复方中草药对运输后肉牛应激蛋白mRNA和蛋白表达水平的影响

文章旨在研究复方中草药对运输后肉牛应激蛋白mRNA和蛋白表达水平的影响,试验将40头健康、体重相近的荷斯坦育肥牛随机分成4组,每组10个重复,分别为对照组(1组)、0.5%(2组)、1.0%(3组)、1.5%(4组)复方中草药添加组,饲喂14 d后模拟运输应激。采用ELISA测定运输前、后荷斯坦育肥牛血清中HSP 70含量,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blotting分别测定运输后组织中HSP 70、HSP 90及HSP 27的mRNA和蛋白质水平的表达量。结果显示,运输后的各组荷斯坦育肥牛血清中HSP 70含量均高于运输前的(P<0.05),与对照组相比,试验3、4组试验运输前和运输后荷斯坦育肥牛血清中HSP 70含量显著降低(P<0.05),试验3、4组运输后的肉牛肌肉组织HSP 27、HSP 70及HSP 90的mRNA的表达量显著降低(P<0.05);试验3、4组运输后的肉牛肌肉组织HSP 70和HSP 90蛋白表达量显著降低(P<0.05)。说明运输可以提高肉牛血清和肌肉组织中应激蛋白含量,添加不同水平的复方中草药可以降低运输后肉牛血清及肌肉组织中应激蛋白的水平,以添加量为1.0%较适宜。

热应激蛋白家族在水生动物中的研究进展

热应激蛋白(HSPs)也称为应激蛋白和外源性伴侣蛋白,是一组分子量不同的高度保守的蛋白,包括sHsps、Hsp60、Hsp70、Hsp90和Hsp110。HSPs指在正常生理条件下合成,用于应对应激状态的物质。蛋白多肽链的折叠与组装、受损蛋白质的复性、免疫识别、细胞凋亡等都有HSPs的参与。在鱼类、甲壳动物和棘皮动物中,HSPs除了增强水生生物抗应激能力外,还能在免疫调控、细胞凋亡、炎症反应中的各个方面发挥作用。外源性HSPs可以作为疫苗,通过刺激宿主的体液免疫和细胞免疫来增加对病原的抵抗力。HSPs也可以作为疫苗佐剂,在开发水生动物疫苗中发挥重要作用;还可以作为水生动物的重要靶位点,通过调节HSPs的表达,提高水生动物的抗应激能力,在疾病的预防和控制中发挥重要作用。

肉鸡热应激病理损伤与应激蛋白(HSP_(70))相关性研究

通过血液临床病理学、组织学和免疫组织化学检测技术,对AA肉鸡进行了为期10 h的急性热应激,观察分析了高热应激状态下受试鸡组织损伤及其与HSP70的相关性。热应激受试鸡组织脏器在应激初期即开始出现较明显的组织病理学改变,表现为心肌纤维、肾小管上皮细胞等呈现不同程度的变性、坏死等退行性变化;外周血液中反映受试鸡心肌等细胞组织损伤的肌酸激酶(对照)活性显著升高;反映鸡体基础代谢水平的甲状腺素T3和T4、胰岛素则呈现不同程度的下降趋势。应激持续较长时间(10 h)后受试鸡外周血液中对照含量下降的幅度明显趋缓的现象可能与持续应激状态下心肌纤维内产生大量HSP70而产生保护性反应有关,HSP70在各组织脏器血管壁上的强阳性分布提示HSP70与血管功能密切相关。

大黄蒽醌提取物对罗氏沼虾高温下抗氧化能力与热应激蛋白70基因表达的影响

将罗氏沼虾随机分成5组,每组3个平行,每个平行1000尾,第1组为对照组,投喂基础日粮;另外4组为试验组,在基础日粮中分别添加0.05%、0.1%、0.2%、0.4%大黄蒽醌提取物。饲养10周后,对罗氏沼虾进行连续35℃高温应激48h,测定肝胰腺总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、一氧化氮以及应激蛋白70的mRNA相对含量变化。结果表明:应激前,0.05%组显著提高了肝胰腺过氧化氢酶活性、超氧化物歧化酶活性,显著降低了肝胰腺丙二醛含量;0.2%试验组显著增加了肝胰腺总抗氧化能力、一氧化氮浓度,显著降低了肝胰腺丙二醛含量;0.10%、0.2%试验组显著增加HSP70mRNA的相对含量;高温应激后,各组肝胰腺总抗氧化能力、过氧化氢酶活性、超氧化物歧化酶活性、一氧化氮浓度呈现降低趋势,其中0.1%和0.2%大黄蒽醌提取物相对较高,对照组较低;肝胰腺丙二醛含量呈现增加趋势,其中加0.1%和0.2%大黄蒽醌提取物比对照组低。应激6h后0.1%和0.2%大黄蒽醌提取物组的HSP70mRNA的相对含量仍比对照组高。因此添加0.1%和0.2%大黄蒽醌提取物提高了虾的抗氧能力,促进HSP70mRNA的相对含量,对高温应激有一定的保护作用。

Cu^(2+)和Cu-EDTA对鲫鱼脑组织应激蛋白HSP70诱导的影响

以鲫鱼 (Carassiusauratus)作为实验对象 ,经过 4 0d不同浓度铜 (Cu2 + )及其配合物 (Cu EDTA)的暴露后 ,运用SDS PAGE和WesternBlotting方法检测鱼脑组织内应激蛋白HSP70的诱导表达情况 .结果表明 :在实验浓度下 ,与对照组相比 ,Cu2 + 和Cu EDTA对鱼脑内HSP70有显著的诱导 (p <0 0 5 ) ,而将Cu2 + 和Cu EDTA实验组相对比 ,络合剂EDTA一定程度上改变了Cu的生物可利用性 ,从而降低了其毒性 .实验还发现 ,Cu2 + 浓度在国家渔业水质标准 0 0 1mg/L下时 ,鱼脑组织内HSP70已经有明显的表达 ,说明运用分子生物学指标要比传统的环境监测指标更敏感 ,具有对污染物早期预警的作用 .

苯并[a]芘对内皮细胞增殖活性的影响及与热应激蛋白70表达关系的研究

为探讨苯并 [a]芘 (BaP)对猪主动脉内皮细胞增殖活性的影响以及与热应激蛋白 70 (HSP70 )表达的关系。采用离体培养猪主动脉内皮细胞 ,不同浓度BaP(0、0 5、1、10、2 0 μmol L)染毒 2 4h ,以MTT法分析不同浓度BaP对内皮细胞增殖活性的影响并以Western blot法检测内皮细胞HSP70表达的改变。结果发现 ,BaP染毒 2 4h后 ,主动脉内皮细胞增殖活性随染毒剂量的增加而逐渐降低 ;低剂量 (0 5 μmol L)染毒组HSP70的表达与对照组相比无明显差异 ,而中、高剂量 (1、10、2 0 μmol L)抑制HSP70的表达。结果提示BaP抑制主动脉内皮细胞增殖生长活性 ;一定浓度的BaP能抑制主动脉内皮细胞HSP70的表达。

低浓度Zn对幼龄鲫鱼肝脏组织应激蛋白HSP70诱导的影响

选择鲫鱼(Carassiusauratus)作为受试生物,经过40dZn2+不同浓度的暴露后,运用SDS-PAGE和WesternBlot-ting方法检测了鱼肝脏组织内应激蛋白HSP70的诱导表达情况。结果表明,在各试验浓度下,与对照组相比,Zn2+对鱼肝脏内HSP70有显著的诱导(P<0.05)。试验中还发现,在试验浓度低于国家渔业用水标准时,HSP70相对于对照组仍然表现为明显诱导(P<0.05),充分说明分子生物学指标要比传统的环境检测指标敏感,对污染物早期具有预警的作用。

应用应激蛋白HSP70作为生物标志物研究锌、铜及其联合毒性对鲫鱼肝脏的影响

将应激蛋白 (HSP70 )作为生物标志物 ,以银鲫 (Carassiusauratusgibelio)作为实验生物 ,经过 4 0d不同浓度铜 (Cu2 + )、锌(Zn2 + )及其混合物暴露后 ,运用SDS PAGE和WesternBlotting方法研究了鲫鱼肝脏组织内应激蛋白HSP70的诱导表达情况 .结果表明 :在实验浓度下 ,Cu2 + ,Zn2 + 及其混合物对鱼肝脏内HSP70有显著的诱导 (P <0 0 5 ) ,而将Cu2 + 和Zn2 + 实验组与其混合物实验组相比 ,Cu2 + ,Zn2 + 表现为一定的协同作用 .实验还发现 ,在国家渔业水质标准Zn2 + 浓度下 ,鱼肝脏组织内HSP70已经有明显的表达 ,说明分子生物学指标要比传统的环境检测指标敏感 ,对污染物具有早期预警的作用 。

热暴露对果蝇寿命及热应激蛋白(Hsp70)含量的影响

实验观察了热暴露温度和时间对果蝇存活时间和热应激蛋白（Ｈｓｐ７０）含量的影响，热习服训练的作用及茶叶提取液提高热耐力的效果。结果显示，随着温度升高，果蝇存活时间随之减少；热暴露时间延长，热应激蛋白含量增高；热习服训练２～３次后，热耐力显著提高；苦丁茶和红茶提取液有显著提高果蝇热耐力作用，而龙井茶提取液效果不明显。结果提示。

美沙拉嗪联合益生菌治疗溃疡性结肠炎的疗效及其对炎性因子、应激蛋白和氧化应激水平的影响

目的探讨美沙拉嗪联合双歧杆菌三联活菌治疗溃疡性结肠炎的疗效及其对炎性因子、应激蛋白和氧化应激水平的影响。方法选取2013年2月～2015年4月间于笔者医院消化内科诊治的溃疡性结肠炎128例为研究对象，采用数字表法随机将患者分为美沙拉嗪组（单独组）和美沙拉嗪＋双歧杆菌三联活菌（联合组），每组各64例。分别比较两组患者的疗效及其炎性因子、应激蛋白和氧化应激水平的变化。结果治疗结束后，联合组的治疗有效率为92．19％（59／64），显著高于单独组的78．13％（50／64）（X^2=5．006，P=0．025）；两组患者炎性因子IL-6、IL-8和TNF-α水平的水平逐渐降低（P〈0．05）；IL-10和HSP70的水平逐渐升高（P〈0．05）；MDA含量降低，GSH-Px和SOD活性明显升高（P〈0．05）；重要的是联合组患者的炎性因子、氧化应激和热休克蛋白70水平的改善程度均明显优于单独组（P〈0．05）。结论美沙拉嗪联合双歧杆菌三联活菌治疗溃疡性结肠炎的疗效良好，且能降低氧化应激和炎症水平，增加HSP70表达水平，更有利于溃疡性结肠炎患者的恢复。

预热诱导K_(562)细胞热应激蛋白70高表达对高温引起细胞凋亡的影响

为初步观察预热诱导的应激蛋白 70 (HSP70 )高表达对高温所致细胞凋亡影响 ,用 40℃预热诱导K5 6 2 细胞产生应激蛋白 70高表达 ,用 RT- PCR半定量法检测细胞应激蛋白表达情况 ,然后分别将预热细胞和对照细胞置于 43℃用高温诱导细胞凋亡 ,用流式细胞仪检测细胞凋亡率 ,判断 HSP70高表达对细胞凋亡的影响。用 RT- PCR检测发现 ,随着细胞预热时间的延长 ,细胞 HSP70合成明显增加 ,到 12 0 min时达到最高 ,高水平可以维持数小时 ;43℃高温处理后 ,未预热组的细胞凋亡率明显高于预热细胞 ;预热时间长的细胞组细胞凋亡率明显低于预热时间短的细胞组。提示 HSP70高表达可以抑制高温所致的 K5 6 2 细胞凋亡。

空降兵跳伞后热应激蛋白70抗体滴度分析

目的：探讨ＨＳＰ７０抗体滴度在评价跳伞对空降兵健康效应中的影响。方法：利用ｃＤＮＡ和ｐＥＴ载体系统纯化的ＨＳＰ７０，建立检测ＨＳＰ７０抗体滴度的酶联免疫吸附鉴定方法，并调查了４０名近半年来未跳伞的对照组空降兵和４２名跳伞后的跳伞组空降兵血浆中ＨＳＰ７０抗体滴度。结果：对照组４０人中有２人出现１∶１０阳性，占５％，而跳伞组４２人中４人出现１∶１０阳性，占９．６％，其中２人１∶４０阳性，占４．８％。

玉米赤霉烯酮对断奶小母猪子宫形态学及热应激蛋白70分布和表达的影响

【目的】研究不同水平玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对断奶小母猪子宫形态学和子宫内热应激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)的阳性分布规律及m RNA相对表达量的影响。【方法】选择25—28日龄健康三元杂交(杜×长×大)断奶小母猪40头,产床上适应环境10 d后转入单体笼(0.48 m2)。根据日龄(35—38)和平均体重(14.01±0.86 kg),将40头试验小母猪分为4个处理,每个处理10个重复,每个重复1头猪。对照组(Control)饲喂基础饲粮,处理1(ZEA0.5)、处理2(ZEA1.0)和处理3(ZEA1.5)分别在基础饲粮基础上添加0.5、1.0和1.5 mg·kg^(-1)的ZEA(ZEA的测定值分别为0、0.52±0.07、1.04±0.03和1.51±0.13 mg·kg^(-1)),小母猪单笼饲养,自由采食和饮水,预饲期10 d,正式期35 d。试验结束前一天对小母猪禁食12 h,全部放血屠宰,打开腹腔后无菌条件下迅速切取一份子宫组织置于2 m L无RNA酶的冻存管中液氮速冻,而后转至-80℃冻存,检测HSP70的m RNA相对表达量,另切取子宫组织块迅速固定于Bouin’s液,待做组织切片检测子宫形态学的结构和HSP70的阳性分布规律。【结果】随着饲粮中ZEA水平的升高,子宫肌层和内膜明显增厚,子宫腺数量明显增多,子宫腺密度明显增大;子宫肌层和内膜厚度随着饲粮中ZEA水平的升高呈一次(P<0.001)和二次(P<0.001)线性升高,1.5 mg·kg^(-1)处理的子宫肌层和内膜厚度显著高于1.0 mg·kg^(-1)处理(P<0.05),1.0 mg·kg^(-1)处理显著高于0.5 mg·kg^(-1)处理(P<0.05),0.5 mg·kg^(-1)处理又显著高于对照组(P<0.05)。免疫组化结果显示,HSP70免疫阳性物质主要分布于子宫肌层平滑肌细胞、子宫腺上皮细胞、腔上皮细胞和血管内皮细胞的胞质内,偶见胞核着色。对照组免疫阳性较弱呈浅黄色,随着饲粮中ZEA水平的升高,HSP70免疫阳性反应明显增强,颜色加深,呈黄色和棕黄色块状分布。断奶小母猪子宫中肌层、腺上皮、腔上皮及所测部分总HSP70免疫阳性物质的累积光密度(integrated optical density,IOD)随着饲粮中ZEA水平的升高均呈一次(P<0.001)和二次(P<0.05)线性升高;总体上,1.5 mg·kg^(-1)处理的子宫HSP70免疫阳性物质的IOD显著高于0.5 mg·kg^(-1)处理(P<0.05),0.5和1.0 mg·kg^(-1)处理又显著高于对照组(P<0.05)。m RNA相对表达量结果显示,随着饲粮中ZEA水平的升高,断奶小母猪子宫内HSP70的m RNA相对表达量呈一次、二次线性升高(P<0.001),尽管1.0 mg·kg^(-1)和1.5 mg·kg^(-1)处理差异不显著(P>0.05),但1.5 mg·kg^(-1)处理显著高于0.5 mg·kg^(-1)处理(P<0.05),0.5 mg·kg^(-1)处理又显著高于对照组(P<0.05)。【结论】饲粮中0.5 mg·kg^(-1) ZEA足以使子宫肌层和内膜明显增厚,子宫腺数量明显增多,使得子宫形态发生改变;本试验条件下,随ZEA浓度升高,HSP70免疫阳性反应增强,诱导子宫内HSP70的高水平表达,抵抗毒素应激对子宫细胞的损伤。

在镉盐胁迫下扇贝鳃组织应激蛋白的研究

采用透射电子显微镜观察了虾夷盘扇贝(Patinopecten yessoensis)鳃组织细胞的超微结构,发现镉盐能胁迫鳃组织中的腮丝、细胞核和线粒体产生病变.利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)优化分离扇贝鳃组织的全蛋白,获得约800个蛋白质斑点,并筛选出37个由于镉盐胁迫而产生的差异蛋白质斑点.选用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALD I-TOF MS)技术和数据库检索鉴定差异蛋白,结果发现7个与镉毒性密切相关的蛋白质,即热休克蛋白70和β-淀粉酶等上调蛋白质及原肌球蛋白、肌动蛋白和钙活化核苷酸酶1等下调蛋白质.此外,还发现转录调节子Crp/Fnr家族为低表达蛋白质,而ABC转运子为高表达蛋白质.在这些差异蛋白中,部分蛋白质适合作为连续监测流动海水中镉污染程度及评价其危害性的蛋白指示物.

热应激蛋白70的研究进展

热应激蛋白70(HSP70)是由细胞核内高度保守的热应激基因编码的产物之一,作为对外界应激的一种保护性反应,它有助于机体维持正常的新陈代谢和细胞结构的完整性。当前,HSP70的研究已成为当今世界生命科学的热点和富有希望的研究领域。本文就其结构与功能、基因表达的调控以及应用前景作一综述。

热应激蛋白研究进展及其应用前景

将对热应激蛋白的重要生物学功能,基因表达调控的研究进展以及应用前景进行综述。

谷氨酰胺对肝脏移植后应激蛋白表达的影响

目的探讨谷氨酰胺对肝脏移植后应激蛋白表达的影响。方法A组10例为正常肝脏;B组10例肝脏移植后不用丙氨酰谷氨酰胺二肽(Ala-Gln);C组8例肝脏移植后用Ala-Gln。观察标本的病理学改变和患者的营养状况,用免疫组织化学及原位杂交方法检测HSP70、HO-1蛋白和mRNA表达水平。结果B组和C组均未见免疫排斥反应,营养状况尚可;HSP70、HO-1蛋白及mRNA表达水平移植肝脏均升高,且应用Ala-Gln后更高。结论谷氨酰胺能增加供肝细胞应激蛋白基因转录和表达,加强肝细胞自我保护作用。

长双歧杆菌NCC2705菌株应激蛋白的研究

研究长双歧杆菌NCC2705菌株发酵至稳定期时应激蛋白的表达情况。根据乳酸乳球菌IL1403菌株蛋白质参考图谱及长双歧杆菌NCC2705基因组注释中应激蛋白的分子量与等电点,确定应激蛋白在双向电泳凝胶上的相应蛋白点,并利用MALDI-TOF和/或ESI-MS/MS对相应蛋白质点进行鉴定。每个蛋白质点的肽指纹图谱均在长双歧杆菌NCC2705的蛋白质数据库用Mascot进行检索,共鉴定到44个蛋白点对应8个应激蛋白。这些蛋白为亲水性酸性蛋白,大多具有翻译后修饰现象,它们基因的CAI值除DnaJ外,其余均在0.5以上,在全细胞表达谱中为高丰度蛋白;此外,菌体具有较强的抗脂质过氧化和清除DPPH自由基的能力,而对羟自由基和超氧负离子的清除力较弱,推测鉴定到的具有逆转氧化损害作用的碱性过氧化氢还原酶(ahpC)可能是体内表达的降低氧损伤的主要酶。

剑尾鱼热应激蛋白HSP70 cDNA片段的克隆与序列分析

为了进一步开展剑尾鱼Xiphophorus helleri——标准化实验动物在抗逆方面的相关研究,以及热应激蛋白(HSP70)在抗逆方面的作用,作者用RT-PCR方法首次克隆得到了剑尾鱼的HSP70的cDNA片段,该片段包含HSP70的特征性序列(GAT CTC GGT GGT GGC ACT TTT GAT)。通过将克隆片段与已发表的其它鱼类HSP70的核苷酸序列和其编码的氨基酸序列进行同源性比较,发现剑尾鱼核苷酸序列同源性较高,与牙鲆Paralichthys olivaceus HSP70核苷酸序列同源性最高为89%,与川鲽Platichthys flesus、虹鳟Oncorhyn-chus mykiss和黄锡鲷Rhabdosargus sarba的同源性皆在85%以上;与国外学者发表的HSP70的规律类似,所克隆的片段与其它鱼类HSP70基因编码的氨基酸序列同源性较相应核苷酸序列同源性更高,与牙鲆和川鲽的HSP70氨基酸序列同源性最高达到99%,与斑马鱼Danio rerio、虹鳟和黄锡鲷的氨基酸序列同源性均高于97%。不同鱼的HSP70 cDNA核苷酸序列存在一定差异,但氨基酸序列并未受到影响,经对照,这种不同相当一部分存在于密码子的第3个碱基,因为密码子的简并性,编码氨基酸没有发生改变。

热应激蛋白对畜禽抗应激机理的研究进展

热应激蛋白(heat shock proteins,HSPs)是机体在应激条件下所产生的一组特异性蛋白质,能使机体迅速适应环境变化。作者简要介绍了HSPs的来源及分类,阐述了HSP70的基因结构和调控机制,综述了HSPs抗应激功能及在畜禽应激反应中的表达,以期为从分子水平探索HSPs抗应激机理提供参考。