小檗碱对2型糖尿病大鼠视网膜正性转录延伸因子b表达的影响(英文)

目的观察2型糖尿病大鼠视网膜正性转录延伸因子b(P-TEFb)蛋白的表达及小檗碱对其的影响。方法链脲佐菌素(35mg·kg^(-1),ip)诱导糖尿病大鼠模型,2 wk后予高糖高脂饲料喂养共14 wk。wk 17起,大鼠共分为7组,每组10只:A组(不予链脲佐菌素且用标准饲料喂养,不予药物治疗),B组(不予药物治疗),C、D、E组(分别予小檗碱75、150、300 mg·kg^(-1)·d^(-1)),F组(予非诺贝特100 mg·kg^(-1)·d^(-1))和G组(予罗格列酮4mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药16 wk。处死大鼠,采用HE染色检查视网膜结构变化,免疫组化检测P-TEFb的表达,P-TEFb由细胞周期蛋白依赖激酶9(CDK9)和细胞周期蛋白T1 (cyclin T1)组成。结果正常对照组大鼠的视网膜厚度大于其他各组,经中、高剂量小檗碱(150、300 mg·kg^(-1))和罗格列酮治疗能增加糖尿病视网膜的厚度,但视网膜的结构在各组间无差别。中、高剂量小檗碱和罗格列酮都能明显促进糖尿病大鼠视网膜中CDK9和cyclin T1蛋白表达(P<0.01),但低剂量小檗碱(75mg·kg^(-1))和非诺贝特对糖尿病视网膜中CDK9和cyclin T1的表达没有影响(P>0.05)。结论小檗碱调控视网膜P-TEFb(CDK9和cyclin T1)蛋白的表达可能是其改善糖尿病视网膜病的机制之一。

小檗碱对糖尿病大鼠海马CA3区PPARs和P-TEFb表达的影响(英文)

目的:观察小檗碱对2型糖尿病海马CA3区损伤的保护作用及其该过程中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)α/δ/γ和正性转录延伸因子b(P-TEFb)的作用。方法:腹腔注射35mg/kg链脲菌素加高糖高脂饲料喂养16周建立2型糖尿病大鼠模型,随后16周每天分别给予低中高剂量小檗碱75、150、300mg/kg、非诺贝特100mg/kg和罗格列酮4mg/kg,处死大鼠后用HE染色检查海马CA3区和免疫组化技术检测PPARα、δ、γ和Cdk9、cyclin T1的表达。结果:糖尿病大鼠海马CA3区的锥体细胞形状和排列变得不规则、数量减少,中高剂量小檗碱和罗格列酮能恢复受损伤的锥体细胞接近正常大鼠的水平。在海马CA3区几乎检测不到PPARγ蛋白的表达,中高剂量小檗碱和非诺贝特明显增加糖尿病大鼠中减少了的PPARα和PPARδ表达(P<0.01);中高剂量小檗碱和罗格列酮能明显使降低了的Cdk9和cyclinT1表达恢复至正常水平(P<0.01)。结论:小檗碱调控海马CA3区PPARα/δ和正性转录延伸因子b(Cdk9和cyclin T1)蛋白的表达可能是其改善海马锥体细胞损伤的机制之一。

基于生物信息学分析TCEB1在肝癌中的表达及意义

为探讨转录延伸因子B1(transcription elongation factor B subunit 1,TCEB1)基因在肝癌中的表达和临床意义,利用GEPIA、UALCAN分析TCEB1在肝癌中的表达以及与患者临床病理特征和预后的关系;采用cBioPortal分析肝癌中TCEB1基因的改变情况;利用LinkedOmics分析肝癌中TCEB1的相关基因,并通过Metascape对TCEB1相关基因进行GO和KEGG通路分析;最后通过GeneMANIA构建TCEB1相互作用蛋白质网络。GEPIA和UALCAN的分析结果显示,TCEB1在肝癌组织中显著高表达(P<0.05),且表达水平越高,患者肿瘤分级和预后越差(P<0.05)。cBioPortal数据库检测结果显示,5%(52/1136)的肝癌患者的肝癌样本发生TCEB1基因改变,且基因拷贝数扩增与TCEB1 m RNA表达呈正相关,发生基因改变的患者预后显著较差(P=0.0129)。GO分析结果提示,TCEB1及其相关基因的分子功能主要与转录因子结合、泛素样蛋白转移酶活性、钙黏着蛋白的结合等有关。GeneMANIA分析提示,TCEB1与TCEB2、VHL、CUL2等蛋白质相互作用。本研究表明,TCEB1可作为肝癌患者预后的生物标志物和肝癌治疗新的潜在靶点。

蛋白激酶C对转录延伸正调节因子b(P-TEFb)的影响

本文探讨了PKC的4种亚型α、βⅡ、γ和λ对P-TEFb各蛋白组分的表达影响.成功构建了带有HA标签的pcDNA3.1-PKC的各亚型真核表达载体,并转染HEK293细胞株,用Western bolt检测其表达情况,发现这四种PKC亚型在细胞中表达良好。将PKCβⅡ或者PKCλ转染进入HEK293细胞株,发现其可使CDK9和Cyclin T蛋白表达量升高;但在细胞中高表达PKCα和PKCγ,对P-TEFb各组分表达量没有影响.表明PKC可通过提高P-TEFb的组分表达量,从而上调某些基因的表达.

HIV潜伏感染激活剂研究进展

艾滋病是由HIV病毒感染引起的一种死亡率较高的获得性免疫缺陷综合症,虽然高效抗逆转录病毒疗法(HAART)能够将血浆内病毒载量降至不可检测水平,但病毒并不能被彻底清除,主要原因是HIV感染后会通过在某些细胞内形成潜伏病毒存在于病毒库中,在停用HAART后潜伏病毒将大量复制。目前研究普遍认为HIV潜伏库是根除HIV感染的主要障碍,随之发展出的一种清除潜伏病毒的新策略为:使用HIV潜伏激活剂诱导潜伏病毒复制及其基因表达,然后通过HAART或自身免疫系统将激活的病毒及其宿主细胞杀灭。因此,寻找高效、安全、可行性高的激活剂成为清除潜伏病毒的关键。迄今为止,HIV潜伏感染激活剂有多种,分别作用于HIV转录的不同阶段并各有优缺点。该文将对潜伏感染的机制及其激活剂的最新研究进展做一介绍。

HIV-1转录延伸调控潜伏感染的分子机制

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)作为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的主要致病病原体,目前尚无有效治愈方法。现有的抗逆转录病毒疗法(ART)虽然可以有效抑制病毒复制,但却无法清除潜伏感染的细胞。因此,当前面临的主要挑战是找到安全、有效的方法清除HIV-1潜伏储存库。HIV-1潜伏维持和再激活分子机制的研究已经揭示了HIV-1转录延伸过程在其中所起的核心作用。本综述主要概述HIV-1转录延伸的具体分子过程以及对潜伏感染的调控作用,为进一步探究HIV-1如何实现潜伏和活跃转录之间的平衡提供理论支持,为实现AIDS治愈提供新方向。

RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组,分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白,分别于培养8、14、20、26、32、38 h后,通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(dd PCR)检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6),P<0.05。随培养时间延长,实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P<0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中,筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后,细胞中HIF-1αmRNA表达下调,同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。