当归延伸因子AsEF-1β基因的克隆及胁迫应答分析

延伸因子1β(EF-1β)是蛋白质生物合成过程中肽链延长必需的调节因子之一。该研究采用同源克隆和RACE扩增技术克隆当归EF-1β基因序列,分析该基因序列特征、蛋白结构特点及UV-B辐射胁迫下的组织响应表达,以揭示当归栽培生境变迁过程中对UV-B胁迫适应的分子机制。结果显示:(1)成功克隆获得当归EF-1β基因全长序列(950 bp),编码225个氨基酸,命名为AsEF-1β(GenBank登录号:MG736314);AsEF-1β蛋白的分子量为24.5 kD,理论等电点为4.48,属亲水性氨基酸,在其C末端具有一个EF-1B超蛋白家族的典型结构域和保守区,鸟嘌呤核苷酸交换结构域;其氨基酸序列与同为伞形科的胡萝卜氨基酸序列相似性最高,达93%。(2)qRT-PCR分析结果显示,AsEF-1β基因在当归根部的表达量显著高于茎和叶(P<0.05);UV-B辐射胁迫下,茎及叶中的表达量均上调,分别是自然光照处理的2.43和3.76倍。研究表明,AsEF-1β基因可能参与当归对UV-B辐射胁迫的适应过程,为深入研究其在药用植物生长发育、逆境抗性形成及药效物质的生物合成代谢过程的生态调控奠定了基础。

柞蚕蛹全长cDNA文库的构建和随机EST测序

采用RNA转录5′末端转换（SMART）技术构建了柞蚕（Antheraea pernyi）蛹的全长cDNA文库。所构建cDNA文库的容量为5×10^5个独立克隆,插入片段长800-2500 bp,且90%的插入片段大于1 kb。随机挑取288个克隆进行表达序列标签（EST）测序,有效序列为250条,根据EST测序结果计算文库重组率达95%。经序列拼接得到175个unigenes,通过序列比对发现其中97个unigenes与GenBank中的已知基因高度同源,且有88条全长序列,基因的完整性比率达90%。在随机EST测序中获得了具有5′端和3′端非编码区的延伸因子-1α基因（Gen-Bank登录号：FJ788508）,该基因cDNA全长1743 bp,有一个1392 bp的开放阅读框,编码含463个氨基酸残基的蛋白,蛋白的理论分子质量为50.4 kD,等电点8.96。EST测序分析表明,柞蚕蛹cDNA文库符合构建基因文库的质量要求,该文库的构建将有助于柞蚕功能基因的克隆和研究。