PCR-SSP／PCR-SBT-HLA高分辨等位基因分型比较

【目的】为了预测无关捐献者干细胞移植(HSCT)后GVHD的发生及程度和选择相容的干细胞捐献者,通过同时采用PCR-序列特异性引物扩增技术(sequence specific primer,PCR-SSP)和PCR-直接碱基序列分析基因分型技术(sequence based genotyping,PCR-SBT)的方法,提高HLA基因分型的准确性和分辨水平。【方法】采用PCR-SSP和PCR-SBT分别对57份捐献者血样进行HLA-A、B和DRB1位点的高分辨等位基因分型(即识别基因的编码达到*后4位数)。【结果】PCR-SBT实验中有27份DNA的基因分析结果模棱两可,PCR-SSP实验中有10份DNA的基因分析结果模棱两可。经两种方法相互佐证实验后,57份样本均获得结果一致、清楚和精确的HLA-A、B、DRB1位点高分辨基因分型。【结论】PCR-SSP和PCR- SBT是HLA高分辨基因分析的标准方法,两种方法具有实验互补意义,若同时应用两种方法能够有效改善HLA等位基因高分辨分型的准确性和重复一致率。

中国汉族人及维吾尔族人Rh血型基因结构多态性研究与分析

目的 研究中国汉族及维吾尔族家系的RHD基因结构。方法 采用聚合酶链反应 -序列特异性引物扩增 (PCR -SSP)方法 ,对汉族和维族Rh阴性家系的D基因结构多态性进行研究。结果 中国人RHD基因结构具有多态性 ,特别是带有C的个体 ;82例RHD血清学阴性个体中 ,完整携带十个外显子的有 14个样本 ,部分携带的有 6个样本 ,8个样本为完全缺失。结论 中国汉族人群与高加索人种有着显著的不同 。

类孟买型ABO基因的检测

为研究类孟买型ABO基因的分子基础 ,在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上 ,用PCR SSP法对 5例类孟买型样本进行ABO血型的基因定型 ,并进行ABO基因第 6、第 7外显子测序。结果表明 ,本研究的 5例类孟买血型样本 ,经PCR SSP法基因定型 ,其ABO基因型分别为A10 2B1、A10 2B1、A10 2O1、A10 2B1、B1O1;经直接测序实验 ,该 5例样本的ABO基因测序结果与PCR SSP基因定型结果相一致 ,未检测出新的点突变。结论 :应用PCR SSP方法可对类孟买型个体进行常规ABO基因定型 ,具有简便、快速、可靠的特点。

徐州汉族人ABO血型及HAB分泌型基因分型研究

目的 研究徐州汉族人群ABO血型及HAB分泌型基因多态性分布特征并用于解决临床输血中血型血清学鉴定难题。方法 用快速盐析法提取外周血标本中的DNA ,用PCR SSP扩增ABO血型、HAB分泌型等位基因。结果 1 0 4名健康、无血源关系的徐州汉族人ABO血型基因频率分别为A1:0 .1 53 8,A2 :0 .0 962 ,B :0 .2 4 52 ,O1:0 .50 4 8,O2 :未检测到 ( χ2 =6.73 2 3 ,P >0 .2 5,符合Hardy Weinberg公式 ) ;HAB分泌型基因频率分别为分泌基因Se:0 .980 8,非分泌基因se:0 .0 1 92 ( χ2 =0 .0 4 2 1 ,P >0 .75,符合Hardy Weinberg公式 )。 1份用血清学方法不能确定ABO血型的标本 ,用基因分型定为BO1型。结论 PCR SSP是一种方便、可靠的血型基因定型技术 ,与血型血清学方法相比本文非分泌基因se的频率显著偏低 ,4例血清学定为非分泌型个体用该方法鉴定基因型为Se/Se,间接提示G4 4 7A和G757A突变不能完全覆盖我国汉族人群的非分泌基因se。

应用ABO和STR基因分型技术鉴定混合血样

目的 探讨应用分子生物学方法鉴别混合血液样本的价值。方法 应用 STR基因分型和 ABO基因分型方法检测 2份血样 (标本 1、标本 2 )的 1 5个 STR基因座和 ABO基因型。结果 标本 2为 A型血样 ,而标本 1为标本 2与另一 B型或 AB型血的混合样本。结论 STR和 ABO基因分型等分子生物学技术可为疑难样本的鉴定提供一种简便、快速。

异基因骨髓移植致ABO血型鉴定困难一例分析

目的对1例异基因骨髓移植术后患者进行疑难血型鉴定,保障临床输血安全。方法采用微柱玻璃珠法和试管法进行血清学试验,并结合聚合酶链反应序列特异性引物扩增(PCR-SSP)方法进行ABO基因分型。结果采用微柱玻璃珠法和试管法显示正反定型不一致,试管法增强试验后为O型,伴随血清抗体减弱,PCR-SSR基因检测表型为O型。结论根据患者血清学试验和基因检测结果,结合异基因骨髓移植史,判定血型为O型。

对HLA-B座位中低分辨中模棱两可基因分型的调查分析

人类白细胞抗原（HLA）是目前所知的最具有多态性的遗传系统之一,它位于人类第6号染色体短臂上,总长度3600 kb,约占人类基因组总长度的1/3000。整个HLA复合体共有数十个基因座,可分为HLA-Ⅰ类、HLA-Ⅱ类、HLA-Ⅲ类基因。HLA-B基因座属于HLA-Ⅰ类基因,它是HLA编码系统中最复杂,多态性最多的区域,由于其高变区各个等位基因差异仅在几个碱基,且只有极少等位基因某个高变区具有独立的碱基序列,因而交叉反应众多,故B位点往往出现定型困难［1］。尽管现有特异性寡核苷酸探针技术已经达到了中等分辨水平,但对于HLA-B座位上有些模棱两可的基因型尚不能分辨识别。作者所在实验室采用特异性寡核苷酸探针（PCR-SSO）技术对13485例HLA-B座位进行中低分辨调查分析,并对筛选出的模棱两可等位基因通过采用聚合酶链反应-序列特异性引物扩增（PCR-SSP）技术进行进一步确认。

2例Di(a+b-)血型的血清学及PCR-SSP检测分析

以往在血型血清学疑难配血中往往通过血型定型（AB0正反定型、RhDCE定型等），抗体筛查（筛选细胞、谱细胞等），抗体Coombs及吸收放散实验等步骤一般即可完成相应的配血过程。但在血清学检测条件不充分时如稀有血型抗体缺乏、谱细胞的谱型不全时等，对于稀有表型及存有高频抗原抗体的血液的配型，常规的检测方法与路径有时就显不够。此时如配合以血型基因分型检测可能的血型表型基因并判断相应的抗体存在，应当是解决问题的一个路径。我室最近在Diego系统抗体缺乏、谱细胞谱不完全的情况下，结合基因分型的方法，解决了2份存有抗高频抗原Dib抗体的定型与输血问题。