应用银染端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞系端粒酶活性的研究

观察人肝癌细胞的端粒酶活性。应用非放射同位素银染的端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ），检测６株人肝癌细胞株（ＢＥＬ－７４０２，ＨｅｐＧ２，ＱＧＹ－７７０１，ＱＧＹ－７７０３，ＳＭＭＣ－７７２１，ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）的端粒酶活性，同时检测ＲＮａｓｅ处理的阴性标本。６株人肝癌细胞的端粒酶均为阳性。

检测端粒酶活性的端粒重复序列扩增法的初步建立

端粒是真核线性染色体末端结构,人端粒DNA由(TTAGGG)n重复序列组成.端粒酶是核糖核酸蛋白酶,具有RNA依赖的DNA合成酶活性,可重新合成端粒的重复序列.最近研究证实端粒及端粒酶与细胞衰老及肿瘤相关,是近年来生物学研究的热点.检测端粒酶活性是研究端粒酶的基本方法,同时具有潜在的临床诊断价值.本文拟应用最新的端粒重复序列扩增法(Telomeric Repeat AmplificationProtocal,TRAP),检测肝癌细胞端粒酶活性.

应用端粒重复序列扩增法检测原发性肝癌组织端粒酶活性的研究

目的:检测原发性肝癌及癌旁组织端粒酶活性并探讨端粒酶活性在原发性肝癌中的临床意义。方法:应用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测36例原发性肝癌及癌旁组织和3例正常肝组织端粒酶活性。结果:36例原发性肝癌组织有29例(80.6%)阳性。而36例癌旁组织只有4例(11.1%)阳性。3例正常肝组织均阴性。4例癌旁组织端粒酶阳性的患者均于术后半年内复发。结论:原发性肝癌癌旁组织端粒酶活性可望成为预测原发性肝癌术后复发的重要指标,对患者术后治疗方案的选择以及术后随访观察具有一定的指导意义。

银染端粒重复序列扩增法检测肺癌端粒酶活性

目的 评价端粒酶能否作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物。方法 采用改良的银染端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测 34例人肺癌手术标本 (包括癌组织、相应癌旁组织与正常组织标本各 34份 ,2 8个相应淋巴结 )的端粒酶活性。另有肺囊肿、肺炎性假瘤各 3例作为对照。结果 88.3% (30 / 34 )的肺癌癌组织端粒酶阳性 ,正常组织全部阴性。结论 端粒酶可以作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物 ,改良的银染TRAP法成本低、污染少 。

银染端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性及其临床应用

目的 建立银染端粒重复序列扩增法(TRAP)测定肿瘤细胞的端粒酶活性.方法:将银染与TRAP相结合,测定了人肿瘤细胞株及穿刺细胞标本的端粒酶活性.结果:人肿瘤细胞株端粒酶活性为阳性,35例病理诊断为恶性肿瘤的穿刺标本中,33例端粒酶活性阳性,12例良性病变均为阴性.结论:银染TRAP法是特异,敏感及快速的端粒酶活性的检测方法,提示该方法可成为恶性肿瘤的诊断指标之一.

银染端粒重复序列扩增法检测肝癌模拟肝穿组织端粒酶活性的研究

目的:探讨细针穿刺肝活检组织行端粒酶活性检测用于肝细胞癌(HCC)诊断的可行性。方法:HCC共28例,每例HCC肿瘤切除后立即行肝肿瘤模拟细针穿刺。应用非放射性同位素银染的端粒重复序列扩增法(TRAP),分别对28例模拟肝穿组织和28例肿瘤切取组织行端粒酶活性检测。结果:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织的端粒酶检测结果完全一致,阳性率均为82%(23/28)。结论:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织在HCC端粒酶活性检测方面具有同等的效果。该结果提示,B超引导下经皮肝穿刺活检行端粒酶活性检测在HCC的诊断、治疗效果评价和预后的判断方面具有一定的应用前景。

端粒重复序列扩增法检测胃癌组织中端粒酶活性研究

目的 :研究胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织中的端粒酶活性 ,探讨其作为胃癌肿瘤标记物的可能性。方法 :采用TRAP-ELISA法检测了 5 1例胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织的端粒酶活性表达。结果 :5 1例胃癌组织中端粒酶阳性表达 48例( 94.1%) ,癌旁组织为 17例 ( 3 3 .3 %) ,远端正常胃组织未检测出端粒酶活性。结论 :端粒酶是特异性较强的恶性肿瘤基因标志 ,有可能成为胃癌早期诊断和治疗的理想标记物。

端粒重复序列扩增法结合微孔板杂交法定量检测端粒酶活性

目的探讨定量检测端粒酶活性的非放射性检测方法。方法将端粒重复序列扩增测定法（ＴＲＡＰ）与微孔板杂交 相结合建立了非放射性检测方法，对３例正常肝组织和４例肝癌患者治疗前后的肝癌组织、瘤旁组织、肝癌凋亡组织 进行检测。结果肝癌组织具有比较高的端粒酶活性，而正常肝组织和瘤旁组织无此酶活性，肝癌凋亡组织端粒酶活性 显著降低。结论 该定量分析方法简单、灵敏、特异性强，可以比较准确地反映组织的端粒酶活性状态。

检测人结肠癌组织端粒酶活性的TRAP方法研究

对检测人结肠癌组织端粒酶活性的端粒酶重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）进行了研究．当Ｍｇ２＋浓度为１８ｍｍｏｌ／Ｌ、退火温度为５５℃时，能得到可靠的检测结果．影响检测结果可靠性的另两个因素是抽提物的反应用量和阳性片段的污染．

移植后巨细胞病毒感染的诊断方法及其优劣性比较

巨细胞病毒(CMV)感染是移植后患者死亡的最重要的感染性原因。敏感性及特异性强的CMV检测方法在CMV感染的防治方面可起到关键作用。本文对目前移植后CMV感染的诊断方法血清学方法、培养法、抗原血症法、聚合酶链反应、核糖核酸序列扩增法和核酸杂交法等作一综述。

微孔板杂交法检测端粒酶活性

目的 利用微孔板反向杂交法对端粒酶重复序列扩增法加以改进 ,建立一种快速、简便、量化的端粒酶活性检测方法。方法 将端粒重复序列扩增法 (TRAP)与微孔板杂交法相结合 ,并采用蜡珠包埋活性酶及引物的方法 ,使TRAP反应单管一次完成。结果 与TRAP法相比 ,该方法检测鼠骨髓瘤细胞株的敏感性为 10个细胞 ,检测肝癌标本为阳性 ,经RNase处理及加热处理的细胞和标本及正常细胞均呈阴性。结论 应用该方法可简便、快速检测端粒酶活性 ,1日内完成并可单人份操作 ,对临床试剂的建立具有一定的参考价值。

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA ,(humantelomeraseRNA ,hTR)的cDNA探针 ,分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法 (TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。 18例活检胃癌组织及 4 5例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为 10 0 % ,相应TRAP分析的阳性率分别为 88 89%、 86 6 7% ,低于RNA斑点杂交 (P <0 0 5 )。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA ,具有高度的敏感性和特异性 。

恶性淋巴瘤中端粒酶活性及其意义

研究淋巴瘤细胞株及淋巴瘤组织中的端粒酶活性及其在淋巴瘤发生过程中的作用。方法 :用端粒重复序列扩增法 (TRAP)结合银染 ,检测 3株人淋巴瘤细胞株、2 7例淋巴瘤和 4例淋巴结良性病变的端粒酶活性。结果 :3株人淋巴瘤细胞株均有端粒酶活性 ,2 7例淋巴瘤组织标本中 2 6例端粒酶阳性 ,占 96 % ,4例淋巴结良性病变也均显示不同程度的端粒酶活性 ,其中 2例活性较弱 ,低于淋巴瘤。结论 :恶性淋巴瘤中存在端粒酶的活性表达 ,但有必要采用定位研究来识别具有端粒酶活性的细胞 。

端粒酶检测在胰腺癌诊断中的价值

目的:研究手术标本端粒酶检测在胰腺癌诊断中的价值。方法:采用端粒酶重复序列扩增法和酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)检测20例胰腺癌细胞株和20例胰腺囊肿细胞株中端粒酶活性。结果:胰腺癌手术标本端粒酶阳性率为75%(15/20),胰腺囊肿手术标本端粒酶阳性率为65%(13/20),两者差异无显著性。结论:胰腺癌手术标本中有较高的端粒酶表达,但其与胰腺囊肿中端粒酶表达差异无显著性,端粒酶检测对于胰腺良恶性疾病的鉴别诊断无帮助。

INF-γ和TGF-β_1对视网膜色素上皮细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨不同浓度的干扰素 γ(interferon γ ,INF γ)和转化生长因子 β1(trans forminggrowthfactor β1,TGF β1)对人视网膜色素上皮 (RPE)细胞端粒酶活性的影响。方法 使用不同浓度的INF γ和TGF β1处理RPE细胞 2 4h后 ,采用端粒重复序列扩增法定性、定量检测上述细胞因子作用下的RPE细胞端粒酶活性。结果 随着上述细胞因子浓度的增加 ,RPE细胞端粒酶活性逐渐降低 ,且呈剂量依赖性 ,2种细胞因子具有协同作用。结论 INF γ和TGF β1对RPE细胞端粒酶活性具有抑制作用 ,细胞因子有可能成为治疗增生性玻璃体视网膜病变的新靶点。

高三尖杉酯碱对HL-60细胞端粒酶量的抑制效应

目的 研究高三尖杉酯碱 (HHT)对HL 6 0细胞端粒酶活性的影响及诱导凋亡作用。方法 采用端粒重复序列扩增法 (TRAP) 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HL 6 0细胞的端粒酶量变化 ,用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖凝胶电泳 ,流式细胞术检测和DNA片段原位末端标记 (TUNEL)法检测了细胞凋亡现象。结果 5～ 5 0 0 μg·L- 1HHT处理HL 6 0细胞 0～ 4 8h ,HL 6 0细胞端粒酶量呈剂量依赖性和时间依赖性下降。同时 ,HL 6 0细胞发生了凋亡。结论 HHT有降低HL 6 0细胞的端粒酶量 ,诱导细胞凋亡作用。

端粒酶活性在非小细胞肺癌不同组织细胞中表达的研究

目的 对比研究端粒酶活性在非小细胞肺癌癌组织、癌旁组织、血液及痰液中的表达 ,以了解其临床意义。 方法 应用聚合酶联反应 -端粒重复序列扩增法 (PCR -TRAP)检测30例肺癌手术患者癌组织、癌旁组织、血液及痰液中的端粒酶活性 ,并以25例肺部良性疾病手术患者为对照组。结果 肺癌患者肺癌组织端粒酶活性阳性率83.3% (25/30) ,癌旁组织端粒酶活性阴性 ,外周血中端粒酶活性阳性率33.3 % (10/30) ,痰液标本中端粒酶活性阳性率56.7% (17/30)。对照组正常肺组织标本和外周血中端粒酶活性均阴性 ,痰液标本中端粒酶活性阳性率24.0% (6/25) ;两组病变组织、血液和痰液中端粒酶活性阳性率的差别均有显著性意义 (均P<0.05)。 结论 (1)非小细胞肺癌患者在肺癌组织、血液及痰液中均有端粒酶活性表达 ,其活性表达强度依次为肺癌组织、痰液、血液。 (2)痰液中端粒酶活性检测对肺部良恶性疾病的鉴别具有一定的诊断意义。

人类恶性肿瘤癌旁组织中端粒酶活性的表达意义

目的:探讨端粒酶在人类常见恶性肿瘤癌组织和癌旁组织中的活性表达及其表达的临床意义。方法:采用端粒重复序列扩增PCR酶联免疫吸附法检测了人胃癌11例,结肠癌14例,肝癌4例,乳腺癌9例及其相应的38例癌旁组织中的端粒酶活性。结果:在38例肿瘤组织中,有31例端粒酶呈阳性(81.6％);38例癌组织中,有8例阳性(21.1％)。癌组织和癌旁组织中端粒酶的表达均与肿瘤临床病理特征无关。癌旁组织存在端粒酶阳性表达的病例,病理上多伴有不典型增生或癌细胞的浸润转移。结论:端粒酶本质上是细胞增殖活性而非肿瘤的分子水平标记物;对癌旁组织中端粒酶阳性的患者加强观察有助于早期发现某些术后再发或复发的肿瘤。