酶联免疫吸附试验底物A中受氢体的比较研究

目的提高酶联免疫吸附试验的灵敏度。方法选择过氧化氢、过氧化脲分别作为底物A中的受氢体,用酶联免疫法确定其最佳工作浓度,进行灵敏度、精密性、稳定性的比较。结果过氧化脲在酶联免疫吸附试验中的灵敏度略高于过氧化氢。结论过氧化脲比过氧化氢更适宜作底物A中的受氢体。

底物配比对两种蔬菜废叶厌氧发酵产沼气性能的研究

为了探究底物配比对蔬菜废叶厌氧发酵产沼气性能的影响,本研究对春光市场上典型的两种蔬菜废叶进行混合厌氧发酵,采用批量式试验,在恒温35±1℃条件下,测定不同配比蔬菜废弃物厌氧发酵的总固体含量(TS)、挥发性固体含量(VS)、挥发性脂肪酸(VFA)质量浓度、pH值变化、产沼气量及甲烷含量等指标变化。结果表明,C组即底物配比为6∶4时,两种蔬菜废叶的TS降解率为46.95%,VS降解率为55.56%,VFA质量浓度为300.00mg•L^(-1),日产沼气量最高为410mL,累积产沼气总量为2272mL,甲烷含量为65.15%,均普遍优于其他试验组。

源于类芽胞杆菌的低聚糖脱支酶底物特异性及其应用研究

脱支酶是淀粉深加工产业的常用酶制剂,然而传统脱支酶难以完全满足淀粉糖绿色生产及副产物综合利用的需求,因此有必要挖掘适合的新型脱支酶。本研究筛选并构建来源于类芽胞杆菌STB16的低聚糖脱支酶基因(oga)的枯草芽孢杆菌表达系统,实现低聚糖脱支酶的异源表达,并探究重组酶的酶学性质和底物特异性。结果表明,枯草芽孢杆菌发酵上清液的酶活力可达162.33 U/mL,重组酶的最适反应温度50℃、最适反应pH值6.0,且专一地作用于底物中聚合度为1的分支的α-1,6-糖苷键。相比于其它类型的脱支酶(底物转化率低于检出限),重组低聚糖脱支酶对异麦芽糖、异麦芽三糖、潘糖等异麦芽低聚糖具有更彻底的水解能力,底物转化率达97.4%~100%,且产物为葡萄糖,因此更适合用于处理葡萄糖母液,可使一次母液、二次母液和色谱分离尾液中葡萄糖含量分别提升3.6%,12.7%和34.4%。相关研究结果可为新型脱支酶的开发和利用奠定理论基础,也为淀粉糖加工副产物的综合利用提供重要参考。

羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究

为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。

基于底物激活的蛋白酶法羊毛地毯生态丝光处理

针对蛋白酶难以降解高硫羊毛角蛋白的问题,构建了由底物激活剂LKZ-630与蛋白酶Savinase 16L组成的蛋白酶催化体系,采用该体系联合机械刮毯和刷毯对羊毛地毯进行丝光处理。通过酶活力、酶吸附性、羊毛水解度、地毯颜色、X射线衍射能谱及红外谱图等测试,分析了LKZ-630对酶水解羊毛的促进作用以及丝光处理前后羊毛地毯的外观及微观结构变化。结果表明:LKZ-630可打开羊毛纤维中二硫键,2 g/L的LKZ-630可使酶对羊毛的活力提高1575倍,可使羊毛纤维对酶的平衡吸附量提高12.7倍,使酶对羊毛的水解速率提高36.3倍;刮毯和刷毯作用使得处理后羊毛地毯中纤维细度由根部至尖端逐渐变细,处理后地毯触感柔软、有层次感且有蚕丝般光泽,其CIE亮度值增加6.99,白度值增加50.12,黄度值减小14.84。

底物浓度对人粪与秸秆半干式混合厌氧发酵的影响

为探究底物浓度对农村人粪与秸秆半干式厌氧发酵的影响规律,在使用沼液对玉米和小麦秸秆进行浸泡预处理后,使其分别与人粪混合开展半干式厌氧发酵研究,设置了10%、12%及14%3种不同底物浓度,考察其对半干式厌氧发酵的影响,监测试验过程中产气量变化和沼液中pH值、NH_(4)^(+)-N、VFAs、COD_(cr)等指标的变化情况,总结归纳其变化规律,并且分析产生沼渣用于农业生产的可行性。结果表明,不同试验组各指标变化趋势具有相似性;产气性能方面,相同底物TS=12%时试验组产气量最优,不同底物的试验组中人粪与小麦秸秆的混合发酵更优;发酵料液特性方面,底物浓度越低发酵料液的指标变化越温和,发酵过程越稳定,缓冲能力越高,相同底物浓度时人粪与小麦秸秆的试验组合更具有缓冲能力、发酵过程更稳定;发酵后沼渣方面,各个试验组的沼渣均符合制肥标准。综上所述,在底物浓度为12%时,人粪与农作物秸秆进行半干式混合厌氧发酵的试验各方面性能最好,小麦秸秆比玉米秸秆更适合做人粪厌氧发酵的调理剂。

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1在肺部疾病中作用及机制的研究进展

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)是Ras GTPase超家族的重要成员,在细胞的运动、增殖、黏附等方面发挥核心作用,同时还参与调节血管通透性以及细胞屏障功能。近年来,RAC1在多种肺部疾病发生、发展过程的作用逐渐受到关注,并逐渐成为肺部疾病研究的新方向。本文系统阐述了RAC1的生物学特性并总结了其在肺肿瘤、慢性阻塞性肺疾病、肺损伤和动脉型肺动脉高压中的功能及分子机制,以期为肺部疾病的治疗提供新思路。

不同补充营养和产卵底物对桑螟产卵的影响

为探明补充营养和产卵底物对桑螟(Glyphodes pyloalis)生殖的影响,同时也为桑螟的室内饲养条件及诱捕器的改进提供参考,比较桑螟取食不同补充营养的产卵量及其对不同颜色、粗糙程度底物的产卵选择。配制10%蔗糖、10%果糖、10%葡萄糖、5%蔗糖+5%果糖、5%蔗糖+5%葡萄糖、5%果糖+5%葡萄糖、3.33%蔗糖+3.33%果糖+3.33%葡萄糖和水8种补充营养,选取红、黄、绿、蓝、紫、白6种颜色塑料包扎绳作为产卵底物,调查不同补充营养对桑螟产卵量的影响,并明确桑螟成虫对不同颜色产卵底物的选择偏好;另以新鲜桑叶以及杯壁光滑和带有横纹的2种粗糙程度不同的塑料杯作为产卵底物,研究桑螟对不同粗糙程度底物的产卵偏好。结果表明,以10%蔗糖为桑螟成虫补充营养时产卵期(5.3 d)最长、单雌产卵量(233.3粒)最大,且更偏好在粗糙程度高的黄色底物上产卵。在桑螟室内饲养中,选用10%蔗糖作为成虫补充营养,产卵底物则考虑黄色且粗糙程度高的更有利于桑螟室内种群的繁殖,还可为桑螟诱捕器外观改造提供思路。

能量底物对动物肠道功能的调控作用研究进展

动物的生长发育和生命活动需要消耗大量能量,包括组织器官活动、细胞分裂以及细胞内的各种生物化学反应等。肠道发育和功能与动物生长及生产密切相关,且近年来受到越来越多的关注。因此,推测能量底物供给对肠道发育和功能影响显著,但目前对于动物肠道发育和功能对能量底物的需求及优先性选择的研究非常有限。本文综述了葡萄糖、短链脂肪酸、谷氨酸和谷氨酰胺等能量底物的作用特点及不同能量底物对动物肠道发育和肠道稳态的调控作用,为优化生产中能量供给、改善肠道发育提供营养策略和技术指导。

酶底物光谱法与酶底物法检测水中大肠菌群的比较分析

采用新型酶底物光谱法和酶底物法对不同类型水样中总大肠菌群、大肠埃希氏菌及粪大肠菌群指标进行同步检测。两种方法各有优势,采用SPSS软件对检测结果处理后进行配对t检验,结果显示:两组总大肠菌群的数据P=0.057,相关系数r=0.904;两组大肠埃希氏菌的数据P=0.593,相关系数r=0.972;两组粪大肠菌群的数据P=0.136,相关系数r=0.986,表明两种检测方法具有相关性,且没有统计学意义上的显著性差异。采用酶底物光谱法检测有证质控样品,总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪大肠菌群的检测结果均在质控样真值范围内,证明该方法检测准确度符合要求。酶底物光谱法与酶底物法相比,反应原理类似,操作更加简便,具有仪器自动化和智能化快速检测、判读、存储、联网传输数据等优点,可满足实验室常规检测需求,在应急突发事件现场检测方面有较强的运用前景和优势。

玉米赤霉烯酮降解酶热稳定性及底物特异性改造策略

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是污染范围较大的真菌毒素,广泛存在于玉米、大麦、小麦和高粱等谷物及其副产品中,对饲料行业和畜牧养殖业造成严重的经济损失。利用生物技术对ZEN及其衍生物进行降解和脱除是未来解决ZEN污染的重要途径。然而,目前发现的ZEN降解酶热稳定性差,催化效率低,难以满足工业生产中高温、酸、碱等极端条件的需求。本文综述了近年来利用蛋白质工程提升ZEN降解酶热稳定性和底物特异性的改造策略,阐明ZEN降解酶改造的研究进展及存在问题,为开发ZEN降解酶的工程改造提供参考。

水中粪大肠菌群的测定-酶底物法与荧光光度法的比较

采用酶底物法和荧光光度法对水源水、景观水、污水中粪大肠菌群进行检测。通过检测高浓度标准样品与低浓度标准样品发现,酶底物法和荧光光度法相比,荧光光度法检测结果相对误差更小,跟接近于真值,其结果更为准确。荧光光度法相对标准偏差低于酶底物法,表明荧光光度法检测的稳定性优于酶底物法。通过选取不同类型的实际样品分别用2种方法测定,并对结果进行统计学分析,发现2种方法在统计学中具有相关性,无显著差异。采用荧光光度法测定粪大肠菌群具有测定时间短,减少了人为误差,同时避免了测定时间对结果的影响,特别适合应急检测。

酶底物法测定污泥中粪大肠菌群的方法研究及比对

为了提高污泥微生物学指标粪大肠菌群的检测效率,验证采用酶底物法检测该指标的可行性及适应性,开展方法研究及比对试验。采用酶底物法和多管发酵法对污泥中粪大肠菌群进行同步测定,检测结果采用SPSS软件进行数据处理及配对t检验,全国6家实验室201组比对结果显示:两组数据P=0.141(>0.05),相关系数r=0.964,表明两种检测方法相关性较好,没有统计学意义上的显著性差异,具有一致性。3家实验室的6个实验组分别对低、中、高三个浓度的实际样品以及有证标准物质配制的样品进行了6次重复测定:实验室内相对标准偏差范围分别为4.5%~13.7%、1.6%~6.7%、1.4%~3.6%和1.1%~4.5%;实验室间相对标准偏差分别为8.7%、5.2%、5.3%、3.1%;重复性限依次为0.44、0.39、0.43和0.27;再现性限依次为0.44、0.49、0.81和0.31;实验室内的相对误差范围为0.91%~2.8%;相对误差最终值为1.9%±1.5%。通过试验验证,酶底物法测定污泥中粪大肠菌群的方法精密度、准确度符合要求,确认方法检出限为10MPN/g。多管发酵法、滤膜法分别是现行检测污泥中粪大肠菌群的国标方法和行标方法,酶底物法与前两者相比,具有操作简单、准确度高、不需要确证试验、检测效率高等特点。酶底物法可作为测定污泥中粪大肠菌群指标的补充方法。

普列克底物蛋白同源样结构域家族A成员3在相关疾病中的研究进展

普列克底物蛋白同源样结构域家族A成员3(pleckstrin homology-like domain family A member 3,PHLDA3)广泛存在于人体器官中。研究表明,PHLDA3在恶性肿瘤、糖尿病、心血管疾病和器官损伤等疾病的发生、发展中发挥作用。本文对PHLDA3在上述相关疾病中的研究现状进行综述。

一种含SNAP-tag TM底物的硫醇荧光探针

合成了一种同时含α,β-不饱和酮活性位点和SNAP-tag TM底物的香豆素母体探针香豆素-烯酮-苯甲氨基鸟嘌呤(CAKBG).通过测试探针CAKBG的紫外-可见吸收光谱和荧光发射光谱,发现探针CAKBG在极性溶剂(例如,甘油、乙二醇、水、DMSO)中有更长的吸收波长,且探针CAKBG对溶液的pH变化不敏感.此外,光谱实验发现生物硫醇Cys和Hcy均能引起探针CAKBG的最大吸收波长发生蓝移,且当激发波长为405 nm时,Cys和Hcy均能导致探针CAKBG在487 nm处的荧光发射峰明显增强.细胞成像结果表明,含有SNAP-tag TM底物的硫醇荧光探针CAKBG在活细胞中可以对Cys、Hcy进行荧光成像.综上,SNAP-Tag TM蛋白标签技术有望今后在硫醇荧光探针的细胞成像中得到推广应用.

普列克底物蛋白2/miR-196a信号轴介导肿瘤微环境中肺癌细胞的通讯机制研究

背景与目的:阐明介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)与肿瘤细胞之间通讯的信号分子仍然是一个巨大的挑战,这些信号分子对癌症转移至关重要。本研究旨在探讨普列克底物蛋白2(pleckstrin-2,PLEK2)/miR-196a信号轴介导肿瘤微环境中肺癌细胞的通讯机制。方法:选择人肺腺癌细胞系H1299和人胚胎肺细胞MRC-5作为研究对象。用表达PLEK2的慢病毒(PLEK2)和载体对照(Vector)转染H1299细胞,并在转染24 h后分离外泌体(Vector_exo、PLEK2_exo)。采用miR-196a模拟物或抑制剂转染MRC-5细胞。通过蛋白质印迹法(Western blot)分析PLEK2和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白水平,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析miR-196a表达,采用transwell实验测定细胞转移和侵袭能力。将6只雌性BALB/c-nu小鼠随机分为Vector组和PLEK2组,每组3只。通过尾静脉向各组小鼠注射转染Vector或PLEK2的H1299细胞。4周后,取出肺组织进行H-E染色和免疫组织化学染色分析α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达。所有动物实验均经长沙市第一医院(中南大学湘雅医学院附属长沙医院)伦理委员会批准(伦理编号为EI-2021-103)。结果:与Vector组相比,PLEK2组小鼠肺结节数和转移灶中α-SMA表达显著增加(P<0.001)。与Vector组相比,PLEK2组H1229细胞中miR-196a表达水平显著增加(P<0.05),并且PLEK2_exo中miR-196a表达水平显著高于Vector_exo(P<0.05)。与Vector_exo组相比,PLEK2_exo组MRC-5细胞中miR-196a、α-SMA和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)表达水平显著增加(P<0.05)。与阴性对照(negative control,NC)相比,miR-196a转染的MRC-5细胞中α-SMA和FAP表达水平显著增加(P<0.05)。相反,通过miR-196a抑制剂(si-miR-196a#1、si-miR-196a#)转染,α-SMA和FAP表达水平被显著抑制(P<0.05)。与NC-CM组相比,miR-196a-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和波形蛋白(vimentin)表达均显著增加(P<0.001),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著降低(P<0.001)。此外,与Vector_exo-CM组相比,PLEK2_exo-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和vimentin表达均显著增加(P<0.01),E-cadherin表达显著降低(P<0.001)。结论:PLEK2上调能够增强肺癌细胞来源的外泌体miR-196a水平,从而促进CAFs激活。激活的CAFs能够进一步增强肺癌细胞的侵袭能力。

曲美他嗪干预慢性心力衰竭底物代谢机制的研究进展

曲美他嗪作为燃料底物可改善慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)的研究已得到充分证明,但其潜在机制尚未完全明确。本文通过总结众多研究中曲美他嗪对CHF的效果,推测曲美他嗪可能通过促进细胞底物代谢的动态平衡发挥改善CHF的作用,为未来治疗CHF提供一种可能的有效策略。

酶底物法测定湖泊水中粪大肠菌群的不确定度评定

根据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012),对湖泊水中粪大肠菌群的测量不确定度进行评估。按照《水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》(HJ 1001—2018)要求,对湖泊水样进行连续10次重复测定,分别评估MPN的不确定度和样品体积的不确定度。测得水样粪大肠菌群浓度为5.2×10^(2)MPN/L,拓展不确定度为0.15lg(MPN/L)。结果表明,MPN是影响粪大肠菌群浓度不确定度的主要分量,对MPN的不确定度评定需要同时考虑MPN值的不确定度和重复测量的不确定度。

水中粪大肠菌群的测定——多管发酵法与酶底物法的比较

采用多管发酵法和酶底物法,同步测定30个平行样品中的粪大肠菌群。比较数据结果表明,2种方法测定的实验结果具有相关性,且在统计学上没有显著差异。多管发酵法虽作为经典的粪大肠菌群检测方法,需要的试剂和器材比较多,分析步骤多,检测周期长,样品检测结果的相对偏差明显高于酶底物法。酶底物法检测周期短,操作方便,对试验环境条件要求低,弥补了多管发酵法的不足能更好满足环境监测要求。