利用酵母双杂交技术筛选炭疽菌中与CsSSK1相互作用的蛋白质

炭疽菌(Colletotrichum siamense)是橡胶树等多种热带作物炭疽病的主要病原。双组分系统(two component system)在病原真菌中参与菌体对外界环境变化的适应、耐药性和毒力的调控。该系统包括感受器和应答调节蛋白,SSK1(SLF-interacting SKP1-like1)是双组分系统中的应答调节蛋白。为了了解炭疽菌中SSK1互作蛋白,本研究克隆获得橡胶树炭疽菌的一个应答调节蛋白编码基因CsSSK1,大小为2750 bp,cDNA大小为2190 bp,编码729个氨基酸,包含1个内含子,具有1个cheY同系物接收结构域和10个复杂结构。并利用酵母双杂交技术,在橡胶树炭疽菌cDNA文库中对CsSSK1互作蛋白进行筛选,共筛选到10个互作蛋白,分别为转酮醇酶、金属内酰胺酶、锌乙醇脱氢酶、泛素亚型X1、微管蛋白以及5个未知或假定蛋白。该结果为进一步研究CsSSK1的功能、互作蛋白及调节机制提供基础。

Rev蛋白:抗HIV-1感染的新靶点

病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulatorofvirionproteinexpression,Rev)是HIV-1转录过程中不可缺少的调控蛋白。Rev与病毒mRNA的Rev应答元件(revresponseelement,RRE)相互作用,加速mRNA向核外转运。Rev缺乏或者不能进入细胞核,未剪接和部分剪接的mRNA将在核内完全降解,导致HIV-1的复制被阻断。Rev在HIV-1复制周期中起着重要的反式调节作用,是寻找新作用机制和不易产生耐药性的抗艾滋病药物的新靶点。该文介绍Rev介导的核质转运过程和Rev蛋白的相关抑制剂。

慢性丙型肝炎合并非酒精性脂肪性肝病患者血清RBP4和SREBP-1c水平变化分析

目的 探讨慢性丙型肝炎(CHC)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)和固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)水平变化及其临床意义。方法 2019年2月~2022年2月我院收治的CHC患者94例,接受肝穿刺活检和重组人干扰素-α2a联合利巴韦林治疗24周。使用全自动生化分析仪检测血生化指标,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用ELISA法检测血清RBP4和SREBP-1c水平。结果 经组织病理学检查发现,在94例CHC患者中,合并NAFLD患者50例(53.2%),其中肝轻度脂肪变22例(44.0%)和中重度脂肪变28例(56.0%);CHC合并中重度脂肪变患者血清AST、ALT、ALP和GGT水平分别为(62.2±12.8)U/L、(87.2±11.5)U/L、(99.0±14.4)U/L和(69.4±10.3)U/L,显著高于CHC合并轻度脂肪变患者【分别为(53.6±10.1)U/L、(75.7±12.5)U/L、(83.8±12.7)U/L和(58.5±7.7)U/L,P<0.05】或CHC患者【分别为(51.7±8.5)U/L、(73.5±13.8)U/L、(81.6±10.9)U/L和(56.2±8.1)U/L,P<0.05】;CHC合并中重度脂肪变患者血清RBP4和SREBP-1c水平分别为(55.9±8.2)mg/L和(40.1±7.4)μg/L,显著高于合并轻度脂肪变患者【分别为(36.7±5.8)mg/L和(29.3±5.1)μg/L,P<0.05】或CHC患者【分别为(28.4±6.3)mg/L和(21.8±5.5)μg/L,P<0.05】;中重度脂肪变患者血清HbA1c和HOMA-IR水平分别为(5.7±0.5)%和(3.2±0.5),显著高于CHC合并轻度脂肪变患者【分别为(5.3±0.5)%和(2.5±0.4),P<0.05】或CHC患者【分别为(5.1±0.3)%和(1.9±0.3),P<0.05】;41例治疗应答组血清RBP4和SREBP-1c水平分别为(25.7±6.0)mg/L和(20.6±5.0)μg/L,显著低于53例治疗无应答组【分别为(48.5±7.4)mg/L和(35.5±6.3)μg/L,P<0.05】。结论 CHC合并NAFLD患者血清RBP4和SREBP-1c水平升高,可能影响对干扰素-α2a抗病毒治疗的应答,值得进一步研究。

SIGIRR在固有免疫中的负性调节作用

单一免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白（SIGIRR,或TIR8）是Toll-IL-1受体（TIR）超家族的成员之一。它广泛分布于被覆上皮组织的器官,如肾脏、肺、结肠等,并且可以负性调节白细胞介素1受体（IL-1R）、Toll样受体（TLRs）介导的固有免疫应答。固有免疫是机体防御病原体的第一道防线,对适应性免疫也起到调节作用。固有免疫反应过度可导致炎症因子瀑布样释放,从而造成对机体的损害。

营养基因组学、瘤胃衍生生物活性脂肪酸及乳脂合成调节的研究进展

乳腺中乳脂合成的研究一直是热门的领域,生物活性脂肪酸在脂类合成调节中有显著的作用。生化还原理论表明,日粮引起的奶牛乳脂低下(MFD)是由于瘤胃的生化还原产生的特异脂肪酸使得乳腺乳脂合成受到抑制而引起的。影响乳脂合成最重要的脂肪酸是t10,c12CLA,它的作用非常具有特征性,包括效应关系的剂量效应。在MFD期,脂肪的生产能力及乳腺关键的脂肪生成调节基因都是协同下调的。研究结果已经证明,在反刍动物和啮齿类动物中SREBF1及Spot 14是脂肪生产信号通路中的生化还原中间应答物。MFD及瘤胃衍生特定生物活性脂肪酸对其的调节是现在动物营养研究中营养基因组学的一个成功的例子,并在动物生产中有潜在的应用。

T细胞免疫球蛋白黏蛋白-1的免疫调节作用及抗肿瘤机制研究进展

肿瘤免疫抑制是肿瘤免疫逃逸的重要原因，寻找逆转免疫抑制和增强抗肿瘤免疫应答的新靶点尤为重要。T细胞免疫球蛋白黏蛋白（TIM）-1是TIM家族成员中重要的共刺激分子，主要表达于T淋巴细胞表面，可促进T细胞的活化、增殖及细胞因子的分泌，在肿瘤免疫过程中具有重要的调节作用。

白藜芦醇减轻同型半胱氨酸引起的巨噬细胞免疫应答和增殖的作用

目的探讨白藜芦醇(Res)在同型半胱氨酸(Hcy)引起巨噬细胞免疫应答和增殖中的作用。方法将小鼠ANA-1细胞分为对照组(常规培养)、模型组(100μmol·L^(-1) Hcy)和低、中、高剂量实验组(在模型组基础上分别加25、50和100μmol·L^(-1)白藜芦醇)以及Hcy+Ad-SIRT1组(100μmol·L^(-1) Hcy+Ad-SIRT1)、Hcy+si-FOXO1组(100μmol·L^(-1) Hcy+si-FOXO1)、Hcy+Res-L+Ad-SIRT1+si-FOXO1组(100μmol·L^(-1) Hcy+25μmol·L^(-1)白藜芦醇+转染Ad-SIRT1+si-FOXO1)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,用酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。用蛋白质印迹法检测沉默信息调节因子(SIRT1)和叉头蛋白O1(FOXO1)蛋白的表达水平。结果对照组、模型组和低、中、高剂量实验组450 nm光密度值分别为0.25±0.02、0.36±0.02、0.33±0.01、0.30±0.02和0.29±0.01,模型组较对照组细胞增殖显著增加,低、中、高剂量实验组细胞增殖较模型组均显著减少(均P<0.05);对照组、模型组、低剂量实验组细胞培养液上清液中IL-6分别为(394.04±20.06)、(614.23±21.09)和(501.53±16.52)pg·mL^(-1),TNF-α分别为(516.54±18.96)、(717.22±24.81)和(632.74±19.11)pg·mL^(-1),SIRT1蛋白相对表达水平分别1.00±0.05、0.57±0.05和0.77±0.04,FOXO1蛋白相对表达水平分别为1.00±0.05、2.31±0.18和1.58±0.11,低剂量实验组的上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组、低剂量实验组、Hcy+Ad-SIRT1组及Hcy+si-FOXO1组细胞培养液上清液IL-6和TNF-α含量均显著低于模型组,在统计学上差异有统计学意义(均P<0.05);低剂量实验组共转染Ad-SIRT1和si-FOXO1后,细胞培养液上清液IL-6和TNF-α含量均显著低于Ad-SIRT1组和si-FOXO1组(均P<0.05)。结论白藜芦醇能够减轻Hcy引起的巨噬细胞免疫应答和增殖,其机制与SIRT1/FOXO1通路有关。

胰岛素对促性腺激素释放激素分泌及活性的调控

胰岛素是动物体内能量代谢调控的重要激素,促性腺激素释放激素(GnRH)是动物体内调控繁殖的重要激素,是使动物发情的起始因素。促进家畜尽早进入发情期是现今畜牧业中的一个重要课题。大量研究报道了通过控制动物体内胰岛素水平可影响GnRH水平,从而调控动物发情。本文综述了胰岛素调节GnRH活性和功能过程中早期生长应答蛋白-1、胞外信号调节激酶和神经肽Y发挥的作用,对养殖生产实践中通过胰岛素调控实现GnRH分泌释放的机理作简要的总结。

番石榴叶总黄酮对2型糖尿病模型小鼠肝糖异生ERRγ/CREBH信号通路相关因子的影响

目的:探讨番石榴叶总黄酮(GLTF)对2型糖尿病(T2DM)模型小鼠肝脏雌激素相关受体γ(ERRγ)/环磷酸腺苷应答元件结合蛋白H(CREBH)通路相关因子的影响,探讨其降血糖作用的具体机制。方法:取健康雄性ICR小鼠,采用高糖高脂饲料喂养联合多次腹腔注射小剂量链脲佐菌素的方法建立T2DM模型。将造模成功的小鼠按血糖值随机分为模型组、二甲双胍组(阳性对照,0.17 g/kg)、消渴降糖胶囊组(阳性对照,0.75 g/kg)和GLTF低、高剂量组(0.047、0.094 g/kg),每组12只;另选12只正常小鼠作为正常组。除正常组和模型组小鼠灌胃等体积水外,其余各组小鼠灌胃相应药物溶液10 mL/kg,qd,连续21 d。给药结束后,检测各组小鼠空腹血糖值、血清胰岛素水平,计算胰岛素敏感指数(ISI);采用苏木素-伊红染色法观察小鼠肝脏和胰腺组织病理学变化;采用免疫印迹法检测小鼠肝组织中ERRγ、CREBH的蛋白表达水平;采用实时定量聚合酶链式反应法检测小鼠肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC1α)、CREB调节转录辅激活因子2(TORC2)的mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖和血清胰岛素水平均显著升高,ISI值显著降低(P<0.01);肝组织病变明显、可见大量空泡;胰腺组织中胰岛数目减少、体积变小,胰岛细胞呈轻度空泡病变;肝组织中ERRγ、CREBH的蛋白表达水平及PGC1α、TORC2的mRNA表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,GLTF各剂量组小鼠上述血糖、胰岛素指标及病理学变化均明显改善;肝组织中ERRγ、CREBH的蛋白表达水平及PGC1α、TORC2的m RNA表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:GLTF对T2DM模型小鼠具有明显降糖及肝、胰腺组织保护作用;其降血糖作用的机制可能与抑制肝脏ERRγ/CREBH信号通路有关。

Roux-en-Y胃旁路术对肥胖大鼠脂肪肝的影响及机制研究

目的探讨Roux-en-Y胃旁路术(Roux-en-Y gastric bypass surgery,RYGB)对肥胖大鼠脂肪肝的影响及可能的机制。方法将30只8周龄雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食组(ND组)、高脂饮食组(HFD组)及高脂饮食且接受RYGB组(HFD+RYGB组),每组10只,分别给予正常饮食、高脂饮食。饲养16周后,对HFD+RYGB组大鼠行RYGB,对ND组及HFD组行假手术。术后,ND组大鼠继续给予正常饮食,HFD组与HFD+RY G B组大鼠接受高脂饮食。术后第4周,处死大鼠,收集血样,采用EL IS A法测定大鼠血清TG、TC、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)浓度。观察大鼠肝脏外形,取肝脏组织,行H-E染色及油红O染色,显微镜下观察肝脏组织的病理学变化。采用real-time PCR检测肝组织糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)、固醇调节原件结合蛋白-1c(SREBP-1c)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA表达水平。结果HFD组大鼠体质量、肝脏湿重及内脏脂肪总量高于N D组(P<0.05),HFD+RY G B组大鼠体质量、肝脏湿重及内脏脂肪总量低于HFD组(P<0.05);HFD大鼠血清TG、TC、FFA水平高于ND组(P<0.05),HFD+RY G B组大鼠血清T G、T C、FFA水平低于HFD组(P<0.05);HFD组肝脏T G、T C含量高于N D组(P<0.05),HFD+RY G B组大鼠肝脏T G、T C低于HD F组(P<0.05);H-E及油红O染色结果显示,HFD+RY G B组干细胞脂质沉积、脂滴空泡减少;术后第4周,HFD+RY G B组大鼠肝脏中的C hREB P和S REB P-1 c的mRNA的表达量较HFD组均显著降低(P<0.05)。结论 RYGB能显著缓解肝脏脂肪沉积及血脂,其机制可能与抑制脂肪酸合成途径的关键分子ChREBP和SREBP-1c有关。

人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子诱导机体免疫应答的研究进展

反式转录激活因子（transactivaloroftronscription．Tat）是HIVl在感染早期产生的一种重要调节蛋白，它可与HIV-1RNA基因组的反式激活效应元件（transactivatingresponsiveregion，TAR）结合，促进HIV-1的转录及复制，在HIV-1感染及致病中发挥重要作用。