HPLC-ELSD法测定硫酸庆大霉素碳酸铋胶囊中庆大霉素C组分及有关物质含量

目的为硫酸庆大霉素碳酸铋胶囊中庆大霉素C组分及有关物质建立质控方法。方法采用HPLC-ELSD方法,色谱柱:GRACEApollo C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.2 mol/L三氟乙酸溶液-甲醇(96:4,V/V),流速0.6 mL/min;柱温30℃;进样量20μL;Waters低温分流型蒸发光散射检测器,载气流量40 psi,漂移管温度55℃。结果所建方法通过方法学验证,庆大霉素C组分与各杂质间分离完全,庆大霉素、西索米星和小诺霉素分别在0.5~6 mg/mL、25~100μg/mL和25~100μg/mL的浓度范围内,各浓度的对数值与对应色谱峰面积的对数值呈现出良好的线性。采用所建方法对市售16家生产企业43批次硫酸庆大霉素碳酸铋胶囊样品进行测定,获得该制剂产品中各组分及有关物质的数据。结论所建方法是在中国药典方法基础上优化并验证适用于硫酸庆大霉素碳酸铋胶囊C组分及有关物质的含量测定,方法简便准确,专属性强,稳定性好。由获得的实验数据可知,该复方制剂中C组分及有关物质的含量在各厂家间或同厂家不同批次间差异显著,可能存在影响用药安全的潜在隐患,建议在该剂型质量标准中增加相关质控项。

庆大霉素C_(1a)高产菌株的推理育种的研究

已有研究表明在氨基糖苷类抗生素的生物合成途径与细胞壁的合成途径间有一定的相关性。因而如能减小合成细胞壁的代谢流，则可促使氨基糖苷类抗生素高产。已知磷霉素是一种抑制细胞壁合成的抗生素。本文采用筛选对磷霉素敏感的菌株来获得庆大霉素Ｃ１ａ（ＧＭＣ１ａ）的高产株。结果表明在得到的６０株超敏菌株中，正变率为７３．３％。同时用薄层层析法和纸层析—生物显影法检测发酵液的组分情况，得到４株效价、组分均好的菌株（ＳＦ－０１－１、－１１、－１４、－６８）。稳定性试验表明这４株菌株稳定性良好，与亲株相比效价提高７５％～１０１％。用该法筛选可减小工作量，而且有效地提高了ＧＭＣ１ａ的产量已有研究表明在氨基糖苷类抗生素的生物合成途径与细胞壁的合成途径间有一定的相关性。因而如能减小合成细胞壁的代谢流，则可促使氨基糖苷类抗生素高产。已知磷霉素是一种抑制细胞壁合成的抗生素。本文采用筛选对磷霉素敏感的菌株来获得庆大霉素Ｃ１ａ（ＧＭＣ１ａ）的高产株。结果表明在得到的６０株超敏菌株中，正变率为７３．３％。同时用薄层层析法和纸层析—生物显影法检测发酵液的组分情况，得到４株效价、组分均好的菌株（ＳＦ－０１－１、－１１、－１４、－６８）。稳定性试验表明?

高效液相色谱-蒸发光散射检测法分析庆大霉素C组分

目的:建立一种理想的庆大霉素C组分分析方法,为克服现行药典方法的不足提供新思路。方法:应用高效液相色谱-蒸发光散射检测法分析庆大霉素C组分。色谱条件为:Diamonsil(钻石)C_(18)色谱柱,规格:150 mm×4.6 mm,5 μm;流动相:0.2mol·L^(-1)三氟醋酸水溶液-甲醇(94:6),流速为0.6mL·min^(-1);检测器条件:漂移管温度为110℃,载气流速为2.80L·min^(-1)。应用随行标准曲线法确定庆大霉素C组分组成。结果:庆大霉素中的4个主要组分C_(1a),C_2,C_(2a),C_1在上述色谱条件下能完全分离,分析时间仅需30 min;精密度优于1.0％;庆大霉素各组分在蒸发光散射检测器中的响应因子一致。庆大霉素标准品采用本法测定结果(C_(1a):29.4％;C_2:26.5％;C_(2a):13.1％;C_1:31.1％)与BP方法标化结果(C_(1a):30.1％;C_2:24.9％;C_(2a):14.1％;C_1:30.9％)一致。结论:本法操作简单,方法的精密度、准确性、重现性均能很好地满足质量控制的要求,能有效克服现行药典方法的不足,是一种比较理想的庆大霉素C组分分析方法。

5′-差向庆大霉素C1a及其衍生物的合成及生物活性的研究

以西索米星、奈替米星为母核 ,对双键进行选择催化氢化 ,得到氢化西索米星 ( 5′ 差向庆大霉素C1a)和新化合物氢化奈替米星 ( 5′ 差向依替米星 ) ,由于它们的空间构象发生改变导致抗菌活性的降低。

高效液相色谱法测定庆大霉素C组分的不同检测方式测定结果的比较

各国药典中关于庆大霉素C组分的测定方法均为高效液相色谱法,但检测方式及分离效果不同。为此采用直观推导式演进特征投影法(HELP),对高效液相色谱-二极管阵列检测采集的庆大霉素C组分色谱数据进行解析,分辨出各物质的色谱曲线,在扣除了未分离的杂质峰对庆大霉素C1组分的干扰后,对柱前邻苯二醛衍生化-二极管阵列检测法及目前中国药典2005版收载的高效液相色谱-蒸发光散射检测方法测定庆大霉素C组分的准确性进行了比较,并运用柱切换技术,证明二者测定结果的一致性。

柱切换HPLC-ELSD法测定硫酸庆大霉素颗粒中庆大霉素C组分的研究

目的建立柱切换高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定硫酸庆大霉素颗粒中庆大霉素C组分含量,并对2017年国家评价性抽验190批次样品进行检测。方法采用配置切换六通阀的高效液相色谱仪,GRACE Apollo C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为0.2mol/L三氟乙酸溶液:甲醇(96:4,V/V),柱温35℃,流速0.6mL/min,进样量25μL,ELSD漂移管温度110℃,载气流量2.5L/min,增益1。结果采用新建的柱切换HPLC-ELSD法可有效去除辅料蔗糖等对测定的干扰,庆大霉素C组分(C1、C1a、C2、C2a)的平均回收率分别为98.9%、102.0%、100.1%和98.6%,RSD(n=9)分别为0.5%、0.4%、0.3%和0.6%,线性范围分别为0.0517~0.6465、0.0538~0.6729、0.0651~0.8136和0.0299~0.3738mg/mL。190批次样品中12批次样品的庆大霉素C1偏低,2批次样品的庆大霉素总C组分含量偏低,3批次样品的庆大霉素总C组分含量偏高。结论新建方法准确简便,专属性良好,可为硫酸庆大霉素颗粒中庆大霉素C组分的控制提供参考。

直观推导式演进特征投影法测定庆大霉素C组分含量

目的:验证中国药典方法测定庆大霉素 C 组分含量的准确性,同时考察直观推导式演进特征投影(HELP)法应用于多组分药物色谱分析的适用性。方法:用直观推导式演进特征投影(HELP)法,对高效液相色谱仪-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)采集的色谱数据进行解析,分辨出各物质的色谱曲线,用庆大霉素 C_1组分的纯色谱曲线进行积分定量,并进行了方法学考察。结果:解析结果扣除了未分离的杂质峰的干扰,对样品中的庆大霉素 C_1组分进行了准确定量。结论:运用化学计量学方法为色谱难分离的多组分抗生素的分析提出了一种有效途径。

一株主产庆大霉素C2a工程菌的构建

为更好生产单组分庆大霉素C2a,拟构建一株主产庆大霉素C2a的工程菌.通过序列比对分析,锁定genB2为构建该工程菌的关键基因.以绛红小单孢菌G1008基因组为模板,PCR扩增genB2的上下游序列为同源交换臂,构建同源重组质粒pZB303.通过接合转移,将质粒pZB303导入绛红小单孢菌G1008,安普抗性及PCR扩增筛选得到一株genB2框内缺失工程菌GB102.发酵并提取代谢产物,再经TLC,HPLC,MS分析.结果表明,工程菌GB102主要积累庆大霉素C2a.有望用于生产单组分庆大霉素C2a.

应用H/D交换质谱法对庆大霉素C_2/C_(2a)及小诺霉素进行快速鉴别

目的快速鉴别庆大霉素C2/C2a和小诺霉素。方法采用电喷雾质谱法结合氢-氘(H/D)交换技术对庆大霉素C2/C2a和小诺霉素进行研究。结果进行氘代反应后,庆大霉素C2/C2a和小诺霉素的m/z可分别得到+13和+12的增量。结论上述方法可以简便快速地区分出庆大霉素C2/C2a与小诺霉素这一对同分异构体,为鉴别分子内活泼氢数目不同的同分异构体提供了一种可行的方法。

HPLC测定胃炎合剂中庆大霉素C组分的含量

建立了胃炎合剂中庆大霉素C组分的反相高效液相色谱测定法。利用离子交换树脂柱将庆大霉素和其它成分分离后,用2,4-二硝基氟苯(FDNB)柱前衍生化反相HPLC法测定庆大霉素C组分的含量。色谱条件:固定相为Irregular-H C_(18)柱;流动相为0.005 mol/L十二烷基磺酸钠溶液-高氯酸-甲醇(75:3:22,三乙胺调节pH 3.10);流速:1.0 m1/min;紫外检测波长:365 nm;柱温:20℃。结果:庆大霉素C组分的4个主要成分在20 min 内完全分离,平均方法回收率为99.05％～100.12％,日内、日间精密度RSD均小于5％(n=5)。结论:方法简便、快速、准确,可做为胃炎合剂的质量控制方法。

紫外分光光度法快速测定庆大霉素C_(1a)含量在高通量筛选中的应用

目的探索庆大霉素C_(1a)含量的快速检测方法,实现诱变菌株的高通量筛选。方法以紫外分光光度法作为检测庆大霉素C_(1a)含量的手段,对庆大霉素C_(1a)单组分生产菌株进行ARTP、LiCl、微波和ARTP+LiCl诱变,通过高通量筛选获得高产菌株,并在5L发酵罐中对高产稳定性菌株进行验证。结果紫外分光光度法和高效液相色谱法对发酵液中庆大霉素C_(1a)含量进行测定,最大相对误差为3.98%;筛选获得了10株高产菌株,其中AL324菌株与出发菌株相比,摇瓶效价提高了52%;通过稳定性传代实验,获得了4株高产稳定性菌株。5L发酵罐验证实验表明AL324与出发菌株相比效价提高了81.3%。结论紫外分光光度法可以快速检测发酵液中庆大霉素C_(1a)含量,该方法应用于高通量筛选中,获得了高产菌株,筛选结果表明ARTP+LiCl复合诱变方法的正突变率较高,是一种有效的庆大霉素C_(1a)高产菌株诱变方式。

用HPLC-ESI-IT-MS^n法研究庆大霉素C_(1a)的杂质谱

目的:建立用于研究庆大霉素C1a杂质谱的HPLC-ESI-IT-MSn方法,并对检出杂质结构进行快速推定。方法:用宽pH范围的Gemini NX C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以[水-氨水-冰醋酸(96∶3.6∶0.4)]-甲醇(85∶15)为流动相,用ESI-IT-MSn检测(质谱条件:ESI离子源,离子源温度350℃,雾化室压力275.8 kPa,干燥气流速10 L.min-1,正离子检测方式)。结果:该色谱条件能将庆大霉素C1a与主要杂质分离,从庆大霉素C1a原料中检出13个杂质,对其中12个的结构进行了归属。通过与杂质对照品的色谱保留时间,一、二级质谱比较,对已知杂质进行了鉴定;借助总结出来的氨基糖苷类抗生素的特征裂解碎片离子和质谱裂解规律,根据一级、二级质谱或多级质谱信息,对无杂质对照品的未知杂质结构进行推导,结果显示,庆大霉素C1a样品中含有庆大霉素A、庆大霉素B、西索米星、小诺霉素、威达米星或它们的同分异构体和同系物,并含有庆大霉素C1a或上述杂质的降解产物。结论:该方法可以用于庆大霉素C1a的工艺优化和质量控制。

高纯度庆大霉素C1a游离碱制备工艺研究

目的探索用大孔吸附树脂层析法及盐析结晶法精制纯化硫酸依替米星起始物料—庆大霉素C1a成品(HPLC纯度91%~93%),从而减少由起始物料引入依替米星杂质的水平。方法以庆大霉素C1a吸附量和庆大霉素C1a纯度为指标,考察大孔吸附树脂纯化庆大霉素C1a的吸附性能和洗脱参数;以盐析后庆大霉素C1a样品纯度和盐析收率为指标,考察盐析工艺最佳温度、溶剂、酸的添加量及酸的种类。结果获得较优的树脂NM200,获得较优的解析液pH值为2.0和流速0.5BV/h。经过优化后,纯化收率从65%提高至74%。通过盐析结晶条件筛选和优化,确定室温先加溶剂后加硫酸(pH6.5)和甲醇与乙醇1:2的条件较优,优化后获得的庆大霉素C1a纯度达到98.2%,收率大于93%。研究了多种无机酸盐析结晶的情况,发现磷酸、硫酸和碳酸条件下能析出白色固体。结论通过比较大孔吸附树脂和盐析结晶的纯化连接,组合纯化后获得的庆大霉素C1a游离碱纯度大于99.0%,比纯化前样品提高6%以上,收率大于70%。

硫酸庆大霉素C组分的HPLC测定

采用ＨＰＬＣ法测定庆大霉素各组分的峰面积，由相对校正因子计算样品中庆大霉素Ｃ组分的含量，方法可靠，准确度高。

1,3-二-N-乙基庆大霉素C_(1a)的制备及结构确证

硫酸依替米星是重要的半合成氨基糖苷类抗生素,通常由庆大霉素C_(1a)经化学合成、分离纯化等工艺制得。本实验通过减压浓缩、高效液相制备色谱分离硫酸依替米星合成反应中的一个副产物,并运用UV、IR、~1H NMR、^(13)C NMR、DEPT等波普技术对其进行解析,实验结果确证了反应杂质的结构为1,3-二-N-乙基庆大霉素C_(1a),完善了硫酸依替米星的杂质谱。

高效液相色谱-串联质谱法检测水产品中庆大霉素C组分残留量

目的:构建一种准确高效快速检测水产品中庆大霉素C组分的高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法:样品用C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm),乙腈-0.1%五氟丙酸梯度洗脱,ESI+离子源,MRM检测模式,外标法定量。结果:在0.005~0.800 mg·L^(-1)浓度与峰面积线性良好,r≥0.9998;在5.0~100.0μg·kg^(-1)加标浓度,平均回收率在71.9%~101.0%,RSD在3.32%~8.55%,方法检出限为5μg·kg^(-1)。结论:该方法可检测水产品中庆大霉素C组分,方法回收率高、准确、灵敏、高效。

HPLC-ELSD测定硫酸庆大霉素有关物质及其C组分质量标准改进

目的建立HPLC—ELsD测定硫酸庆大霉素有关物质及改进C组分的测量方法。方法色谱柱采用耐酸的c18柱（pH适应范围0．8-8．0），流动相为0．2mol／L的三氟醋酸-甲醇（92：8）；流速为0．6mL／min；用蒸发光散射检测器检测，漂移管温度110℃，载气为2．8L／min。结果硫酸庆大霉素各组分与有关物质分离完全，可用外标法测定硫酸小诺霉素和西索米星的含量及庆大霉素C组分的含量。结论所用方法准确，灵敏度高，重现性好，可有效地控制药品的质量。

硫酸庆大霉素滴眼液质量评价

目的对国产硫酸庆大霉素滴眼液的质量现状进行评价。方法采用法定标准检验与探索性研究相结合,对国家药品计划抽验的23批次样品与调研企业收集的样品进行检验与统计分析。结果法定标准检验结果显示,23批次硫酸庆大霉素滴眼液合格率为100%。探索性研究揭示,硫酸庆大霉素滴眼液的处方仍有进一步优化的空间,优化硫酸庆大霉素滴眼液的黏度和表面张力可改善其治疗效果,选择合理的抑菌剂可减少其刺激性。同时,现行标准中缺失有关物质、庆大霉素C组分、抑菌剂含量测定及不溶性微粒等检查项;对贮藏条件的要求也不十分合理。结论目前国产硫酸庆大霉素滴眼液整体质量一般,质量标准有待提高,建议企业关注处方合理性。

HPLC法测定医用生物蛋白胶中硫酸庆大霉素C组分的含量

目的：建立以高效液相色谱法测定医用生物蛋白胶中硫酸庆大霉素C组分含量的方法。方法：色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB—C18，流动相为甲醇-醋酸-水（加入0．02mol·L^-1庚烷磺酸钠溶液，70：5：25），梯度洗脱，检测波长为330nm，柱温为26℃，流速为1．OmL·min^-1。结果：硫酸庆大霉素C组分间分离较好，线性范围为0．26～6．50μg（r=0．9998）；平均回收率为90．0％，RSD=0．43％；最低检测限为0．368ng。结论：本方法准确可靠、简便易行，可用于相关制荆中硫酸庆大霉素C组分的含量测定。

庆大霉素C1a生产过程中不同样品的HPLC法检测

参照美国药典USP37-NF32版,采用柱前衍生化-HPLC法测定庆大霉素C1a(1)对照品及生产阶段的不同样品。在检测经离子交换树脂HZ-732富集后的洗脱液样品B时出现1个新的杂质峰,且检测所得1的浓度明显偏低。经LCMS分析,推测该杂质为邻苯二甲醛(OPA)不足的情况下1与巯基乙酸在碱性条件下的结合产物。经方法优化,通过稀释样品、增加衍生化试剂量及增加衍生化试剂中OPA的量,均可准确检测不同样品中1的浓度和纯度。向衍生化试剂中增加OPA,更适用于1发酵生产过程中不同阶段样品的检测。