延胡索甲素和延胡索乙素的电喷雾质谱研究

目的:对延胡索甲素和延胡索乙素在电喷雾质谱下的裂解途径进行研究。方法:采用高效液相-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MSn)对其样品进行测定。结果:在正离子模式下,延胡索甲素和延胡索乙素围绕碳氮键进行开环裂解,碎裂成苯二亚甲基和四氢异喹啉两部分,形成其鉴定的主要碎片离子。结论:本实验为该类化合物的分析鉴定提供有效的质谱方法。

白花土元胡药材中延胡索甲素和乙素的含量测定

目的建立测定白花土元胡药材中延胡索甲素和乙素含量的方法。方法采用RP-HPLC外标法,Symmetry C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);乙腈为流动相A,0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH6)为流动相B,梯度洗脱;检测波长282 nm。结果延胡索甲素在10.40-208.00μg.ml-1范围内线性关系良好,平均回收率为98.5%,RSD=3.1%;延胡索乙素在10.10-505.00μg.ml-1范围内线性关系良好,平均回收率为101.9%,RSD=2.3%。结论所建方法结果准确可靠,适用于白花土元胡中延胡索甲素和乙素含量的同时测定。

RP-HPLC法测定延胡索中黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索乙素的含量

目的:建立反向高效液相(RP-HPLC)色谱法同时测定延胡索中黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索乙素的含量测定方法。方法:采用Agilent HC-C_(18)(200×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.3%乙酸水溶液(三乙胺调pH值为5.0),梯度洗脱,流速为1mL·min^(-1),检测波长282nm。结果:40min内延胡索药材中黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索乙素3个成分完全分离,峰面积与浓度呈现良好的线性关系(r=0.9995~0.9999);平均加样回收率在95.5%~98.8%,RSD为2.0%~3.0%。测定延胡索中黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索乙素含量分别为1.94%、2.23%、0.53%。结论:该方法快捷可靠,适用于延胡索中黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索乙素3个生物碱类成分的含量测定。

延胡索中海罂粟碱和去氢延胡索甲素制备工艺的研究

目的:通过溶剂萃取法制备延胡索中的海罂粟碱和去氢延胡索甲素。方法:采用单因素实验方法考察不同pH值、萃取溶剂和萃取次数对延胡索生物碱分离纯化的影响,筛选最佳条件。结果:采用pH梯度溶剂萃取法可以从延胡索药材中大量制备高纯度的海罂粟碱和去氢延胡索甲素。结论:本方法工艺简单,实用性强,可工业化。

延胡索甲素调节NMDAR/NF-κB介导的信号通路对利血平诱导纤维肌痛大鼠的作用及机制研究

目的研究延胡索甲素对利血平诱导纤维肌痛大鼠的作用及机制。方法60只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、延胡索甲素低、中和高剂量组,每组12只。模型组及延胡索甲素低、中、高剂量组皮下注射利血平建立纤维肌痛大鼠模型;造模成功后,延胡索甲素低、中、高剂量组分别给予大鼠5、10、20 mg/ml的延胡索甲素灌胃,对照组及模型组给予生理盐水灌胃,连续给药10 d。计算各组大鼠的体重减轻值和脑组织含水量,并对机械性痛阈值进行测定,检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及IL-1β水平,观察脑组织病理学改变,Western blot检测脑组织NR1、NR2B及核因子-κB(NF-κB)/P65表达水平。结果与对照组比较,模型组痛阈值显著下降,血浆TNF-α、IL-6及IL-1β水平显著升高,脑组织含水量和体重减轻值均显著升高,脑组织NR1、NR2B、NF-κB/P65表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,延胡索甲素低、中、高剂量组痛阈值显著升高,血浆TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著下降,脑组织含水量和体重减轻值显著降低,脑组织NR1、NR2B、NF-κB/P65表达水平显著降低(P<0.05),且上述指标的变化均呈现出剂量依赖性。模型组脑组织细胞间隙增大,细胞肿胀,细胞核缩小、破裂,核仁不明显;延胡索甲素高、中、低剂量组脑组织细胞破裂凋亡减少,细胞核完整,核仁清晰可见,细胞形态圆润,细胞间隙缩小。结论延胡索甲素能够改善利血平诱导纤维肌痛大鼠的疾病状态,其机制可能与调节N-甲基-D-天冬氨酸受体/NF-κB介导的信号通路有关。

延胡索甲素和乙素的人源肠内菌丛生物转化及在人源Caco-2细胞单层模型的吸收转运

目的:研究延胡索甲素(d-corydaline,CDL)和延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)的人源肠内菌丛生物转化,在人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型的吸收转运。方法:应用人源肠内菌丛在厌氧、37℃条件下分别与CDL和THP共温孵培养;利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型测试CDL和THP从绒毛面(AP端)到基底面(BL端)、BL端到AP端双向的转运过程。计算转运参数和表观渗透系数(Papp),并与吸收良好的阳性对照药普萘洛尔和吸收不良的阿替洛尔进行比较。应用高效液相色谱法对CDL和THP进行分析。结果:CDL和THP在人源肠内菌丛温孵体系没有发生生物转化。它们与普萘洛尔在Caco-2细胞单层模型双向转运的Papp皆在1×10-5cm.s-1数量级;在0～180 min,转运效率与转运时间呈正相关。结论:CDL和THP在人源肠内菌丛温孵体系中稳定;在Caco-2细胞单层模型的转运机制可能为被动扩散。

延胡索甲素与左旋延胡索乙素抗吗啡躯体依赖和精神依赖的作用研究

目的观察并比较延胡索甲素(corydaline,Cor)与左旋延胡索乙素(l-tetrahydropalmatine,l-THP)抗吗啡躯体依赖和精神依赖的作用。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、Cor组、l-THP组。连续递增sc吗啡9 d后,纳洛酮促瘾,制备吗啡依赖大鼠催促戒断模型,促瘾前30 min ip Cor(40、80 mg/kg)或l-THP(5.0、10.0 mg/kg),观察大鼠戒断症状和体质量的降低;应用旷场实验,观察Cor(5、10 mg/kg)和l-THP(2.5、5.0 mg/kg)对吗啡诱导的大鼠自发活动的影响、对吗啡连续递增给药致大鼠行为敏化效应的影响,以及Cor(10、20、40 mg/kg)和l-THP(2.5、5.0、10.0 mg/kg)对大鼠自发活动的影响。结果 Cor(40、80 mg/kg)、l-THP(5.0 mg/kg)对吗啡催促戒断症状无显著改善作用,10 mg/kg l-THP显著改善大鼠戒断症状(P<0.05);Cor和l-THP对吗啡降低大鼠体质量效应有改善趋势,但差异不显著;Cor 40 mg/kg以下剂量、l-THP 10 mg/kg以下剂量对大鼠自发活动无显著影响;Cor(5、10 mg/kg)和l-THP(2.5、5.0 mg/kg)均可显著降低吗啡诱发的大鼠高活动性行为、行为敏化的形成(P<0.05、0.01)。结论 Cor和l-THP对吗啡所致的大鼠躯体依赖和精神依赖均有不同程度的调节作用,l-THP的起效剂量明显低于Cor。

UPLC-MS/MS法测定不同产地延胡索中原阿片碱、盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素和延胡索甲素

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定不同产地延胡索药材中原阿片碱、盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素和延胡索甲素。方法采用Waters UPLC HSS T3 C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈–0.1%醋酸铵为流动相,梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,柱温40℃,进样量5μL。ESI正离子模式采集,采集模式:MRM(多反应检测),离子源温度150℃,毛细管电压3.0 kV,锥孔电压50 V,脱溶剂气流量800 L/h,脱溶剂气温度400℃。结果原阿片碱、盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素和延胡索甲素分别在0.20~10.12、0.25~12.58、1.02~51.20、0.85~42.64、0.39~19.44 ng线性关系良好;平均回收率分别为97.48%、100.16%、101.61%、96.05%、104.17%,RSD值分别为1.70%、2.05%、2.55%、0.74%、3.24%。不同产地的延胡索药材中5种生物碱的含量有明显差异,浙江产地延胡索药材中5种生物碱的含量相对其他产地较高,5种生物碱中脱氢紫堇碱的含量最高。结论UPLC-MS/MS法灵敏度高、测定速度快、准确度高,可用于延胡索药材中5种成分的快速测定。

延胡索醋制对小鼠耐缺氧成分的影响

本文采用电位滴定法和紫外分光光度法,分别测定了延胡索和醋制延胡索水煎液中的叔胺碱和季铵碱含量,并进行了小属耐缺氧试验。试验结果表明,延胡索醋制后,叔胺碱含量增加,季铵碱含量降低。季铵碱具明显的增强小属耐缺氧能力的作用,而叔胺碱无此作用。故认为,若延胡索治疗冠心病时,以生品为好。

HPLC法同时测定延胡索药材中3种生物碱类成分的含量

目的建立测定延胡索药材中延胡索甲素、延胡索乙素和脱氢延胡索碱含量的方法。方法采用HPLC法,Agilent XDB C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）;乙腈为流动相A,0.2%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱;检测波长0∽10min为340nm,10~40min为280nm;柱温30℃;流速1m L·min-1。结果延胡索甲素在64μg·m L-1~320μg·m L-1、延胡索乙素在100μg·m L-1~500μg·m L-1、脱氢延胡索碱在52μg·m L-1~260μg·m L-1的范围内线性关系良好,回收率均在95%~100%,RSD均小于2%。结论本法灵敏、准确、重现性好,可用于延胡索药材的质量控制。

延胡索单体抗吗啡躯体依赖和精神依赖的作用研究

目的:研究延胡索甲素(Cor)抗吗啡(Mor)躯体、精神依赖作用。方法:选购40只SD大鼠,分为参照组、实验组、Cor组与1-THP四组,分别进行戒断反应、旷场实验与敏化实验,研究戒断反应的影响以及2Hip与Str脑区中DA含量。结果:吗啡持续给药9 d,纳洛酮催促戒断,样本有摇体、咀嚼、流泪等症状,相较于参照组,实验组戒断评分明显更高(P<0.05),纳洛酮催促60 min后样本体质量急剧降低(P<0.05),这表示Mor戒断模型已经成功制备。与实验组相比,1-THP可改善样本戒断症状,10mg/kg给药期间差异明显(P<0.05);Cor也能够改善戒断症状,但是没有明显差异(P>0.05)。Cor与1-THP均能够改善戒断症状,但是这两种单体相比差异不明显(P>0.05)。与参照组比,实验组Cor组与1-THP组DA含量明显更高(P<0.05)。结论:延胡索抗体能够起到抵抗吗啡躯体、精神依赖的作用。

元胡止痛口服液药材、中间体及制剂的定量指纹图谱方法研究

建立了适用于元胡止痛口服液原料药材、中间体及制剂中若干生物碱类成分的定量指纹图谱方法。采用DIKMA Diamonsil Plus C18-A色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.04%乙酸铵溶液(冰醋酸调至pH4.0,A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,在280 nm下进行检测。指纹图谱中含共有峰7个,其精密度、重复性、稳定性的相对标准偏差(RSD)均小于5.0%。对延胡索乙素、去氢延胡索甲素进行定量分析,其分别在6.15~123μg/mL和10.15~203μg/mL范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))> 0.999,进样精密度、方法重复性的RSD均小于5.0%,供试品溶液在24 h内稳定。延胡索乙素、去氢延胡索甲素在低、中、高3个加标水平下的平均回收率为89.6%~107%,RSD小于3.0%。所建立的分析方法稳定、准确、可靠,能够对药材、中间体及制剂中的中等极性成分进行检测,可用于考察工业生产中元胡成分的量值传递情况,从而为改进元胡止痛口服液制药过程控制水平提供技术支持。

UHPLC-MS/MS法同时测定金红片中6种活性成分的含量

目的 建立UHPLC-MS/MS法同时测定金红片中川楝素、延胡索甲素、延胡素乙素、木香烃内酯、莽草酸、去氢木香内酯6种活性成分的含量。方法 选用Infinitylab Poroshell 120 EC-C_(18)色谱柱(100 mm×4.6 mm, 2.7μm),以体积分数0.01%甲酸水溶液和体积分数0.01%甲酸乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL·min~(-1),木香烃内酯、延胡索甲素、去氢木香内酯、延胡索乙素的离子源为ESI+,川楝素和莽草酸的离子源为ESI-,采用多反应监测扫描方式检测。结果 莽草酸在质量浓度10~1 000μg·L~(-1)内呈现良好的线性关系(r=0.999 6),其余5种活性成分的质量浓度在1~100μg·L~(-1)内呈现良好的线性关系(r=0.993 5~0.999 4),平均加样回收率为91.2%~109.0%。结论 本研究可用于金红片中多种活性成分的含量测定,为金红片质量控制的完善提供参考。

左旋延胡索乙素印迹聚合物的制备及固相萃取应用

目的利用分子印迹技术制备左旋延胡索乙素(L-THP)分子印迹聚合物(MIPs),并进行固相萃取应用研究。方法以L-THP为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,制备左旋延胡索乙素分子印迹聚合物(L-THP-MIPs),并进行固相萃取实验优化萃取条件,考察L-THP-MIPs吸附的选择性和专一性。结果 L-THP-MIPs能特异性地吸附L-THP,而对L-THP的结构类似物延胡索甲素未表现出明显的吸附行为。结论L-THP-MIPs对L-THP具有良好的选择性和专一性。

Box-Behnken响应面法优化金铃子散的醇提工艺

目的:优化金铃子散的醇提工艺。方法:以去氢紫堇碱、延胡索乙素、延胡索甲素的含量总和为评价指标,在单因素试验结果的基础上,通过Box-Behnken响应面法对影响金铃子散醇提工艺的乙醇浓度、料液比、提取时间进行考察研究,优化了提取工艺。结果:单因素试验结合Box-Behnken响应面法研究得到金铃子散的最佳醇提工艺为:乙醇浓度47%、料液比1∶10(g/mL),提取时间为120 min,提取2次,处方量的金铃子散中去氢紫堇碱、延胡索乙素、延胡索甲素的总含量可达44.99 mg,实测值与模型预测值相对误差为1.76%。结论:Box-Behnken响应面法可用于优化金铃子散的醇提工艺,且优化所得工艺稳定、可行。

双标线性校正法用于延胡索中5个生物碱的定性分析

目的:建立延胡索中巴马汀、小檗碱、脱氢延胡索碱、延胡索乙素和延胡索甲素5个生物碱的高效液相色谱(HPLC)方法,考察双标线性校正(LCTRS)法对其色谱峰定性分析的可行性。方法:采用HPLC法,以乙腈为流动相A,0.1%磷酸水溶液(用三乙胺调pH 6.0)为流动相B,梯度洗脱(0~23 min, 20%A;23~35 min, 20%A→30%A;35~50 min, 30%A→80%A),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为35℃,检测波长为280 nm,进样量为5μL;测定延胡索中5个生物碱在20根不同品牌和型号C_(18)色谱柱的实际保留时间,以巴马汀和延胡索甲素2个成分作为双标化合物,使用双标线性校正法定位各成分色谱峰,并用3根未知色谱柱进行方法验证。同时以中间色谱峰脱氢延胡索碱为参照物,采用相对保留时间法对其他4个成分色谱峰的保留时间进行预测。比较这2种方法的预测准确性和色谱柱的符合率。结果:在10批次样品中,5个生物碱成分均有较好的分离。其中采用双标线性校正法的色谱峰预测准确率和色谱柱符合率均为100%,均显著高于相对保留时间法,能够更好地预测延胡索中待测成分在未知色谱柱上的保留时间。结论:建立的双标线性校正法预测色谱峰保留时间准确度高,可用于延胡索中生物碱类成分定性分析,值得进一步推广及应用。

基于一测多评法对延胡索中生物碱类成分的质量控制研究

目的建立同时测定延胡索中原阿片碱、黄连碱、黄藤素、去氢延胡索甲素、D-四氢药根碱、延胡索乙素和延胡索甲素7种生物碱类成分的HPLC方法,在此基础上,建立一测多评法的方法学考察方式,验证该方法在延胡索质量控制中应用的可行性和技术适用性。方法以延胡索所含的7种成分为指标成分,采用2种校正方法分别建立各成分与延胡索乙素的相对校正因子(fk/s),计算各成分的量,实现一测多评;同时采用外标法测定延胡索中该7种成分的量,并比较2种一测多评法所得计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。结果建立了延胡索中7种生物碱类成分一测多评法方法学的考察模式;不同的色谱柱和仪器一测多评法的计算值与外标法实测值之间没有显著性差异。结论同时测定延胡索中原阿片碱、黄连碱、黄藤素、去氢延胡索甲素、D-四氢药根碱、延胡索乙素和延胡索甲素7种生物碱的一测多评法可靠,结果准确,可用于延胡索药材的质量控制。

HPLC-CAD法测定元胡止痛胶囊中生物碱和香豆素

目的建立高效液相色谱法联合二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法同时测定元胡止痛胶囊中延胡索乙素、盐酸黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素和异欧前胡素。方法采用HPLC-CAD法,Thermo Hypersil BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–10 mmol/L甲酸铵(甲酸调pH 4.0),梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;CAD雾化器温度为35℃;柱温35℃;进样量为20μL。结果延胡索乙素、盐酸黄连碱、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素和异欧前胡素分别在0.041～1.020、0.013～0.320、0.068～1.700、0.041～1.020、0.101～2.520、0.039～0.980μg与峰面积线性关系良好;平均回收率分别为98.41%、98.89%、98.32%、99.35%、98.05%、98.67%,RSD值分别为0.9%、1.4%、0.7%、1.1%、0.7%、0.9%。结论该方法准确、简便、灵敏度高,可用于元胡止痛胶囊中生物碱和香豆素类多成分的质量控制研究。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS加味清络颗粒生物碱类化学成分分析及多指标含量测定

目的对加味清络颗粒中生物碱类成分进行定性鉴别分析,建立加味清络颗粒生物碱类多成分含量测定方法。方法采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术对加味清络颗粒进行正、负离子模式扫描,利用MassHunter软件计算化合物准确相对分子质量,结合质谱二级碎片信息及对照品比对,对加味清络颗粒中生物碱类成分进行定性鉴别,并总结化合物裂解规律;利用HPLC测定加味清络颗粒中6个生物碱成分的含量,检测条件:采用Phenomenex Gemini C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈为流动相A,磷酸盐缓冲溶液(pH 5.8)为流动相B,梯度洗脱,柱温30℃,体积流量0.9 mL/min,进样量10μL,检测波长210 nm。结果加味清络颗粒中共鉴定出50个生物碱成分,分别来源于青风藤、苦参、延胡索、知母,其中喹诺里西啶类生物碱16个、苄基四氢异喹啉类生物碱31个、其他类型生物碱3个;建立了HPLC同时测定加味清络颗粒中苦参碱、槐果碱、青藤碱、原阿片碱、延胡索乙素、延胡索甲素的多指标含量测定方法,该方法中6个待测成分在检测质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.9999),精密度、重复性、稳定性RSD均小于4%,样品中苦参碱、槐果碱、青藤碱、原阿片碱、延胡索乙素、延胡索甲素的平均加样回收率分别为94.32%、96.89%、97.83%、109.53%、99.32%、87.13%,RSD值分别为3.24%、4.99%、4.95%、4.85%、2.52%、5.95%。结论建立的方法可准确、灵敏地对加味清络颗粒中的生物碱类化学成分进行定性及定量分析,为加味清络颗粒后续物质基础研究、质量控制、制剂开发建立了基础。