丝裂原和应激激活蛋白激酶1及cAMP反应元件结合蛋白参与小剂量氯胺酮降低小鼠缺血性脑损伤

目的探讨丝裂原和应激激活蛋白激酶1（mitogen-and stress-activated protein kinase1，MSK1）及cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）在氯胺酮保护小鼠缺血脑组织中的作用。方法80只健康成年雄性BALB／c小鼠按完全随机法分为5组[每组16只，其中包括行为学检测、氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TTc）染色10只，Westernblot检测6只]：假手术组，大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）＋生理盐水组，MCAO＋25、50、100mg／kg氯胺酮组。利用小鼠MCAO模型，结合神经行为学评分、TTC染色和Western blot等技术，检测小鼠脑皮质不同缺血区域内MSK1和CREB磷酸化水平和蛋白总量的表达，观察不同剂量氯胺酮对小鼠脑缺血损伤的影响。结果与MCAO＋生理盐水组比较，MCAO＋25mg/kg氯胺酮组小鼠脑缺血后神经行为学表现明显改善[（8．2±0．4）分比（6．7±0．3）分]，脑缺血皮质梗死体积减少[（28．3±2．0）％比（21．0±2．2）％]，水肿率降低[（10．6±0．4）％比（6．9±0．9）％]，缺血半影区内MSK1[（52．3＋7．7）％比（81．1±6．9）％]和CREB[（56．6±5．9）％比（78．6±7．1）％]磷酸化水平明显增加（P〈0．05）；而MSK1和CREB总蛋白表达量在缺血核心区和半影区内均无明显改变。MCAO＋50、100mg／kg氯胺酮组小鼠行为学表现，缺血皮质梗死体积，水肿率，及缺血半影区MSK1、CREB磷酸化水平无明显改变。结论小剂量氯胺酮降低小鼠缺血性脑损伤可能与缺血皮质半影区MSK1及其底物CREB的磷酸化水平增高有关。

丝裂原和应激激活蛋白激酶1参与丙泊酚降低小鼠缺血性脑损伤

目的探讨丝裂原和应激激活蛋白激酶1(MSK1)在丙泊酚保护小鼠缺血脑组织中的作用。方法50只健康成年雄性BALB/c小鼠采用随机数字表法分为5组,分别为假手术组(Sham);大脑中动脉阻塞(MCAO)+生理盐水组;MCAO+25 mg/kg丙泊酚组(小剂量组);MCAO+50 mg/kg丙泊酚组(中剂量组);MCAO+100 mg/kg丙泊酚组(大剂量组),每组10只,各组术后30 min经腹腔注射0.2 ml生理盐水或是等体积生理盐水稀释的丙泊酚。双盲断头收集缺血核心区(Ic);半影区(P);C,对侧皮层(C)皮层组织,利用小鼠大脑中动脉阻塞模型,结合神经行为学评分表观察(n=10)不同剂量丙泊酚对小鼠神经缺陷的影响,利用蛋白印迹(Western blot)(n=6)检测小鼠脑皮层不同缺血区域磷酸化MSK1(P-MSK1)和总MSK(T-MSK1)的表达;利用免疫荧光染色、共聚焦显微镜等技术(n=4)明确小鼠MCAO 6 h缺血皮层P-MSK1阳性细胞类型及数目的改变。组间比较进行单因素方差、t检验。结果各实验组行为学评分差异有统计学意义(MCAO:7.90±0.35,MCAO+Propofol 25组:7.10±0.28,MCAO+Propofol 50组:6.40±0.27,MCAO+Propofol 100组:5.70±0.26,F=10.56,P<0.05)。各实验组皮层半影区P-MSK1差异有统计学意义(F=15.22,P<0.05)。与MCAO比较,MCAO+Propofol 25组差异无统计学意义(53.06±3.09比48.65±2.86,t=0.99,P>0.05);MCAO+Propofol 50组差异有统计学意义(5.40±0.27比7.60±0.27,t=-5.83,P<0.05);MCAO+Propofol 100组差异有统计学意义(78.13±3.28比48.65±2.86,t=8.053,P<0.05)。而MSK1总蛋白表达量在缺血核心区和半影区对侧皮层均无明显改变。缺血皮层P-MSK1阳性细胞和神经元核特异性标记物NeuN共定位,不同实验组小鼠皮层缺血半影区高倍镜视野下NeuN阳性和P-MSK1阳性共定位细胞数差异有统计学意义(MCAO:18.53±1.31,MCAO+Propofol 25组:21.57±1.66,MCAO+Propofol 50:36.72±3.13,MCAO+100 mg/kg组:48.3±3.86,F=26.39,P<0.05),MCAO+Propofol 25组与MCAO组比较(21.57±1.66比18.53±1.31,t=1.44,P>0.05),MCAO+Propofol 50组与MCAO组比较(36.72±3.13比18.53±1.31,t=5.36,P<0.05),MCAO+Propofol 100组与MCAO组比较(48.30±3.86比18.53±1.31,t=7.31,P<0.05)。结论丙泊酚可通过提高小鼠缺血皮层半影区内MSK1磷酸化水平,提高神经元存活数来减轻小鼠缺血性脑损伤。

水稻中SAPK8/9/10与OsRbohB/E蛋白互作在ABA诱导H_2O_2产生中的作用

[目的]本文旨在验证水稻中SAPK8/9/10与OsRbohB/E蛋白的互作及其在ABA诱导的H_2O_2产生中的作用。[方法]先采用酵母双杂交系统进行初步的SAPK8/9/10与OsRbohB/E蛋白的互作分析,然后采用双分子荧光互补(Bi FC)、GST-pull down和体外磷酸化技术验证其互作。为了进一步探讨SAPKs与OsRbohs在ABA信号转导中的作用,采用水稻原生质体瞬时体系分析ABA处理时SAPKs与OsRbohs对H_2O_2产生的影响。[结果]SAPK8/9/10与OsRbohB和OsRbohE在体内、外存在相互作用,且OsRbohs是SAPKs磷酸化的底物。与对照组相比,水稻原生质体瞬时过表达SAPK9/10(SAPKs-OE)和OsRbohB/E(OsRbohs-OE)组中H_2O_2的产生明显增加,且ABA处理后增加趋势增强;瞬时沉默SAPKs(ds-SAPKs)和OsRbohs(ds-OsRbohs)组中H_2O_2的产生明显下调,且ABA诱导的H_2O_2增加在这些原生质体中也均被抑制;SAPKs-OE+ds-OsRbohs、ds-SAPKs+OsRbohs-OE组中H_2O_2的产生表现出不同程度的减少。[结论]SAPKs与OsRbohs共同参与调节ABA诱导的H_2O_2的产生。

运动干预对大鼠骨骼肌JNK磷酸化与表达的影响

目的:探讨运动干预对大鼠骨骼肌应激激活蛋白激酶-JNKmRMA表达、蛋白总量(t-JNK)及磷酸化JNK(p-JNK)的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分为1 h/d和1.5 h/d组,运动7周。运动结束后分别在24h和48h取材,测定葡萄糖和胰岛素浓度;Western blot法检测骨骼肌t-JNK蛋白表达、p-JNK磷酸化水平; RT-PCR法分析JNKmRNA表达。结果:与对照组比较,运动组胰岛素浓度降低;1 h运动24 h取材和1.5 h运动24与48h取材组p-JNK增加;1.5 h运动组蛋白总量(t-JNK)升高;JNK mRNA表达变化发生在1.5 h运动24 h取材组;结论:运动干预提高大鼠骨骼肌对胰岛素的敏感性,改善JNK磷酸化、蛋白和基因表达。

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织JNK/SAPK水平变化及意义

目的探讨C-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)/应激激活蛋白激酶(SAPK)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中的水平变化及意义。方法 16只Ⅱ级Wistar雄性大鼠随机分为对照组和COPD组。对照组不予任何处理,COPD组给予烟熏刺激,造成大鼠COPD动物模型。造模成功后,光镜下观察肺组织病理,动物肺功能检测仪检测肺功能,ELISA法检测大鼠肺组织TNF-α水平,免疫组化法检测肺组织JNK/SAPK表达,RT-PCR检测肺组织JNK/SAPK mRNA表达水平。结果 COPD组光镜下出现了大量炎性细胞浸润,部分肺泡融合,肺泡数量减少,证明COPD造模成功。与对照组比较,COPD组第0.3秒用力呼气容积与用力呼气容积的比值降低,呼气阻力、吸气阻力升高,动态顺应性下降(P<0.05或<0.01),TNF-α升高(P<0.05);免疫组化结果显示,COPD组肺组织中JNK/SAPK蛋白表达高于对照组(P均<0.05)。RT-PCR结果显示,与对照组相比,COPD组JNK/SAPK mRNA水平升高(P均<0.05)。JNK/SAPK mRNA表达水平与TNF-α呈正相关(r=0.751,P<0.05)。结论烟雾诱导的COPD大鼠JNK/SAPK水平升高,其可能通过激活烟雾诱导的炎症因子,导致气道炎症和肺气肿,促进COPD发生。

MIF与JNK1在原发性肝细胞癌中的表达及相关性研究

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和c-Jun氨基末端蛋白激酶1(JNK1)蛋白在肝细胞癌(HCC)组织和HepG2肝癌细胞中的表达,并探讨二者的相互关系。方法选择有乙肝肝硬化基础的HCC患者52例,取手术切除的癌组织及相应的癌旁组织为实验组,另选取20例肝血管瘤、肝破裂手术切除的肝组织标本作正常对照,应用免疫组织化学法检测MIF、JNK1和pJNK1的表达;原位杂交法检测MIF mRNA和JNK1 mRNA表达。将不同浓度的rMIF分别与HepG2肝癌细胞和L-O2人正常肝细胞共培养,通过Western blotting法检测JNK1和pJNK1蛋白的表达,通过RT-PCR检测相应蛋白在核酸水平的表达。结果MIF、JNK1、pJNK1和MIF mRNA、JNK1 mRNA在HCC癌组织和癌旁组织中的阳性表达率均明显高于正常肝组织(P均<0.05);经不同浓度的rMIF刺激后,HepG2肝癌细胞中pJNK1和JNK1 mRNA的相对表达量均呈浓度依赖性升高,尤以rMIF浓度为200 ng/ml升高最明显,与L-O2细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MIF、MIF mRNA、JNK1、JNK1 mRNA、pJNK1在HCC组织和HepG2肝癌细胞中均呈高表达,MIF参与HCC进展,可能是通过激活JNK1信号通路来实现的。

胰岛素抵抗与IKK和JNK活性的改变

胰岛素抵抗（IR）和胰岛素分泌不足是T2DM的两个关键因素，但机制未明。近年炎症学说备受关注，认为T2DM为一先天性免疫和低度慢性炎症性疾病。在T2DM的易感个体，随着老龄化和营养过剩等环境因素的作用，先天性免疫系统被激活，巨噬细胞、脂肪细胞等前哨细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）、抵抗素等多种细胞因子，进而引起IR、胰岛素分泌功能障碍和代谢综合征。