庚型肝炎病毒NS5cDNA片段的表达及其免疫原性的研究

一段长度为 880bp的庚型肝炎病毒cDNA在大肠杆菌BL2 1(DE3)菌株中得到表达。此cDNA被插入到表达质粒 pGEX 5X 1中 ,位于编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶 (GST)的DNA序列下游 ,并与GST处于同一阅读框。用乳糖在 37℃下诱导表达出以包涵体形式存在的GST NS5 3融合蛋白 ,并用脲溶法提取了该蛋白 ;在 2 0℃诱导时 ,表达出的蛋白大部分可溶 ,用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析柱对可溶性的融合蛋白进行了纯化。免疫印迹实验证明 ,此融合蛋白能被庚型肝炎病人的血清和自制的抗GST血清特异性地识别。用PCgene软件对NS5 3氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇进行了分析。本研究为庚型肝炎ELISA诊断试剂研制打下了基础。