起始密码下游序列与16srRNA3′端序列的匹配性对基因表达效率的影响

目的 :研究起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配关系对基因表达效率的影响。方法 :我们一方面对人IL_2、人IL_8、人IL_6 ,人GM_CSF、人G_CSF、人IL_1ra、人IL_9等全长cDNA序列及 5′末端局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列进行匹配性进行分析 ,寻找序列匹配性与表达效率间的关系 ;另一方面 ,对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′端序列进行沉默突变 ,增强其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列间的匹配性 ,并克隆入pKpL4表达型质粒载体 ,通过大肠杆菌进行表达 ,实验验证序列匹配性与基因表达效率的关系。结果 :分析发现起始密码下游局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482核酸匹配性越好 ,则目的蛋白表达效率越高 ;目的基因编码区内与 16srRNA 3′ +146 9——— +1482间的最大匹配区域越靠近 5′末端 ,目的蛋白表达效率越高。通过对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′末端序列进行沉默突变 ,改善其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列的匹配性后 ,目的蛋白的表达量均呈不同程度地提高。结论 :提高起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配性 ,可增强目的基因的表达效率。

头颅磁共振DWI-FLAIR序列的不匹配性在急性缺血性脑卒中患者中的检测及临床意义研究

目的探讨急性缺血性脑卒中患者头颅磁共振DWI-FLAIR序列不匹配性的临床检测意义。方法筛选2015年5月至2015年12月收治的急性缺血性脑卒中患者32例,作为研究对象。所有患者均经影像学及临床症状检查确诊为急性缺血性脑卒中,根据患者卒中发病时间以及DWI-FLAIR序列信号的改变将其分为0-4.5 h组、4.5-6.0 h FLAIR阳性组与4.5-6.0 h FLAIR阴性组,观察各时相DWI-FLAIR不匹配的敏感度与特异度,并比较不同时相患者溶栓治疗效果及DWI-FLAIR序列不匹配性在溶栓指导治疗中的应用价值。结果急性缺血性脑卒中患者发病后0-3 h、0-4.5 h组患者DWI-FLAIR不匹配敏感度为67.1%、87.5%,特异度为40.6%、74.5%,阳性预测值77.9%、87.0%,阴性预测值为76.9%、43.5%;溶栓治疗效果比较中DWI-FLAIR阴性组患者溶栓后再通率明显高于DWI-FLAIR阳性组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;DWI-FLAIR阴性组溶栓后NIHSS评分、mRs评分明显低于DWIFLAIR阳性组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论急性缺血性脑卒中患者行头颅磁共振检查,DWI-FLAIR不匹配性在指导不同发病时间患者溶栓治疗中的具有重要意义,对于发病后4.5-6.0 h FLAIR阴性患者仍可进行静脉溶栓治疗,DWI-FLAIR可作为一种客观的影像学指标判断患者发病时间范围。

原核表达中优化起始密码下游序列的软件设计与实现

在原核表达中影响外源基因表达效率的因素有很多,这其中翻译起始效率起了非常重要的作用。翻译起始效率又主要受SD序列、SD序列与起始密码子之间的间距、DB(DownstreamBox)序列、mRNA翻译起始区(TIR)的二级结构和稀有密码子等因素的影响。主要针对DB序列和5′端稀有密码子的优化设计了软件。通过计算机对序列进行分析比对后,按照匹配碱基数、匹配位置、密码子使用频率平均值的顺序进行排序,给出一些优化序列,并给出了软件算法。

Development of a SCAR marker for male gametophyte of Gracilariopsis lemaneiformis based on AFLP technique

The red alga Gracilariopsis lemaneiformis(Bory) is an economically valuable macroalgae. As a means to identify the sex of immature Gracilariopsis lemaneiformis, the amplifi ed fragment length polymorphism(AFLP) technique was used to search for possible sex- or phase-related markers in male gametophytes, female gametophytes, and tetrasporophytes, respectively. Seven AFLP selective amplifi cation primers were used in this study. The primer combination E-TG/M-CCA detected a specifi c band linked to male gametophytes. The DNA fragment was recovered and a 402-bp fragment was sequenced. However, no DNA sequence match was found in public databases. Sequence characterized amplifi ed region(SCAR) primers were designed from the sequence to test the repeatability of the relationship to the sex, using 69 male gametophytes, 139 female gametophytes, and 47 tetrasporophytes. The test results demonstrate a good linkage and repeatability of the SCAR marker to sex. The SCAR primers developed in this study could reduce the time required for sex identifi cation of Gracilariopsis lemaneiformis by four to six months. This can reduce both the time investment and number of specimens required in breeding experiments.