康氏系列方联合α-2b干扰素治疗慢性乙型肝炎临床研究

目的观察康氏系列方联合α-2b干扰素治疗e抗原阳性慢性乙型肝炎的临床疗效。方法选择109例e抗原阳性慢性乙型肝炎患者,随机分为中西医结合组和干扰素组,中西医结合组51例,给予α-2b干扰素治疗并在康氏"疫郁"理论的指导下应用其系列方剂;干扰素组58例,采用α-2b干扰素治疗。结果中西医结合组可在早期降低患者的中医症候积分,提高症候疗效(P<0.05);治疗3个月及治疗结束时,中西医结合组完全应答率为29.4%和49.0%,干扰素组为15.5%和31.0%,两组疗效比较差异有统计意义(P<0.05);随访12个月,中西医结合组持续应答率为62.7%优于干扰素组43.1%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论康氏"疫郁"理论指导下的个体化康氏系列方联合α-2b干扰素治疗能更快地缓解患者临床症状,提高症候疗效,更早地获得治疗应答,提高完全应答率及持续应答率。

李兆洛与合河康氏家塾刻书事迹考述

清代合河(今山西兴县)康氏在乾嘉时期以科第起家于寒微,成为"一门四进士"的显赫家族,并形成了重学兴教的族统。其中康绍镛一支于刻书最有成就,其家塾曾于嘉庆二十三年至道光二年之间聘请名儒李兆洛为师,并借他之力相继在广州和扬州刊成《古文辞类纂》、《七十家赋钞》、《骈体文钞》等文学选本。这些选本既为名家所编,又为名家所校,加之皆系初刻,对后世产生了重要的影响。

康氏系列方联合保肝治疗慢性乙型肝炎的疗效观察

目的观察康氏系列方联合保肝治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法随机选择141例慢性HBV感染者,分为治疗组和对照组,治疗组72例给予康氏系列方辨证施治联合西药保肝治疗;对照组69例采用西药保肝治疗。疗程18个月。结果治疗组中医症候积分的改善、ALT/复常率、HBeAg阴转率以及HBV-DNA阴转率均高于对照组,且ALT复发率低于对照组(P<0.05)。结论康氏系列方结合保肝治疗可以明显改善患者的临床症状,提高ALT复常率,降低其复发率,并能一定程度提高HBeAg及HBV-DNA的自然阴转率。

康氏木霉固态发酵生产纤维素酶条件的研究

以麸皮和玉米芯为主要原料,采用康氏木霉(Trichoderma koningn)固态发酵生产纤维素酶,并对 影响纤维素酶活性的碳源和氮源配比、外加氮源、培养基初始pH值、培养时间和表面活性剂等因素进行了研究。结 果表明,培养基碳源和氮源配比以麸皮:玉米芯为3:2时最适合;外加氮源以质量分数0．8％硝酸铵产纤维素酶 活性最高;培养基初始pH值为3．0时,纤维素酶活力最高,是对照的1．37倍;表面活性剂以质量分数0．50％“奇 强”洗洁精对提高纤维素酶活性的作用最显著,较对照提高12．4％;培养时间为72 h时,纤维素酶活性最高。

康氏木霉ZJ5纤维素酶发酵培养基的优化

采用响应面方法对康氏木霉(Trichodermakoningii)ZJ5生产纤维素酶的培养基进行了优化.首先通过全因子实验分析培养基组分;稻草粉、麦麸、大麦粉和(NH4)2SO4对纤维素酶三个组分活性的影响,确定主要影响因子为稻草粉和(NH4)2SO4,前者为正影响,后者为负影响,用最陡爬坡路径逼近最大响应区域.利用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度.在优化培养基中发酵6d,CMC酶活、滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶活分别达到了765.8、155.3U/mL和39.54U/mL.

不同温度下康氏粉蚧实验种群生命表

为了探索温度对康氏粉蚧Pseudococcus comstocki发育和繁殖的影响,经室内实验,建立了康氏粉蚧在17℃,20℃,23℃,26℃,29℃和32℃下的实验种群生命表。结果表明:在17～29℃温度范围内,随着温度的升高康氏粉蚧的世代发育历期缩短,在17℃下雌雄世代的发育历期最长(分别为121.27d和89.64d),而29℃时仅分别为52.10d和36.01d,且其温度与发育速率的关系符合Logistic模型。雌虫世代的发育起点温度为8.69℃,有效积温为1020.90日·度;雄虫世代的发育起点温度为10.27℃,有效积温为659.04日·度。在26℃时,康氏粉蚧的世代存活率最高(81.94%),种群趋势指数(I)也最高(322.27),有利于种群增长;而在17℃和29℃,康氏粉蚧的世代存活率分别为64.85%和67.23%,种群趋势指数(I)分别为69.91和42.19,且32℃时康氏粉蚧1龄若虫生长停滞。说明高温和低温都不利于康氏粉蚧的种群增长,且高温的影响大于低温。

康氏木霉固体发酵生产纤维素酶优化研究——培养基用料与工艺条件优化

培养基及培养条件的优化是降低酶制剂成本、提高酶活、实现其工业化生产的重要措施。本研究采用均匀设计U15(58)和双温度培养法(前30h恒温30℃,后续恒温27℃)进行康氏木霉产酶固体发酵生产纤维素酶,对滤纸酶、羧甲基纤维素酶、棉花酶、β-葡萄糖苷酶的活力进行回归分析,而后对各酶活方程求和得到纤维素酶的总活力回归方程并进行约束规划求解。结果表明:应用双温度培养法进行康氏木霉固体发酵生产纤维素酶时,在自然补给氧气,培养基pH自然(约6.5),并保持环境湿度约60%的条件下,72h是适宜的发酵周期;培养基构成以稻草粉50%, (NH4)2SO4 8%,麸皮42%,加水量以4.9倍的固体物质为宜;少量的Tween80有利于纤维素酶活力的提高。

异色瓢虫对康氏粉蚧的捕食功能

在实验室条件下,初步研究了异色瓢虫对康氏粉蚧的捕食作用,采用Holling-Ⅱ型方程和Holling-Ⅲ型功能反应模型对异色瓢虫捕食康氏粉蚧的作用进行拟合。结果表明,异色瓢虫的各龄幼虫及成虫的功能反应均属符合Holling-Ⅱ型。1头异色瓢虫3龄幼虫、4龄幼虫、雄虫、雌虫对康氏粉蚧的最佳寻找密度分别为:1∶19,1∶20,1∶19,1∶19,其寻找效应随着猎物密度的增加而降低。

拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)UV III纤维素酶合成的诱导与阻遏

拟康氏木霉 (T .pseudokoningii)TH经紫外诱变获得一抗高浓度葡萄糖阻遏突变株UVIII,纤维素酶产量显著提高。研究表明 ,UVIII对诱导物的敏感性增加了 10 0倍 ,并且对葡萄糖的吸收能力明显下降 ,导致部分解除了葡萄糖阻遏作用 。

不同碳源诱导康氏木霉产纤维素酶的研究

以不同碳源发酵培养康氏木霉,定时测定粗酶液的纤维素酶活;结合mRNA分析,提取诱导培养的菌体总RNA,进行RT-PCR扩增纤维素酶系的主要基因。结果显示,以微晶纤维素为碳源直接诱导培养康氏木霉3d,纤维素酶活力最高,CMC酶活达到17.58U/mL,P-NPC酶活达到11.39U/mL,FPA酶活达到1.68U/mL;菌体的RNA进行RT-PCR能够较为稳定的扩增出纤维素酶系的主要基因CBHⅠ、CBHⅡ、EGⅠ、BGⅠ,推测结构相对完整的纤维类物质微晶纤维素对康氏木霉产纤维素酶诱导活性较高。表明纤维素酶合成的调节发生于预翻译水平,加入诱导物后引起纤维素酶基因转录表达,酶合成和表达调节是协同发生的。

康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在大肠杆菌中的表达

将康氏木霉(Trichoderma koningii)总RNA反转录成cDNA第一链,并以之为模板进行RT-PCR,合成约1.5kb的纤维二糖水解酶Ⅰ(cbh I)基因。cbhI基因经测序确认后克隆到表达载体pET-30a(+)上,PCR和双酶切鉴定筛选阳性重组子;将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,并用0.4mmol/L的IPTG诱导表达重组蛋白。实验结果:cbh I基因在BL21(DE3)plysS中胞内融合表达,重组蛋白pNPC酶活为15.6U/L,最适反应温度为45℃,最适pH值为5.0,Mn2+对酶活力有明显的促进作用,SDS-PAGE表明重组蛋白分子量约为70kDa。

康氏木霉木聚糖酶的分离纯化及特性

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-25凝胶色谱脱盐和Sephadex G-100凝胶色谱等分离纯化技术，从康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵液中分离出木聚糖酶，纯化后的木聚糖酶经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳鉴定为单一组分，其相对分子质量为55208．所得的木聚糖酶的最适反应温度为65℃，pH值为6．0．该酶稳定性较好，在30—60℃下放置2h能保持83％以上的酶活；在3．0-10．0的pH值范围内能保持85％以上的酶活．研究表明：金属离子Ba^2＋，Pb^2＋，Fe^2＋，Fe^2＋，Al^3＋和高浓度（12mmol/L）的Cu^2＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L的Cu^2＋对该酶反应有促进作用．该木聚糖酶作用于Birchwood木聚糖的米氏常数为5．37g/L，最大反应速率为0．94μmol／min．

高活力纤维素酶菌株康氏木霉B—7的选育与产酶条件的研究

野生型康氏木霉８５４－Ｂ＿２分别经物理化学诱变因子，ＴＤＰ辐射器和空间微重力辐射等因素的多级处理，得到１株形态发生明显改变的变异株Ｂ—７，其固体培养物的纤维素酶各组分酶活力，如滤纸糖酶活力（ＦＰＡ）为３４ｕ／ｇ，羧甲基纤维素酶活力（ＣＭＣ—ａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ，β－葡萄糖苷酶活力（β－Ｇｌａｓｅ）为２９．０ｕ／ｇ，与８５４－β２相比，分别提高５．９倍，７．６倍和４．２倍。其固体培养的最佳条件是：ｐＨ６．０，２８～３０℃，９６小时，最适培养基成分为：青草粉：麸皮＝７：３，１．５～２．０倍水和（ＮＨ４）２ＳＯ４１．５～２．０％（均以固体料计）。

康氏木霉利用废酒糟产纤维素酶的研究

过正交试验等方法优化了康氏木霉利用工业废弃酒糟产纤维素酶的条件,并对用该条件所制取的纤维素粗酶与工业酶制剂进行糖化能力对比试验。结果表明:康氏木霉利用酒糟产酶的最优条件为发酵时间6d、固液比1∶1.5、接种量8%、pH值4.0、温度31℃,并且较适宜在以2.0%蛋白胨为氮源的酒糟固态培养基中产酶;自制粗酶与工业酶制剂具有相似的纤维素水解效果,具有较大的改良和优化潜力。

农杆菌介导的拟康氏木霉遗传转化及T-DNA插入突变体的筛选

建立并优化了农杆菌介导转化拟康氏木霉（Trichoderma pseudokortingii SMF2）获得T-DNA插入突变体的体系，在木霉孢子浓度10^6个／mL、农杆菌A600=0．15～0．20、乙酰丁香酮浓度为250μmol／mL的条件下共培养36h转化率最高，转化子可达60-120个／10^5个孢子。共获得转化子1000多个，连续转接5代能够稳定遗传，部分转化子表现为生长和形态异常，PCR验证潮霉素B抗性基因已整合进转化子基因组DNA中。该转化体系的建立为开展其生防机理研究和探索菌株改良奠定了基础。

康氏木霉内切葡聚糖酶(EGⅠ)基因的克隆及表达

目的:构建纤维素酶EGⅠ原核表达载体,并对表达产物进行初步酶学性质研究。方法:以康氏木霉的总RNA为模板,利用RT-PCR扩增内切葡聚糖酶EGⅠ,重组到T7启动子控制下的质粒pET.His中,构建重组质粒pET.His-EGⅠ,并将其转化至E.coli BL21(DE3)plysS感受态细胞中,经0.4mmol/L的IPTG诱导表达后对其表达产物进行13%SDS-PAGE分析。结果:SDS-PAGE电泳显示EGⅠ在大肠杆菌中得到了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带,分子量约45kDa。初步研究表明:重组蛋白具有内切葡聚糖酶活性,最适pH为6.0,温度在30℃～40℃时酶活稳定,金属离子Mn2+对酶活力有明显的促进作用。结论:纤维素酶EGⅠ在大肠杆菌中成功表达,具有一定活性。

拟康氏木霉胞外多糖对番茄灰霉病的诱抗作用及对几种防御酶活性的影响

喷施不同浓度(5 0～6 0 0mg/L)的拟康氏木霉的胞外多糖后,番茄灰霉病的发病率明显降低.与植物系统抗性相关酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性显著升高,上升幅度随多糖的浓度增加而递增,多糖浓度达到2 0 0mg/L以上时增加趋缓.酶活性在3～4d达到最高,之后有所下降,但仍高于对照.当多糖浓度为2 0 0mg/L时,3种酶的最高活性分别比对照高出12 3%、14 6 %和10 2 % .体外试验未发现该多糖对灰霉菌的生长有抑制作用。

康氏木霉基因组DNA提取方法的比较研究

采用3种常规DNA提取方法提取瑞氏木霉基因组DNA。结果表明:冷冻研磨CTAB法更适合此真菌DNA的提取,试剂盒提取的总DNA纯度和浓度也较高,但是价格昂贵,饱和酚抽提法提取的DNA浓度不高,且易有降解现象,不适合分子生物学操作的要求。

一种来源于康氏木霉的纤维素酶增效蛋白的分离纯化

引言在可持续发展、低碳经济的背景下，利用纤维素酶水解木质纤维原料生产燃料乙醇无疑是一项符合我国国情的能源战略‘“。然而纤维素酶的水解效率低是制约纤维素燃料乙醇生产的最大障碍。