Cytokeratin18免疫细胞化学方法鉴定;GM组与对照组比较,CAT、Na+,K+ ATP酶活性下降,而NAG活性和MDA升高 (P<0 01),提示肾小管上皮细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功。②bFGF+GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P<0 01 );而bFGF+GM组与对照组比较,CAT、Na+,K+ ATP酶、NAG酶活性差异无显著性 (P>0. 05 ),但MDA增高差异仍有显著性(P<0 05)。结论 bFGF能保护损伤的肾小管上皮细胞。

用毫微球增加体外小鼠腹腔巨噬细胞与大鼠肝细胞对庆大霉素的摄取

用３Ｈ－庆大霉素制备了聚氰基丙烯酸正丁酯毫微球。结果表明，毫微球可使小鼠腹腔巨噬细胞的ｃｐｍ达３Ｈ－庆大霉素溶液对照组的６．３４倍，使大鼠肝细胞的ｃｐｍ在１，１２和２４ｈ分别达到‘比庆大霉素溶液对照组的２７．７４，９．０３和８．３６倍。毫微球的粒径、使用的稳定剂种类、表面活性剂包裹以及庆大霉素的投药量等对摄取量均有明显影响。本研究为筛选细胞内给药系统提供了依据。

酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素引起的体外培养的大鼠肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消化,进行肾小管上皮细胞的体外培养。用庆大霉素建立损伤模型,观察aFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果①经形态学观察、GM组与对照组比较,CAT、SOD、Na^+,K^+-ATP酶活性下降,而NAG活性和MDA升高(P<0.01),提示肾小管上皮细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功。②aFGF+GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P<0.01);而aFGF+GM组与对照组比较,CAT、NAG、Na^+,K^+-ATP酶活性差异无显著性,但SOD活性下降、MDA升高差异仍有显著性(P<0.05)。结论aFGF对庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤有明显的保护作用。

庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达

目的:观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用;研究在细胞凋亡过程中细胞周期调节蛋白cy-clin E、CDK_2和p27^(Kipl)蛋白表达的改变,并探讨细胞凋亡与细胞周期调节蛋白表达之间的关系。方法:0.2～3.2 mg/ml的庆大霉素作用于体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株(LLC-PK1细胞)24～96 h,MTT法测定庆大霉素对细胞增殖的抑制率,琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA条带,流式细胞术测定细胞凋亡率(AI)和细胞增殖动力学,Western印迹分析检测培养96 h时细胞内cyclin E、CDK_2和p27^(Kipl)的蛋白表达。结果:庆大霉素对LLC-PK1细胞增殖有抑制作用,庆大霉素具诱导细胞凋亡的作用,AI呈药物浓度和作用时间依赖性;庆大霉素致细胞周期停滞于G_1期。随着庆大霉素浓度的增加,细胞内cy-clin E和 CDK_2蛋白表达逐渐下调,而p27^(Kipl)蛋白表达则逐渐上调。结论:庆大霉素诱导的LLC-PK1细胞凋亡与细胞周期调节蛋白cyclin E和 CDK_2表达下调以及p27^(Kipl)表达上调有关。

庆大霉素和卡那霉素耳中毒后雏鸡耳蜗毛细胞的再生

给２大龄纯种罗丝鸡分别肌注庆大霉素（ＧＭ）和卡那霉素（ＫＭ）１０天，于停药当天、第１、２、３和４周处死小鸡，取出内耳基底乳头（ＢＰ）用扫描电镜和光镜观察，发现从ＢＰ的基底到中部有广泛性损害，毛细胞损失率约占４０％，在１周后受损部位表皮板上出现丛生的有微绒毛的再生毛细胞，随恢复期延长，再生毛细胞表面积增大，动纤毛和静纤毛来长出，３至４周受损部位已完全被发育成熟的再生毛细胞填补，ＢＰ形态恢复。

庆大霉素对人肾小管上皮细胞系(HK-2)热休克蛋白(HSP)70表达的影响

目的观察了庆大霉素在体外对肾小管上皮细胞内HSP70表达的影响。方法将庆大霉素(100mg·L-1)作用于人肾小管上皮细胞系(HK-2),用MTT法检测庆大霉素对HK-2细胞增殖活力的影响,应用免疫细胞化学和Westernblot法观察了HSP70蛋白表达的改变,采用RT-PCR法检测HSP70mRNA表达的变化。结果庆大霉素在作用HK-2细胞24、48、72h后,MTT吸光度值为0·166±0·02、0·181±0·009、0·237±0·016,均低于对照组0·187±0·011、0·32±0·016、0·515±0·035(P<0·01);HSP70蛋白阳性表达率(%)分别为69±17、86±21、89±25,均高于对照组6±3、4±3、7±2(P<0·01);还可增加HSP70蛋白和mRNA表达(P<0·01)。结论庆大霉素在降低人肾小管上皮细胞系细胞增殖活力的同时,增加HSP70的表达。

环孢素A,庆大霉素和硒制剂对大鼠外周血淋巴细胞分子和基因表达的影响

目的 为比较环孢素A ,庆大霉素和硒制剂对细胞免疫功能的不同影响 ,本实验观察了大鼠短期服用环孢素A ,庆大霉素和硒制剂后外周血多种淋巴细胞分子和基因的表达水平变化 ,并对 3组药物进行了对比。方法 将 2 4只大鼠分为 4组 ,分别ig给药。于第 3天取血并分离淋巴细胞。用荧光单克隆抗体 (mAb)标记淋巴细胞分子并提取淋巴细胞总RNA。流式细胞仪检测淋巴细胞分子MHC Ⅱ ,CD4,CD8,ICAM Ⅰ和IL2 R的表达水平 ,基因差异显示分析法检测多基因表达水平。免疫组化法检测各组心肌组织中CD4+,CD8+淋巴细胞数。结果 与对照组相比 ,环孢素A ,庆大霉素和硒制剂都抑制淋巴细胞分子ICAM I,CD4和CD8的表达 ,同时 3组心肌组织中CD4+和CD8+淋巴细胞数降低 ,心肌组织中CD4+淋巴细胞数与CD4分子表达水平明显正相关 (P <0 .0 0 0 1)。 3组的细胞分子表达和心肌淋巴细胞数的降低程度依次为环孢素A >庆大霉素 >硒制剂。不同的是 ,环孢素A还负调MHC Ⅱ和IL2 R的表达水平 ,而庆大霉素却正调MHC II和IL2 R的表达 ,硒制剂负调MHC Ⅱ ,正调IL2 R的表达。 3组都表现出对凋亡基因 gig18和一个 45 0bp左右的待测基因的正调表达。 结论 ①短期服用环孢素A ,庆大霉素和硒制剂 ,都抑制大鼠外周血淋巴细胞对ICAM I 。

死亡相关蛋白(DAP-5)在庆大霉素诱导的人肾小管上皮细胞凋亡过程中的表达变化及机制

目的建立庆大霉素诱导人肾小管上皮细胞(HK2)凋亡模型;观察死亡相关蛋白5(DAP5)在HK2凋亡过程中的表达变化,并探讨其与PI3K/Akt/m TOR通路之间的关系。方法以3.2mg/ml庆大霉素作用于HK2,应用琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA条带,流式细胞仪测定细胞凋亡率。采用Western blotting法观察DAP5与Akt、p-Akt表达的改变,应用雷帕霉素阻断PI3K/Akt/m TOR通路后观察DAP5的表达变化。结果庆大霉素作用24h后HK2细胞即出现凋亡,凋亡率随时间延长而增加,24、36、72h的凋亡率分别为5.9%,23.0%,49.9%(P<0.05)。与此同时,细胞DAP5活化裂解生成DAP5/p86,且表达逐渐增加(P<0.05)。在凋亡的同时p-Akt蛋白的表达水平也逐渐增加(P<0.05),应用雷帕霉素阻断PI3K/Akt/m TOR通路后,裂解产生的DAP5/p86减少(P<0.05)。结论庆大霉素可诱导HK2细胞发生细胞凋亡,凋亡率随时间的延长而增加。在诱导HK2细胞凋亡过程中DAP5裂解活化产生DAP5/p86,且这一过程可能是经过PI3K/Akt/m TOR途径来完成的。

刺五加注射液拮抗庆大霉素所致豚鼠耳蜗血管纹细胞凋亡的实验研究

目的研究刺五加注射液是否对庆大霉素所致耳蜗血管纹细胞凋亡具有拮抗作用并探讨机制。方法设立正常对照组、庆大霉素组、刺五加注射液组、庆大霉素+刺五加注射液组,连续10 d用药后观察4组实验动物耳蜗血管纹细胞caspase-3的表达与凋亡情况。结果用药后庆大霉素组血管纹细胞caspase-3的表达显著增高,与刺五加注射液组和正常对照组相比差异显著;通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(Tunel)检测血管纹细胞发现正常对照组、刺五加注射液组均无Tunel染色阳性细胞,庆大霉素组血管纹细胞存在Tunel染色阳性细胞,与正常对照组和刺五加注射液组相比差异明显。结论庆大霉素作用下可使血管纹细胞发生过度凋亡,刺五加注射液可以降低血管纹细胞caspase-3的表达、抑制血管纹细胞凋亡,达到防治耳聋的作用。

耳聋左慈丸“药对”拆方拮抗庆大霉素所致耳蜗毛细胞损伤的研究

目的观察耳聋左慈丸及其药对拆方对庆大霉素（GM）耳毒性模型的作用。方法出生2～3天小鼠的耳蜗螺旋器培养24h后，加入GM或同时加入GM和中药及其拆方的水提醇沉液处理。毛细胞经TRITC-phalloidin染色后在荧光显微镜下观察并进行全耳蜗毛细胞计数，计数结果输入全耳蜗毛细胞定量分析软件，获得全耳蜗毛细胞损失率。结果GM可造成耳蜗内、外毛细胞的缺失，且呈剂量依赖和时间依赖（P〈0．01）；耳聋左慈丸全方可降低0．5mMGM造成的耳蜗内毛细胞（IHC）和外毛细胞（OHC）的损失率；耳聋左慈丸拆方补肾药对、养肝药对、利水药对和健脾药对均可降低0．5mM GM造成的耳蜗OHC的损失率（P〈0．05，P〈0．01），养肝药对和利水药对可降低IHC的损失率（P〈0．05）。结论耳聋左慈丸方中按照中医理论拆方配伍的药对（补肾药对、养肝药对、利水药对和健脾药对）对GM所致的OHC或IHC损伤有拮抗作用。

庆大霉素诱导LLC-PK1细胞凋亡与p27^(Kip1)表达关系的研究

目的 观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用 ;研究细胞周期调节蛋白 p2 7Kip1蛋白和mRNA表达在凋亡过程中的变化 ;并探讨细胞凋亡与p2 7Kip1之间的关系。方法 对体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株 (LLC PK1细胞 )予以不同浓度的庆大霉素溶液分别作用 2 4～ 96h ,以MTT法测定庆大霉素对LLC PK1细胞增殖的抑制率 ,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡条带 ,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞增殖动力学 ,WesternBlot法检测细胞内p2 7Kip1的蛋白表达 ,RT PCR法检测细胞p2 7Kip1mRNA表达的变化。结果 庆大霉素对LLC PK1细胞增殖有抑制作用 ,具诱导LLC PK1细胞凋亡的作用 ,凋亡率呈药物浓度和作用时间依赖性 ;庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。p2 7Kip1蛋白在细胞内的表达随着干预的庆大霉素浓度增加而逐渐上调 ,蛋白水平与凋亡率之间呈正相关 ,其mRNA表达趋势与其蛋白表达一致。结论 庆大霉素诱导的LLC PK1细胞凋亡与细胞周期蛋白p2 7Kip1表达密切相关。

碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素所致豚鼠耳蜗损害的拮抗作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对庆大霉素所致活体豚鼠耳蜗损害的拮抗作用。方法 豚鼠皮下注射庆大霉素连续10d,造成内耳损伤。实验组同时腹腔注射bFGF,对照组则注射生理盐水。检测两组豚鼠的听功能,耳蜗行扫描电镜观察。结果 扫描电镜观察所见对照组耳蜗损伤明显重于实验组,对照组ARB听阈较实验组高(P<005)。

庆大霉素作用下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2及Bax的表达

目的探讨bcl-2蛋白家族与庆大霉素诱导耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的关系。方法对豚鼠进行庆大霉素连续肌肉注射,150mg/kg×10d,分别于停药后1、3、7、14d各处死豚鼠8只,取耳蜗,做平行蜗轴的石蜡切片,用免疫组织化学方法检测连续用药后不同时间耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2及Bax的表达变化情况。结果耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2表达增强,3d时表达达到高峰,7d时有所下降,14d时bcl-2表达明显减弱;Bax的表达在3d时达到高峰,7d时表达较3d时下降,14d时Bax表达减弱。结论庆大霉素作用下,bcl-2和Bax表达发生变化,bcl-2蛋白家族参与了庆大霉素诱导的耳蜗螺旋神经节细胞凋亡。