一种DNA侧翼序列分离技术——TAIL-PCR

在分子生物学研究中,基因克隆和分子杂交的探针制备等操作常需分离与已知DNA序列邻近的未知序列,热不对称交错PCR(简称TAIL PCR)反应技术能够较好地解决上述难题。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环,利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段,所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。TAIL PCR技术简单易行,反应高效灵敏,产物的特异性高,重复性好,能够在较短的时间内获得目标片段,已经成为分子生物学研究中的一种实用技术。笔者综述了TAIL PCR反应的原理、引物设计、反应条件设置及产物分析。

MR 3D-FIESTA序列对腰椎间盘突出症腰骶神经根受压程度的评估价值

目的探究MR 3D-FIESTA序列对腰椎间盘突出症腰骶神经根受压程度的评估价值。方法选择2019年10月至2021年4月韶关市中医院收治的120例因腰椎间盘突出致腰腿痛的患者为研究对象,所有患者分别行常规序列、三维双激发平衡式稳态自由进动(3D-FIESTA)序列、迭代最小二乘估算法水脂分离技术(IDEAL)序列扫描。从受压神经显示清晰度、图像质量和对比噪声比方面比较3D-FIESTA序列和IDEAL序列的成像效果。结果3D-FIESTA序列显示腰骶神经根、受压神经根上的清晰度评分分别为(4.64±0.76)分、(4.51±0.64)分,明显高于IDEAL序列的(4.01±0.53)分、(3.89±0.51)分,差异均有统计学意义(P<0.05);IDEAL序列能够清晰显示椎间盘图像,而3D-FIESTA序列重建图像除了能够清晰显示椎间盘图像外,还能清晰显示脊神经与椎间盘的空间位置关系;3D-FIESTA序列、IDEAL序列的图像质量分级比例Ⅰ~Ⅲ级分别为75.83%、22.50%、1.67%和51.67%、37.50%、10.83%,3D-FIESTA序列的图像质量分级明显优于IDEAL序列,差异有统计学意义(P<0.05);3D-FIESTA序列的腰骶神经根-椎体信噪比(SNR)、腰骶神经根-椎体载噪比(CNR)分别为51.46±6.46、36.09±5.71,明显低于IDEAL序列的117.25±18.03、73.26±9.86,腰骶神经根-脑脊液SNR、腰骶神经根-脑脊液CNR分别为269.18±28.48、284.23±21.77,明显高于IDEAL序列的216.26±20.43、103.57±14.79,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论3D-FIESTA序列能够清晰显示脊神经的形态、走行及其与腰椎间盘的相对空间关系,对于腰椎间盘突出症腰骶神经根受压程度的诊断和评估具有重要指导意义。

MRI检测肝脏脂肪浸润程度的研究

目的研究MRI多回波水脂分离技术(IDEAL-IQ)序列定量测定的肝脏脂肪含量与肝脏纤维弹性值的相关性,探讨肝脏脂肪含量和血清肝纤维化相关6项指标[纤维连接蛋白(FN)、透明质酸、3型前胶原N端肽、Ⅳ型胶原蛋白(C-Ⅳ)、层粘连蛋白、人结合珠蛋白]在非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者中的价值。方法回顾性分析231例临床考虑NAFLD并未经过任何治疗的患者,行超声实时剪切波弹性成像(SWE)检查并在1周内行IDEAL-IQMRI检查,由2名医师分别测量肝脏脂肪分数,并分析两者间的一致性,对两名医师测出的肝脏脂肪含量的平均值与肝脏纤维弹性值做相关性分析。对其中69例患者的血清肝纤维化相关6项指标分别与肝脏纤维弹性值以及肝脏脂肪分数之间的相关性进行分析,建立多重线性回归模型。结果2名MR医师测量肝脏脂肪分数具有良好的一致性(r=1.000,P<0.001)。肝脏脂肪含量与肝脏纤维弹性值的相关系数=0.786(P<0.001),其中69例患者的血清肝纤维化相关6项指标分别与肝脏纤维弹性值、肝脏脂肪含量的相关分析显示肝脏纤维弹性值与C-Ⅳ呈正相关并得出回归模型为Y=0.116C-Ⅳ+2.75,P<0.001;肝脏脂肪含量与FN呈正相关并得出回归模型为Y=-10.081+0.103FN,P<0.001。结论MRIIDEAL-IQ序列测定的肝脏脂肪含量与超声测定肝脏纤维弹性值呈正相关性,肝脏纤维弹性值和肝脏脂肪含量分别与血清C-Ⅳ及FN呈正相关,可为临床评价NAFLD患者肝脏硬度提供重要信息。

Isolation, cloning and sequencing of AFLP markers related to disease-resistance traits in Fenneropenaeus chinensis

Amplified fragment length polymorphisms (AFLP) technique was used to analyze the fingerprint- ing of four successive generations of Fenneropenaeus chinensis to reveal their disease-resistance traits. Some loci showed quite different genetic frequencies due to artificial selection, which implied that these fragments were putative markers related to the disease-resistance trait. We developed a simple and effective method to fur- ther characterize these AFLP fragments. Specific AFLP bands were cut directly from polyacrylamide gels, re-amplified, cloned and sequenced. Eight putative genetic markers were sequenced and their sizes ranged from 63 to 209 bp. The sequences were submitted to dbGSS (database of Genome Sequence Survey); and the BLAST analysis showed low similarity to the function genes, indicating these markers were tightly linked to a dis- ease-resistance trait but were not functional genes.