延胡索生物碱化学成分及其抗肿瘤作用的研究进展

延胡索在临床治疗中运用广泛,其主要成分为生物碱。现代研究表明延胡索生物碱中的延胡索碱、延胡索乙素、小檗碱、黄连碱巴马仃、d-海罂粟碱、d-异波尔定等成分具有一定的抗肿瘤作用。本文就近年来延胡索生物碱的化学成分及其抗肿瘤作用研究的进展情况作一综述。

珍杉理胃片中延胡索生物碱提取工艺的研究

通过回流与渗漉两种方法来提取延胡索生物碱，并加以比较，为含延胡索制剂的生产工艺提供了依据。

超滤和分子印迹技术联用分离延胡索生物碱

目的利用超膜分离技术和分子印迹技术对延胡索生物碱进行分离。方法以生物碱透过率和高分子截留率为指标,筛选超滤膜、操作压力、料液温度和过膜速率等因素,使用紫外引发聚合制备分子印迹膜,研究其对超滤液中延胡索生物碱的分离性能。结果确定以5μm微滤膜抽滤,在料液温度为29.5℃,操作压力为0.37 MPa,过膜速率为419 mL·min^(-1),使用截留分子量为5000的超滤膜超滤,超滤液比原提取液生物碱含量提高了23%。结论超滤结合分子印迹技术可有效去除延胡索提取液中大分子杂质,提高有效成分含量。

大孔吸附树脂在延胡索生物碱提取分离中的应用

延胡索生物碱是医学上常用的具有较高药用价值的碱类物质,是各类中草药碱类物质中的一种。但是,怎样有效的将生物碱从延胡索中分离出来,仍然是我国医学界的一大重点问题。本文主要运用了大孔吸附树脂纯化方法,进行了延胡索生物碱提取分离实验,以此优化延胡索生物碱的提取分离方法。

延胡索总生物碱对D-半乳糖所致衰老模型小鼠相关指标的影响

目的探讨延胡索总生物碱(YHS)对D-半乳糖所致衰老模型小鼠相关指标的影响。方法以D-半乳糖所致衰老小鼠为实验动物,检测小鼠的学习记忆能力及脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性。结果延胡索总生物碱能使D-半乳糖所致衰老模型小鼠记忆恢复正常,能升高脑组织中SOD、CAT、ChAT的含量,降低AChE的含量。结论延胡索总生物碱有抗衰老的作用。

基于GSE-1细胞相关活性评价体系的延胡索总生物碱萃取纯化工艺研究

目的通过体外抗溃疡活性来评价延胡索总生物碱有机溶剂萃取的纯化工艺。方法采用酸性染料比色法,以延胡索总生物碱纯度为指标,考察大孔吸附树脂结合有机溶剂萃取纯化的总生物碱纯度,并采用MTT法测定GSE-1细胞相关活性评价,对总生物碱纯度和药效进行相关性分析。结果最佳纯化工艺为1 mol/L的HCl溶解树脂纯化物,1倍药液体积的三氯甲烷除杂,药液加氨水碱化,以1倍药液体积的有机溶剂,按照三氯甲烷-乙酸乙酯-正丁醇的顺序分段综合萃取,合并有机溶剂层。结论所建立的纯化工艺稳定可行,总生物碱纯度>90%,体外抗GSE-1溃疡量效关系明确。

延胡索总生物碱滴丸对犬急性心肌缺血模型心肌酶谱影响

目的:观察延胡索总生物碱滴丸对实验犬急性心肌缺血的保护作用。方法:将成年健康、体质量在12~16 kg的比格犬,随机分为5组,模型组、延胡索总生物碱滴丸高、中、低剂量组、丹参滴丸阳性组。采用冠脉前降支结扎的方法,制备急性心肌缺血模型。于冠脉结扎后30 min经十二指肠给予受试药物。在冠脉结扎前、结扎后、药后30、60、120、180 min等时间段内取血,分离血清,检测心肌酶谱的变化。结果:冠脉结扎后,模型组肌酸激酶同工酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草转氨酶(AST)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)持续升高,而延胡索总生物碱滴丸剂各剂量组和丹参滴丸阳性组,能显著抑制心肌缺血引起的血清心肌酶CK、LDH、CK-MB的升高;中剂量组显著抑制AST、HBDH升高,模型组比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论:延胡索总生物碱滴丸剂可有效降低心肌酶的浓度,对犬急性心肌缺血模型有保护作用。

高效液相色谱法测定延胡索总生物碱滴丸中巴马汀碱和脱氢紫堇碱含量

目的:采用高效液相色谱法测定延胡索总生物碱滴丸中巴马汀碱和脱氢紫堇碱含量。方法:色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱,流动相为乙腈-水(含0.4%冰乙酸和0.1%三乙胺)(22∶78),检测波长为338nm,柱温30℃。结果:盐酸巴马汀碱浓度在0.044 8～0.268 8μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 3,平均回收率为98.29%,硝酸脱氢紫堇碱浓度在0.23～1.15μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 4,平均回收率为99.83%。结论:方法简便、准确、重现性好,可用于延胡索总生物碱滴丸中含量测定质控指标。

分光光度法测定元胡止痛片中延胡索总生物碱的含量

目的采用分光光度法测定元胡止痛片中延胡索总生物碱的含量,确定最佳的提取及测定方法。方法用溴甲酚绿与生物碱结合成有机络合物,以定量的有机溶剂提取,用分光光度法在波长413nm处测定。结果平均回收率为100.9%,RSD为0.53%。结论本方法准确、可靠、重复性好,可作为元胡止痛片的质量控制标准。

延胡索总生物碱的急性毒性及其镇痛作用研究

[目的]对延胡索总生物碱的小鼠急性毒性及镇痛作用进行评价。[方法]采用ICR小鼠单次给药毒性试验,观察延胡索总生物碱对小鼠的急性毒性反应和致死性,以Bliss法测定延胡索总生物碱对小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD50)。采用醋酸扭体法考察延胡索总生物碱对外周的镇痛作用,ICR小鼠80只,雌雄各半,随机分成8组,分别为空白对照组、阳性对照组、延胡索乙素组、更高剂量组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、更低剂量组,各组小鼠灌胃给药后1h,经腹腔注射0.6%冰醋酸0.2mL·20g-1,记录15min内小鼠的扭体次数,计算扭体次数抑制率;采用热板致痛试验考察延胡索总生物碱对中枢的镇痛作用,将筛选出的合格KM雌性小鼠80只随机分成8组,分组同上,各组于给药前重复测量痛阈3次,取平均值作为该小鼠给药前痛阈值,给药后30、90、180min各测定1次痛阈值。[结果]延胡索总生物碱灌胃给药对小鼠的LD50值为473.36mg·kg-1,95%置信区间为422.34~532.58mg·kg-1。与空白对照组比较,延胡索总生物碱各剂量组对小鼠扭体均具有显著的抑制作用,差异均具有统计学意义(P<0.01);除更低剂量组外,延胡索总生物碱各剂量组镇痛作用均优于延胡索乙素(P<0.01,P<0.05);除更低剂量组外,延胡索总生物碱各剂量组均能明显延长热板所致小鼠的痛阈值(P<0.01,P<0.05),各组痛阈值随浓度的增加呈上升趋势,且给药剂量达到120mg·kg-1后,痛阈值基本不再随浓度变化而变化。[结论]延胡索总生物碱具有明显的镇痛作用,在一定剂量范围内可安全使用。

延胡索总生物碱对犬急性心肌缺血保护作用及机制研究

目的通过研究延胡索总生物碱(TAC)对犬急性心肌缺血的保护作用,探讨TAC对心肌缺血的作用机制。方法取比格犬,分为模型组、TAC高、中、低剂量组和阳性组。采用结扎犬左冠状动脉前降支制备心肌缺血模型,于结扎前、后及给药后取血,测量血压和心外膜电图,探究TAC对心肌缺血药效学作用。检测抗氧化反应、血管内皮活性物质等指标探究机制。结果TAC可抑制心肌梗死面积和范围。与模型组比较,TAC各组对血压、心率及血液相关指标具有明显药效学作用。结论TAC可抑制血压、升高心率,降低心肌缺血程度和梗死面积。作用机制是多靶点的,可增强心肌抗氧化能力,改善血液流变性,防止血液高凝和血栓形成。

延胡索总生物碱对慢性癫痫大鼠皮层NLRP3/caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡的影响

目的:研究延胡索总生物碱(TAC)对戊四氮(PTZ)所诱导的慢性癫痫大鼠的治疗作用,探讨其对大脑皮层核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/caspase-1/消皮素D(GSDMD)介导的细胞焦亡的影响及可能机制。方法:清洁级雄性SD大鼠30只,随机抽取6只大鼠作为正常组,其余大鼠采用PTZ(35 mg/kg)腹腔连续注射28 d复制慢性癫痫模型。将造模成功的18只大鼠随机分为模型组、低剂量TAC组和高剂量TAC组,每组6只。低、高剂量TAC组大鼠分别灌胃给予7和14 mg/kg的TAC,连续给药14 d,正常组和模型组大鼠灌胃给予等体积生理盐水。观察记录大鼠全面强直阵挛发作(GTCS)和极小阵挛发作(MCS)的潜伏期;采用HE染色观察颞叶皮层的病理学变化;TUNEL法检测神经细胞凋亡;免疫组化和Western blot法检测皮层组织核因子κB(NF-κB)、NLRP3、caspase-1和GSDMD蛋白表达;免疫组化检测脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL-18)和IL-1β蛋白表达;RT-qPCR检测各组NLRP3、caspase-1和GSDMD的mRNA表达。结果:与正常组相比较,模型组大鼠GTCS和MCS的潜伏期显著缩短(P<0.01);模型组大鼠皮层神经细胞凋亡数量显著增加,皮层组织中TNF-α、IL-18和IL-1β蛋白表达均显著增加,NF-κB、NLRP3、caspase-1 p20和GSDMD N端片段(GSDMD-N)的mRNA及蛋白表达也显著增加(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,各剂量TAC组大鼠GTCS和MCS的潜伏期显著延长,皮层神经细胞凋亡数量显著减少,皮层组织中TNF-α、IL-18和IL-1β蛋白表达均显著减少,NF-κB、NLRP3、caspase-1 p20和GSDMD的mRNA及蛋白表达也均显著减少(P<0.01)。结论:TAC可能通过NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路,减少炎症因子分泌,抑制神经细胞焦亡,从而对PTZ诱导的慢性癫痫大鼠起到治疗作用。

硅钨酸质量法测定延胡索总生物碱质量分数

建立延胡索总生物碱质量分数检测方法.运用硅钨酸质量法,将延胡索总生物碱中生物碱物质转化为可以准确称量的形式,计算延胡索总生物碱质量分数.三批样品质量分数平均值为57.12%,符合中药五类新药技术研究要求.所建立的方法操作简便、准确、可靠,适用于延胡索总生物碱的质量控制.

延胡索总生物碱对慢性低灌注脑损伤大鼠神经保护的作用研究

目的:本研究通过建立永久性双侧颈总动脉结扎复制慢性低灌注大鼠动物模型,探讨延胡索总生物碱(TAC)对脑慢性低灌注损伤的改善作用。方法:选取雄性Wistar大鼠随机分成假手术组、TAC组、阳性对照组和模型组,采用双侧颈总动脉永久性结扎建立动物模型。通过走平横木实验和Morris水迷宫实验,检测精细运动和认知能力;苏木素-伊红染色法观察TAC对脑海马CA1区组织形态学变化;免疫组织化学法检测TAC对脑海马CA1区血管内皮生长因子的表达。结果:与模型组相比,TAC组大鼠精细运动能力和认知功能显著升高(P<0.01),海马CA1区神经元损伤程度减轻,血管内皮生长因子阳性细胞数显著增加(P<0.01)。结论:TAC可明显改善慢性脑低灌注大鼠的学习记忆能力,减轻神经元损伤,提高血管内皮生长因子的表达,对脑神经元有保护作用。

延胡索总生物碱对溃疡性结肠炎小鼠的作用及机制研究

目的观察延胡索总生物碱对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的影响,并初步探讨其可能机制。方法①将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(柳氮磺胺吡啶,300 mg·kg^(-1))、延胡索总生物碱低剂量组(50 mg·kg^(-1))和延胡索总生物碱高剂量组(100 mg·kg^(-1)),每组6只。采用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用7 d建立UC小鼠模型;造模同时连续灌胃给予延胡索总生物碱干预7 d。观测小鼠体质量及便血等疾病症状,计算粪便性状指数;采用ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;测量结肠长度,采用HE染色法观察结肠组织病理变化。②采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞体外炎症模型。不同浓度延胡索总生物碱干预后,采用MTT法检测细胞活性。3.13、6.25、12.5μg·mL^(-1)延胡索总生物碱干预后,检测上清液中IL-6、TNF-α及一氧化氮(NO)含量;qPCR法检测细胞TNF-α、IL-6 mRNA表达;流式细胞术检测巨噬细胞M1表型比例;Western Blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白的表达。结果①与模型组比较,延胡索总生物碱低、高剂量组小鼠的体质量减轻幅度及粪便性状评分均有所降低,血清中IL-6、TNF-α含量均显著降低(P<0.01);高剂量组小鼠结肠长度明显增加(P<0.05);低、高剂量组小鼠肠道上皮细胞破坏程度有所减轻,溃疡灶数量有所减少,溃疡面积缩小,中性粒细胞等免疫细胞浸润程度减轻。②3.13、6.25、12.5μg·mL^(-1)延胡索总生物碱组的细胞相对存活率均高于95%。与LPS组比较,3.13、6.25、12.5μg·mL^(-1)延胡索总生物碱组RAW264.7巨噬细胞的TNF-α、IL-6 mRNA表达显著下调(P<0.01),细胞上清液中的NO、TNF-α、IL-6含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),巨噬细胞的CD86分子表达水平显著降低(P<0.01),细胞p38磷酸化水平显著降低(P<0.01),但ERK和JNK蛋白磷酸化水平未见明显改变(P>0.05)。结论延胡索总生物碱对UC小鼠具有治疗作用,可能与其调控MAPK通路抑制p38磷酸化发挥抗炎活性有关。

延胡索总生物碱对慢性脑缺血大鼠海马沉默信息调节因子1/肿瘤抑制基因P53蛋白信号通路的调控作用及其机制研究

目的研究延胡索总生物碱(TAC)对慢性脑缺血(CCH)大鼠海马CA1区沉默信息调节因子1(Sirt1)/肿瘤抑制基因P53蛋白(P53)信号通路相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法将大鼠按照随机数字表法完全随机分为假手术组、模型组、TAC高剂量组(14 mg/kg)、TAC低剂量组(7 mg/kg),每组6只。运用改良版双侧颈总动脉永久性阻断(BCCAO)法建立CCH大鼠模型,假手术组仅对双侧颈总动脉做分离处理。造模完成1周后,每组分别灌胃给予对应药物或等体积等渗盐水,每日1次,治疗持续14 d。采用苏木素-伊红染色法观察大鼠海马区病理变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿三磷酸缺口末端标记测定(TUNEL)法检测其神经元凋亡情况;免疫印迹染色和免疫组织化学法分别测定Sirt1、P53、P53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(BAX)在大鼠海马区的表达情况并进行各组间比较。结果(1)4组凋亡细胞数量和凋亡率差异有统计学意义(F值分别为71.417、76.835,均P<0.01)。4组间Sirt1、P53、PUMA、BAX、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值差异均有统计学意义(F值分别为1178.390、42.465、867.413、110.656和131.801,均P<0.01)。4组间Sirt1、P53、PUMA、BAX、Bcl-2蛋白相对表达水平差异均有统计学意义(F值分别为9.497、11.863、58.552、186.855和12.466,均P<0.01)。(2)模型组大鼠海马区脑组织神经元较假手术组排列紊乱,胞核固缩增多,胶质细胞和炎细胞明显增多。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元凋亡细胞数量及凋亡率明显上升[分别为(10.8±1.5)个比(2.0±0.9)个和(35.5±4.5)%比(6.2±2.6)%;均P<0.05];Sirt1、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值明显降低(84.6±6.6比244.6±4.9,138.5±6.7比210.9±10.0;均P<0.05),P53、PUMA、BAX蛋白阳性表达区域平均积分光密度值明显升高(156.8±11.6比93.5±11.6,151.3±3.3比38.0±4.0,87.0±5.0比38.4±5.5;均P<0.05);Sirt1、Bcl-2蛋白相对表达水平明显降低(0.51±0.07比0.74±0.07,0.36±0.03比0.53±0.05;均P<0.05),P53、PUMA、BAX蛋白相对表达水平明显升高(0.37±0.06比0.21±0.02,0.62±0.06比0.23±0.02,1.08±0.06比0.45±0.03;均P<0.05)。(3)TAC高、低剂量组大鼠海马区组织结构较模型组相对紧密均匀,神经元排列整齐,细胞结构也相对清晰完整。与模型组比较,TAC高、低剂量组神经元凋亡细胞数量[高、低剂量组分别为(3.8±0.7)、(6.2±1.2)个]及凋亡率[高、低剂量组分别为(12.4±2.8)%、(20.2±3.9)%]均明显下降(均P<0.05);Sirt1、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值(高、低剂量组Sirt1分别为150.0±4.8、131.3±1.3,Bcl-2分别为207.1±7.4、169.5±3.9)明显升高(均P<0.05),P53、PUMA、BAX蛋白阳性表达区域平均积分光密度值(高、低剂量组P53分别为105.9±8.8、115.5±9.0,PUMA分别为56.8±5.1、74.4±3.9,BAX分别为40.5±5.6、48.4±5.0)明显降低(均P<0.05);Bcl-2蛋白相对表达水平明显升高(高、低剂量组分别为0.53±0.05、0.47±0.02,P<0.05),P53、PUMA、BAX蛋白相对表达水平明显降低(高、低剂量组P53分别为0.21±0.02、0.24±0.04,PUMA分别为0.36±0.02、0.28±0.04,BAX分别为0.52±0.02、0.54±0.03;均P<0.05),TAC高剂量组Sirt1蛋白相对表达水平明显升高(0.71±0.05,P<0.05),TAC低剂量组Sirt1蛋白相对表达水平(0.52±0.08)差异无统计学意义(P>0.05)。结论TAC可以减轻CCH大鼠海马CA1区神经元损伤,降低海马区神经元细胞的凋亡率,其机制可能与TAC激活Sirt1/P53通路、抑制P53蛋白活性,从而调控其下游凋亡相关蛋白的表达水平有关。

延胡索总生物碱醋酸盐滴丸的制备工艺研究

目的:建立并优选延胡索总生物碱醋酸盐滴丸的制备工艺。方法:通过滴丸基质种类的筛选以及药液保存温度和滴制速度等因素的考察,确立的滴丸相应参数;通过正交试验设计,优选出滴丸的最佳制备工艺。结果:最佳工艺为PEG6000为基质,药物与基质比例1:9、滴距8-10cm、滴盘温度80±5℃、冷凝温度35℃-10℃、滴速50-60d/min。结论:按照此工艺生产的三批滴丸,结果表明该工艺稳定可行。