序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)结合血清学在疑难血型鉴定中的应用

目的 探讨血型血清学与序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)基因分型在ABO疑难血型鉴定中的作用。方法 用血清学分析鉴定的ABO疑难血型标本80例,同时采用PCR-SSP法进行基因分型,结合两种方法学结果,确定血型及制定输血策略。结果 血清学鉴定亚型40例,其他原因引起的抗原抗体缺失或减弱正常血型40例;PCR-SSP法基因分型亚型41例(3例二者结果不一致:血清学Ael型1例,基因分型O2O2;血清学O型1例,基因分型BO1;血清学A型1例,基因分型AB),正常血型39例。结论 使用血清学结合基因分型鉴定ABO疑难血型具有重要意义。

套式序列特异引物聚合酶链反应技术的建立及其在HLA配型中的应用

建立套式序列特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型。利用一对外引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ１第２外显子部分片段（２８３ｂｐ），作为第２次扩增的模板，ＰＣＲ循环参数：９８℃、５分钟；９４℃、６０秒，７２℃、３０秒，６３℃、３０秒，１５个循环；利用各组特异性引物进行第２次扩增，产生与血清学相对应的ＨＬＡ－ＤＲ型别，ＰＣＲ循环参数：９４℃、３０秒，７２℃、３０秒，６０℃、３０秒，２０个循环。结果表明本方法特异性好。在７个家庭２０例受试者中进行了应用，与血清学方法比较，两方法确定出的型别，８０％一致，２０％不同，另有血清学为“空”的８个型别，基因分型全部为ＤＲ９阳性。

先天性脊柱骨骺发育不良的产前快速分子诊断

目的:对先天性脊柱骨骺发育不良提供1种快速分子产前诊断技术。方法:对该患者于孕14周进行羊膜囊穿刺,获取羊水20 ml,提取羊水细胞基因组DNA。选用3个短串连重复(STR)序列位点,进行荧光PCR检测,以排除母源细胞污染。在此基础上,对COL2A1基因的第23外显子进行扩增,并以此为模板,针对COL2A1基因的第23外显子1510G→A的突变进行SSP-PCR。根据是否存在特异性的扩增条带进行判断,对初次扩增的产物测序,以证实巢式SSP-PCR的结果。结果:对D13S 317、D18S51和D21S11位点的STR检测结果排除母源细胞的污染。羊水样本仅在野生型反应管中有扩增产物,表明胎儿是COL2A1基因的第23外显子1510 G的纯合子,未带COL2A1基因的第23外显子1510G→A的突变。测序结果与SSP-PCR结果一致。结论:SSP-PCR技术快速简便、敏感特异,可作为该突变的快速分子诊断。其他已知点突变遗传病的快速分子诊断也可以考虑使用SSP-PCR技术进行。

中国人群HLA-B等位基因与HIV-1感染者疾病进程相关性研究

目的：通过对中国人群HIV-1感染典型进展者（Typical progressors，TP）和长期不进展者（Long-term nonpmgressors，LTNP）HLA-B等位基因的分布频率的研究，探讨中国人群HLA-B等位基因与HIV-1感染者疾病进程的关系。方法：采用整群随机抽样方法从河南、吉林、辽宁、新疆、云南五省收集356例未经抗病毒治疗的HIV-1感染者血样，其中289例典型进展者和67例长期不进展者。应用聚合酶链反应-序列特异性引物技术（PCR-SSP）对其HLA-B等位基因特异性进行检测，并分析了他们的等位基因纯合子情况及Bw4／Bw6血清型，比较二组差异。结果：发现4个HLA-B等位基因位点在中国HIV-1感染人群中的表达频率较高，分别是HLA-B^＊13（TP：11．8％；LTNP：15．7％）、HLA-B^＊15（TP：17．3％；LTNP：8．2％）、HLA-B^＊40（TP：12．5％；LTNP：17．9％）、HIA-B^＊51（TP：9％；LTNP：10．4％）。其中长期不进展组HLA-B^＊67的等位基因频率为4．5％，典型进展组HLA-B^＊67的等位基因频率为1．2％，前者明显高于后者，具有显著性差异（P=0．022，OR=0．26，95％CI=0．08-0．89）。典型进展组的B^＊15的等位基因频率（17．3％）显著高于长期不进展组（8．2％）（P=0．009，OR=2．34，95％CI=1．18～4．76）。结论：HLA-B^＊67等位基因可能与延缓中国HIV-1感染者疾病进程相关，HLA-B^＊15等位基因可能与加速中国HIV-1感染者疾病进程相关。

1例成骨不全患者Ⅰ型胶原基因突变的检测

目的对1例成骨不全(OI)患者Ⅰ型胶原基因(COL1A1和COL1A2)进行基因突变检测,为研究中国人群的OI基因突变特点提供线索。方法患者具有OI典型的蓝巩膜、易骨折、牙本质发育不全等临床表现,临床诊断为OI,提取患者外周血基因组DNA,对所有启动子区、外显子及外显子-内含子边界区进行DNA测序,通过序列特异引物PCR(PCR-SSP)法进一步验证,以患者的父母、妹妹及200例体检健康者作为对照。结果 DNA测序结果显示,OI患者COL1A1基因45号外显子发生单核苷酸替代突变(c.3263 G>A,p.Gly1088Glu),而患者的父母、妹妹及200例健康对照者未发现相同的突变位点。同时PCRSSP也证明了此位点的杂合性。结论 c.3263 G>A突变位点是一个OI患者COL1A1基因的新突变位点,与OI临床表型具有一定相关性。

中国白族人群MBL基因SNP及其单倍型与基因型的研究

目的:研究中国云南白族人甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因单核苷酸多态性(SNP)及其单倍型与基因型。方法:对MBL基因启动子区SNP位点550G/C(称H/L等位基因)、221C/G(X/Y)、+4C/T(P/Q)已明确的白族DNA样本,采用序列特异性引物多聚酶链反应技术检测结构基因第一外显子点突变CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA(分别称为D、B、C等位基因,野生型即A),并分析MBL基因的单倍型与基因型。结果:只检出GGC54GAC点突变,其频率为0.100;检出的5种单倍型及其频率是:HYPA0.250、LXPA0.107、LYQA0.407、LYPA0.135、LYPB0.100;各基因型及其频率为:LYPA/LYPA0.043、LXPA/LYQA0.143、LYPA/LYPB0.014、HYPA/LYQA0.086、LYPA/LYQA0.157、HYPA/LYPA0.014、LYPB/LYQA0.143、HYPA/LYPB0.043、LXPA/LXPA0.014、HYPA/LXPA0.043、LYQA/LYQA0.143、HYPA/HYPA0.157。结论:中国白族人群MBL基因存在GGC54GAC点突变,单倍型以LYQA和HYPA为主,基因型则多见LYPA/LYQA、HYPA/HYPA、LXPA/LYQA、LYPB/LYQA和LYQA/LYQA。

中国北方汉族泛发型白癜风与HLA-DRB1等位基因的相关性

目的:探讨HLA-DRB1等位基因与中国北方汉族泛发型白癜风的相关性。方法:采用聚合酶链反应-序列特异引物(PCR-SSP)技术检测34例北方汉族泛发型白癜风患者的HLA-DRB1等位基因。结果:与262例正常对照组相比较,泛发型白癜风患者HLA-DRB1*0701/02、DRB1*1201/02基因频率显著增高(Pc<0.0001),HLA-DRB1*0901、DRB1*11基因频率降低(但经校正后Pc>0.05);有明确家族史的患者HLA-DRB1*1201/02基因频率显著增高(Pc<0.0001);无家族史者HLA-DRB1*0701/02基因频率显著升高(Pc<0.0001),DRB1*1201/02基因频率显著增高(经校正后Pc>0.05),DRB1*0901基因频率降低(经校正后Pc>0.05)。结论:中国北方汉族人群,HLA-DRB1*0701/02、DRB1*1201/02等位基因可能与泛发型白癜风的发病有关,而DRB1*0901、DRB1*11等位基因可能是防止其发病的“保护因子”,为进一步揭示泛发型白癜风的易感基因及免疫遗传发病机制提供线索。

MBL基因H/L、P/Q位点多态性与新疆维吾尔族结核病的相关性研究

目的探讨MBL基因H/L、P/Q位点的多态性是否与新疆维吾尔族人群结核病发病相关。方法通过使用引物序列特异性PCR（PCR-SSP）的方法分别对226例新疆维吾尔族活动性肺结核患者及231例有结核分枝杆菌接触史的新疆维吾尔族健康者研究MBL基因的H/L、P/Q多态性位点与新疆维吾尔族人群结核病易感性的关系。结果新疆维吾尔族结核病例组中MBL-H/L突变基因型频率与新疆维吾尔族健康对照组突变基因型频率分别为25.66%、18.18%,差异无统计学意义（OR=1.600,95%CI：1.020～2.511,P=0.040,Pc=0.052〉0.05）。新疆维吾尔族结核病例组中MBL-P/Q突变基因型频率与新疆维吾尔族健康对照组突变基因型频率分别为10.62%、10.82%,差异无统计学意义（OR=0.979,95%CI：0.541~1.797,P=0.050,Pc=0.994〉0.05）。MBL-AB等位基因型与MBL-HL等位基因在病例组的相交系数为0.018,P值为0.006〈0.05。新疆维吾尔族人群MBL-A/B,H/L,P/Q之间测出4个单倍体型：HPA,LPA,LPB,LQA。结论新疆维吾尔族人群中MBL基因H/L、P/Q多态性与结核病易感性无明显相关性。新疆维吾尔族人群MBL-A/B,H/L,P/Q等位基因型之间存在连锁不平衡,MBL-A/B等位基因型与MBL-H/L等位基因有正向交互作用。

福建汉族急性淋巴细胞白血病及慢性粒细胞白血病HLA-DRB1基因分析

目的探讨HLADRB1基因多态性与急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性粒细胞白血病(CML)之间的关联。方法用聚合酶链反应序列特异引物(PCRSSP)方法,对32例ALL、33例CML患者和104例健康志愿者的HLADRB1基因进行分型并分析HLADRB1基因的分布。结果与正常对照组相比,ALL患者的HLADRB106的基因频率明显增高,为15.63%,RR=3.84,χ2=8.01,P<0.001;CML患者的HLADRB109的基因频率明显增高,为24.24%,RR=3.14,χ2=7.82,P<0.01,结论HLADRB106与急性淋巴细胞白血病有关联,HLADRB109与慢性粒细胞白血病有关联。

SSP-PCR方法检测HLA-B27基因在AS早期诊断中的临床应用

目的 验证分子学方法序列特异引物聚合酶链反应（SSP-PCR）在强制性脊柱炎（AS）早期诊断中的临床应用.方法 收集陕西省人民医院2013年1月～12月疑似强直性脊柱炎患者135例,分别采用SSP PCR方法检测全血人类白细胞抗原B27位点（HLA-B27）和进行影像学骨盆、骶髂关节的X线、CT或者MRI检查,比较SSP PCR方法和影像学方法诊断的一致性及差异性.结果 疑似患者用SSP PCR方法检测HLA-B27的阳性检出率为37.0％,而影像学方法的诊断异常率为23.7％,SSP-PCR方法的阳性率较影像学方法高出13.3％.经配对X2检验,X2=9.529,P=0.003,＜0.01,两种方法阳性检出率差异具有统计学意义.结论 分子学方法检测HLA-B27基因能够用于早期预测AS的发生.

中国南方汉族人A及AB血型的基因亚型研究

目的 探讨中国南方汉族人A及AB血型的基因亚型分布，为实现跨ABO血型器官移植提供理论依据。方法取健康南方汉族成人体检者A型血330份，AB型血140份，提取DNA，采用序列特异引物聚合酶链反应（PCR—SSP）检测其基因亚型。将4种引物混合物同步扩增，根据PCR—SSP反应产生的特异性阳性条带判定相应的基因亚型。结果A型样本分型成功327份，AB型样本分型成功139份。A型血基因亚型以A／A201、A／O及A201／O较常见，占95％以上，而A201／A201及A／A不到5％；AB型血中A／B及A201／B基因亚型所占的比例较为接近，分别为54％和46％。结论中国南方汉族人A型血存在多种基因亚型，其特点明显不同于欧美白人，不同亚型之间的抗原性差异尚需要进一步研究。

胚胎卵巢移植的免疫学研究

目的 :探讨在胚胎卵巢移植中 ,组织抗原的配型、受体的免疫学反应及其卵巢存活、发育、功能和治疗前景的关系。方法 :分别以血清学和PCR SSP方法进行供、受体的HLA A、B和DR抗原分型 ,以ELISA方法测定术后受体血清中抗卵巢抗体 ,以B超监测卵巢和以放射免疫方法测定受体血清中FSH、LH、E2和P的水平。结果 :供、受体之间至少 2个HLA抗原位点相同 ,移植的 4例卵巢全部存活 ,卵巢发育良好 ,FSH、LH水平下降 ,E2、P水平上升 ,但 2例受体血清抗卵巢抗体阳性。结论 :胚胎卵巢移植有较好的前景。

新疆维吾尔族人自然长寿与HLADRB、ACE基因的关联分析

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)DRB基因及血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与新疆维吾尔族人自然长寿的关系。方法研究样本分为4组:第1组年龄≥100岁;第2组年龄为90～99岁;第3组年龄为70～90岁;第4组为65～70岁自然死亡者。分别应用聚合酶链反应序列特异引物法(PCRSSP)、单链构象多态性(SSCP)分析和直接测序技术对各组进行基因分型。结果百岁组HLADR1的频率明显高于对照组(分别为9.5%和1.9%,P<0.05);HLADR6(14)的频率也明显高于对照组(分别为9.5%和0.9%,P<0.05);HLADR6的频率明显高于其余3组;HLADR4的频率明显低于对照组(分别为9.5%和23.6%,P<0.05);HLADR9的频率明显低于对照组(分别为1.2%和9.4%,P<0.05)。相关分析显示:HLADR1及ACE基因的D等位基因与长寿呈正相关,而HLADR9呈负相关。结论HLADRB基因的DR1等位基因和ACE基因的等位基因D对长寿可能有保护作用;HLADRB基因的DR9等位基因可能是不利于长寿的危险因素,HLADRB基因多态性和ACE基因多态性相互作用对长寿有协同作用。

兰州地区汉族寻常性、脓疱性银屑病与HLA-DRB1*0701的相关性

目的探讨兰州地区汉族寻常性、脓疱性银屑病与HLA-DRB1*0701等位基因的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异引物(PCR-SSP)法检测42例寻常性银屑病、28例脓疱性银屑病和50例健康对照者HLA-DRB1*0701等位基因频率,并相互比较。结果寻常性银屑病患者组及脓疱性银屑病患者组HLA-DRB1*0701等位基因频率分别(54.8%,46.4%)与正常对照组(22.0%)比较差异均有显著性(P<0.05)。结论HLA-DRB1*0701等位基因可能是兰州地区汉族寻常性、脓疱性银屑病的遗传标志。

RhD变异型分子生物学特征及其临床意义

目的探讨RhD变异型的分子生物学特征,为临床安全输血和预防新生儿溶血病提供依据。方法采用血清学方法检测无偿献血者个体RhD抗原,鉴定RhD变异型个体血清中抗体的性质;使用聚合酶链反应序列特异引物方法检测RhD变异者RHD基因,并观察其基因变化情况。结果 RhD变异型个体的基因分型结果为D3～D6外显子缺失,表现为RHD-CE(3-6)-D,即DⅥc型。结论 RhD变异型应通过分子生物学方法准确定型,避免临床错误输血及其引发的输血反应。

兰州地区汉族寻常型、关节病型银屑病与HLA-DQB1*0201相关性研究

目的:分析兰州地区汉族寻常型、关节病型银屑病与HLA-DQB1*0201等位基因的相关性。方法:采用聚合酶链反应-序列特异引物(polymerase chain reaction sequence specific primers,PCR-SSP)法检测41例寻常型银屑病患者、27例关节病型银屑病患者和52名健康对照的等位基因频率。结果:寻常型银屑病患者组HLA-DQB1*0201等位基因频率较正常对照组显著增高;关节病型银屑病患者组HLA-DQB1*0201等位基因频率较正常对照组显著增高。结论:HLA-DQB1*0201等位基因可能是兰州地区汉族寻常型、关节病型银屑病的遗传标志。

包头地区寻常型银屑病与HLA-DRB1*07等位基因的相关性研究

目的探讨包头市汉族寻常型银屑病患者与HLA-DRB1*07等位基因的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异引物(PCR-SSP)法,检测60例寻常型银屑病患者及80名健康对照者的等位基因频率,并相互比较。结果①HLA-DRB1*07与包头市汉族寻常型银屑病患者具有明显的相关性(P<0.01,OR=2.72)②HLA-DRB1*07在Ⅰ型、Ⅱ型寻常银屑病患者中分布无差异(χ2=0.16,P>0.05)。结论HLA-DRB1*07可能是寻常型银屑病易感基因或与易感基因相连锁。

包头地区寻常性银屑病与HLA-Cw* 0602等位基因的相关性研究

目的探讨包头地区汉族寻常性银屑病患者与HLACw0602等位基因的相关性。方法采用聚合酶链反应序列特异引物(PCRSSP)法,检测52例寻常性银屑病患者及60名健康对照者的等位基因频率,并相互比较。结果①HLACw0602与包头地区汉族寻常性银屑病患者具有明显的相关性(OR=3.47,P<0.01);②HLACw0602在Ⅰ型、Ⅱ型寻常性银屑病患者中分布无差异(χ2=0.006,P>0.05)。结论HLACw0602可能是寻常性银屑病易感基因或与易感基因相连锁。

L-选择素的Phe206Leu等位基因与冠心病之间的相关性

Background and Aims: The aim of this study was to assess the association between the L- selectin Phe206Leu polymorphism and coronary artery disease. Methods: A total of 322 patients(221 men and 101 women) with coronary artery disease in one or more vessels documented by angiography were studied; 157 subjects(85 men and 72 women) without atherosclerosis were included as controls. All subjects were genotyped for the L- selectin Phe206Leu gene polymorphism using polymerase chain reaction with sequence- specific primer(PCR- SSP). To assess disease severity, all patients were classified by numbers of coronary arteries with 50% stenosis. Results: A significantly increased frequency of the 206Leu mutant allele was observed in patients with coronary artery disease compared to the controls. The 206Leu allele frequency occurred in 42% of the patients with coronary artery disease compared to 30% of the controls(p< 0.009). No association was found between the severity of coronary artery disease and the L- selectin Phe206Leu polymorphism. Conclusion: Our findings suggest that carriage of L- selectin 206Leu mutant allele could contribute to susceptibility of Iranian individuals to contracting coronary artery disease.