不同程度火烧迹地兴安落叶松延迟性死亡特征

在2018年汗马国家级自然保护区火烧迹地按不同火烧程度设立9个标准样地(30 m×30 m),以样地内760株延迟性死亡兴安落叶松为全部样本,划分为7个径级,分析不同程度火烧迹地不同径级的兴安落叶松(Larix gmelinii(Rupr.)Kuzen)延迟性死亡特征。将全部样本的80%(610株)作为建模样本,20%(150株)作为检验样本,使用Logistic回归方程对兴安落叶松延迟性死亡率进行预测。结果表明:轻度火烧样地中,兴安落叶松延迟性死亡率随着径级的增加而逐级降低,降低幅度分别为8.5%、28.5%、17.4%,胸径大于20 cm的树木延迟性死亡率为0;在所有延迟性死亡树木中,胸径小于10 cm的树木占76.8%。中度火烧样地中,兴安落叶松延迟性死亡率随径级的增加也逐级降低,但降低幅度没有轻度火烧样地明显,胸径大于25 cm的树木延迟性死亡率为0;在所有延迟性死亡树木中,胸径6~15 cm的树木占86.8%。重度火烧样地中,兴安落叶松延迟性死亡率明显升高,最低为66.7%,最高为100%,胸径为26~35 cm的树木没有发生延迟性死亡。火烧程度与径级对兴安落叶松延迟性死亡的影响均极显著(P<0.01),火烧程度与径级的优势比值分别为3.208和0.725。预测发生延迟性死亡的准确率为71.7%,预测为未发生延迟性死亡的总样本的准确率为60.4%。总样本A_(U),C值为0.764,说明预测模型准确率较高,拟合效果良好。

caspase-3激活在庆大霉素所致耳蜗螺旋神经元延迟性死亡过程中的作用

目的观察毛细胞丢失后耳蜗神经元延迟性死亡模式以及caspase-3的活动。方法采用3mol的庆大霉素作用离体培养的耳蜗24h,损毁全部毛细胞,分别在毛细胞丢失后1、3、5、7和14d收获样本。采用Neurofilament 200KDa标记耳蜗神经元,TRITC-labeled phalloidin标记毛细胞,免疫荧光染色观察神经元和毛细胞的存活数量,采用WesternBlot的方法检测caspase-3特异降解产物α-spectrin,间接确定caspase-3活动。结果3mol庆大霉素作用于培养的耳蜗24h,耳蜗毛细胞几乎全部消失。螺旋神经元和神经纤维的数目随培养时间的延长而减少,神经元存活从第1天的87%降至第14天的5%。神经元变小且形状不规则,在神经纤维上出现实质小体。检测caspse-3激活的特异降解带-120KDa的灰度值,发现在毛细胞丢失后24h,caspase-3活性明显高于毛细胞丢失的初时(P<0.01)。结论毛细胞丢失引起螺旋神经元死亡具有时间依赖效应,神经元出现凋亡的形态学特征,并且有caspase-3的活动。

Na＋－Ca2＋交换器在培养的大鼠星型胶质细胞的再灌注致延迟性死亡中的作用

Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换器在培养的大鼠星型胶质细胞的再灌注致延迟性死亡中的作用［英］ＴｏｓｈｉｏＭａｔｓｕｄａ，ｅｔａｌ．ＥｕｒｏｐＪＮｅｕｒｏｓｃｉ．１９９６；（８）：９５１～９５８在某些细胞中，Ｃａ２＋排空后用含Ｃａ２＋溶液进行再灌注，细胞内Ｃａ２＋...

Na＋－Ca2＋交换器在培养的大鼠星型胶质细胞的再灌注致延迟性死亡中的作用

Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换器在培养的大鼠星型胶质细胞的再灌注致延迟性死亡中的作用〔英］ＴｏｓｈｉｏＭａｔｓｕｄａ，ｅｔａｌ．ＥｕｒｏｐＪＮｅｕｒｏｓｃｉ．１９９６１（８）：９５１～９５８在某些细胞中，Ｃａ（２＋）排空后用含Ｃａ（２＋）溶液进行再灌注，...

亚低温减少沙土鼠脑缺血后延迟性神经元死亡机制的研究

目的 :研究亚低温对脑缺血后延迟性神经元死亡的影响及其与海马羟自由基产生以及纹状体多巴胺和ATP含量变化的关系。方法 :沙土鼠前脑缺血再灌注模型 ,缺血 10min ,应用病理检查方法判断海马CAl锥体细胞死亡的数目。动物随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注组和亚低温缺血再灌注组。高效液相加电化学检测器方法测定海马羟自由基和纹状体多巴胺的含量 ,高效液相紫外检测器法测定纹状体ATP含量。结果 :亚低温条件下沙土鼠海马CA1区锥体细胞的死亡数目明显减少 ,海马 2 ,3 DHBA的含量明显低于缺血再灌注组 (P <0 .0 1) ,纹状体多巴胺和ATP含量均明显高于缺血再灌注组 (P <0 .0 1)。结论 :低温可减少脑缺血后延迟性神经元死亡的数目 。

对灰鼠延迟性神经元死亡模型中螺旋神经节细胞缺损的评估

目的探索观察耳蜗螺旋神经节细胞的简便定量研究方法 ,并在灰鼠延迟性螺旋神经节细胞死亡动物模型中验证本方法的实用性和可靠性。方法 15只成年灰鼠平均分为3组,第1组用于正常对照;第2组一次性同时肌肉注射庆大霉素(125mg/kg)和静脉注射利尿酸钠(40mg/kg),并在用药后2个月处死;第3组接受与第2组同样的药物注射,但在用药后4个月处死。耳蜗样品被常规应用环氧树脂包埋并制作成耳蜗中轴半薄切片,计数耳蜗各回蜗轴螺旋管腔切片截面内的螺旋神经节数量并进行统计分析。结果灰鼠耳蜗底回起始端的蜗轴螺旋管腔比耳蜗底回中部和耳蜗中回大,因此耳蜗底回起始端蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞数量多于耳蜗底回中部和耳蜗中回。耳蜗毛细胞被彻底破坏后2个月,与正常灰鼠耳蜗各回蜗轴螺旋管腔切片截面内的螺旋神经节细胞数量相比,耳蜗底回蜗轴螺旋管切片截面内的螺旋神经节细胞减少数量比耳蜗中回严重,提示延迟性螺旋神经节细胞死亡可能遵循着从耳蜗底回向顶回扩展的规律。耳蜗毛细胞被彻底破坏后4个月,全耳蜗蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞基本上丧失殆尽。结论计数耳蜗中轴切片各回蜗轴螺旋管腔切片截面内的螺旋神经节细胞数量是一种简便可靠的定量分析方法 。

缺血再灌注后蛋白集聚与皮层神经元延迟性死亡的关系

目的探讨缺血再灌注后蛋白聚集与大鼠皮层神经元延迟性死亡的关系。方法采用20 min全脑缺血的大鼠模型。按照再灌注时间分为5组:假手术组,0.5 h恢复组,4 h恢复组,24h恢复组,72 h恢复组。采用HE染色光镜下观察缺血再灌注后皮层神经元的延迟性死亡。应用透射电子显微镜观察细胞胞浆内蛋白聚集物。Westernblot分析泛素蛋白标记的蛋白聚集物在神经元内的含量变化。结果HE染色显示缺血再灌注72 h后,可见部分皮层神经元死亡。透射电镜显示再灌注4 h后神经元的胞浆内形成了蛋白聚集物。Western blot分析显示,与假手术组相比较,再灌注后0.5 h被泛索标记的蛋白聚集物便开始显著增加,再灌注后4 h和24 h达到峰值,再灌注后72 h含量开始减少。但仍然高于假手术组。结论蛋白聚集是导致缺血再灌注后神经元延迟性死亡的一个重要因素。

低温对脑缺血/再灌注期间沙土鼠海马CA1区延迟性神经元死亡及ATP水平和细胞色素氧化酶活性的影响

目的观察低温对脑缺血/再灌注期间海马ATP水平和细胞色素氧化酶(CCO)活性的影响,以探讨低温减少延迟性神经元死亡(DND)的机制。方法采用沙土鼠前脑缺血/再灌注模型,缺血时间10 min。动物随机分为假手术组、常温组和低温组,3组动物又根据再灌注时间不同进一步分为再灌注6 h、48 h、96 h 3个亚组。所有沙土鼠脑缺血期间脑温均维持(38.0±0.2)℃,再灌注6 h内,低温组脑温维持(30.0±0.2)℃,常温组脑温维持(38.0±0.2)℃。光镜下观察海马CA1区存活锥体细胞数目。ATP、ADP、AMP含量测定采用高效液相紫外检测器法,CCO活性测定采用酶组织化学染色结合计算机图像分析。结果再灌注96 h,低温组海马CA1区存活锥体细胞数目明显多于常温组(P<0.01)。除再灌注6 h外,低温组海马ATP和腺苷酸池(ATP+ADP+AMP)含量均明显高于常温组(P<0.05)。低温组各再灌注时间点海马CA1区CCO活性均明显高于常温组(P<0.05)。结论低温可通过保护CCO活性减轻脑缺血/再灌注期间的细胞能量代谢障碍,从而减少DND。

缺血预处理对沙土鼠前脑缺血后海马CA1区延迟性神经元死亡的影响

目的 :研究缺血预处理对沙土鼠前脑缺血后海马CA1区延迟性神经元死亡的影响。方法 :沙土鼠前脑缺血再灌注模型 :阻断双侧颈总动脉 5min ,然后松开 ;沙土鼠缺血预处理模型 :在 5min缺血前 2d行 1或 2次 2min缺血。 30只沙土鼠随机分为假手术组 (Sh组 ) ,缺血组 (Is组 ) ,预处理组 (Po组 ) ,缺血预处理 1组 (Ip1组 ) ,缺血预处理 2组 (Ip2组 )。末次缺血后第7d用组织学检查海马CA1区存活的锥体细胞数。结果 :缺血预处理能明显减少沙土鼠前脑缺血后海马CA1区锥体细胞死亡的数目 ,且 2次缺血预处理的保护效果优于 1次缺血预处理。结论

脑缺血后延迟性神经元死亡与海马羟自由基产生之间缺乏必然联系

目的：研究脑缺血再灌注期间沙土鼠海马CAI区延迟性神经元死亡与海焉羟自由基产生和ATP含量变化的关系。方法：建立沙土鼠前脑缺血再灌注模型，缺血10min时，于同一时间应用病理检查判断脑缺血后延迟性神经元死亡情况，高效液相结合电化学检测器方法测定海马羟自由基含量，以及高效液相紫外检测器测定海马ATP含量。再分别再灌注6h、48h和96h后处死。结果：脑缺血再灌注48h时，海马CAI出现少数延迟性死亡神经元；再灌注96h时，海马CAI区出现明显的延迟性神经元死亡。脑缺血再灌注6h时，海马羟自由基含量明显增加(P<0．01)，但在再灌注48h和96h时，海马羟自由基含量与假手术组相比已无显著性差异。脑缺血再灌注后沙土鼠海属ATP、ADP和AMP含量呈进行性下降(P<0．001)。结论：延迟性神经元死亡主要与脑缺血后细胞持续的能量代谢障碍有关，而与脑缺血后羟自由基产生的关系较小。

低温对沙土鼠脑缺血后微管运动蛋白和结构蛋白活性的影响

目的 :研究低温对脑缺血后沙土鼠微管运动蛋白 (Kinesin)和微管结构蛋白 (microtubuleassociatedprotein 2 ,MAP2 )活性的影响 ,并探讨二者活性变化与延迟性神经元死亡 (delayedneuronaldeath ,DND)的关系。方法 :Kinesin和MAP2的活性应用免疫组织化学染色结合计算机图象分析的方法测定 ,DND应用病理检查方法判断。结果 :低温明显减少脑缺血后的DND。前脑缺血再灌注后MAP2和kinesin活性随再灌注时间延长而进行性下降 ,且kinesin活性下降程度大于MAP2。低温明显减少脑缺血后MAP2和kinesin活性的下降程度。Kinesin活性下降的严重程度与脑缺血后DND的严重程度相一致。结论 :低温可明显减少脑缺血后的DND ,其机制与其减少脑缺血后运动蛋白ki

脑缺血再灌注对海马微管运动蛋白活性的影响

目的 研究脑缺血再灌注期间海马CA1区锥体细胞微管运动蛋白kinesin活性的变化与延迟性神经元死亡 (delayedneurondeath ,DND)的关系。 方法 沙土鼠前脑缺血再灌注模型 ,脑缺血时间为 10分钟。采用免疫组织化学方法结合计算机图象分析技术测定kinesin的免疫活性。组织学检查判断DND。结果 脑缺血再灌注后海马CA1区微管运动蛋白kinesin的活性明显下降 ,在再灌注 6、48和 96小时其活性分别仅为假手术组的 49%、32 %和 12 % (P <0 0 1)。在再灌注 96小时 ,CA1区出现明显的DND ,而CA2、CA3、CA4微管运动蛋白活性无明显变化。结论 脑缺血再灌注后海马CA1区微管运动蛋白活性进行性下降 。

脑缺血再灌注期间海马CA1区微管运动蛋白活性变化

目的 研究脑缺血再灌注期间海马CA1区锥体细胞微管运动蛋白活性的变化。方法 沙土鼠前脑缺血再灌注模型 ,脑缺血 10min。将 2 0只沙土鼠随机分为 4组 (n =5 ) :假手术组、再灌注Ⅰ组 (再灌注 6h)、再灌注Ⅱ组 (再灌注 48h)、再灌注Ⅲ组 (再灌注 96h)。采用免疫组织化学方法结合计算机图像分析测定脑缺血再灌注期间海马神经元微管运动蛋白活性。结果 脑缺血再灌注期间海马CA1区微管运动蛋白活性明显下降 ,在再灌注 6h、48h、96h时其活性分别仅为假手术组的 49%、32 %和 12 % (P <0 .0 1)。而CA2、CA3、CA4区微管运动蛋白活性无明显变化。在再灌注 48～ 96h ,CA1区大多数神经元出现变性坏死。结论 脑缺血再灌注可导致海马CA1区微管运动蛋白活性进行性下降 ,其可能是发生延迟性神经元死亡的主要原因。

低温对脑缺血再灌注期间微管相关蛋白-2免疫活性的影响

目的 观察低温对脑缺血再灌注期间海马CA1区微管相关蛋白 - 2免疫活性的影响。方法 沙土鼠前脑缺血再灌注模型。动物随机分为假手术组、常温再灌组和低温再灌组 ,后两组又各分为再灌注 6h、4 8h、96h3个亚组 ,每组 10只。采用免疫组织化学方法结合计算机图像分析测定微管相关蛋白 - 2活性 ,观察再灌注 4 8h、96h海马CA1区细胞膜、核膜完整 ,核仁清楚的锥体神经元数目。结果 常温再灌注 6h、4 8h、96h海马CA1区微管相关蛋白 - 2免疫活性分别为假手术组的 81%、6 9%和 5 1% (P <0 .0 1)。低温再灌注 6h、4 8h、96h海马CA1区微管相关蛋白 - 2免疫活性分别为假手术组的 93%、86 %和 71% ,均明显高于常温再灌组 (P <0 .0 5或P<0 .0 1)。再灌注 96h时 ,常温再灌组海马CA1区细胞膜、核膜完整 ,核仁清楚的锥体细胞数目仅为假手术组的5 % (P <0 .0 1) ,低温再灌组为假手术组的 4 7% ,明显多于常温再灌组 (P <0 .0 1)。结论 低温减轻脑缺血后延迟性神经元死亡的作用可能与其抑制微管相关蛋白 -

超低温保存诱发百子莲胚性愈伤组织延迟性细胞死亡特征

为了探究超低温保存诱发延迟性细胞死亡(cryopreservation-induced delayed-onset cell death, CIDOCD)对冻后细胞活性的影响,本研究以百子莲(Agapanthus praecox ssp. orientalis)胚性愈伤组织为试验材料,通过TTC染色法、伊文思蓝法定性定量检测超低温保存冻后恢复培养阶段细胞活性;采用TUNEL检测分析PCD变化规律;实时荧光定量PCR检测PCD相关基因表达。结果发现恢复培养6 h较0 h细胞存活率下降约8.29%,至24 h活性逐渐回升,30 h后细胞活性再次降低(较24 h降低约10.43%)。同时检测到明显的TUNEL阳性荧光变化,PCD发生比例在恢复培养0~36 h后期增多(30 h较24 h增加11.79%左右)。表明百子莲胚性愈伤组织超低温保存冻后发生CIDOCD,影响恢复培养实际冻存效率,6 h和30 h是活性下降关键时间点。Caspase、DAD1等PCD相关基因的差异性表达也证明了延迟性PCD在恢复培养阶段的发生。本研究为进一步完善超低温保存诱发PCD的分子网络及优化冻后恢复培养基以提高冻存效果提供参考。

缺血再灌注后皮层神经元内蛋白酶体活性变化与延迟性神经元死亡的关系

目的探讨缺血再灌注后大鼠皮层神经元内蛋白酶体活性改变与神经元延迟性死亡的关系。方法采用20 min 全脑缺血大鼠模型。将50只 Wistar 大鼠按照再灌注时间分为5组:假手术组、0.5 h 恢复组、4 h 恢复组、24 h 恢复组及72 h 恢复组,每组10只大鼠。以 Suc-llvy-amc 为底物测定蛋白酶体的活性;采用 HE 染色在光镜下观察缺血再灌注后神经元的死亡。应用免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜观察缺血再灌注后蛋白酶体在细胞内的分布。结果假手术组蛋白酶体活性[吸光度(A)值]为54 602±1602,缺血再灌注0.5 h 后蛋白酶体活性为42 036±1465(与假于术组比较,P<0.01),虽然4 h 后其活性一过性恢复到47 536±2532(P<0.05),但24 h 后则下降为45 450±649(P<0.01),再灌注后72 h 其活性为43 108±995(P<0.01)。HE 染色显示,缺血冉灌注72 h 后,可见皮层神经元部分死亡。激光共聚焦扫描显微镜显示缺血再灌注24 h 后,皮层神经元的胞核与胞质内的蛋白酶体都有减少,72 h 后死亡神经元胞核内的蛋白酶体几乎全部消失,周围的胞质内只有少量蛋白酶体。结论全腑缺血再灌注后,蛋白酶体活性下降是导致神经元延迟性死亡的一个重要因素。

氯化锂预处理对沙土鼠前脑缺血保护作用的病理观察

目的:观察氯化锂预处理对沙土鼠脑缺血-再灌注模型的神经元保护作用。方法:夹闭沙土鼠双侧颈总动脉5 min,制备前脑缺血性脑损伤模型。48只沙土鼠随机分为2组:实验组(A组,n=24)和对照组(B组。n=24),A组手术前连续5天给予氯化锂腹腔注射,B组以生理盐水代替氯化锂。每组又分为两个亚组:假手术组(Ash,Bah,n均为12)和缺血组(Ais,Bis,n均为12),分别于术后3天(Ash3,Ais3,Bsh3,Bis3,n均为6)和7天(Ash7,Ais7,Bah7,Bis7,n均为6)断头取脑,制成石蜡切片,光镜下观察。结果:海马CA1区锥体细胞数目(每0.04 mm2中含有的细胞数)分别为:Ais3组15.8±3.31、Ais7组13.54±5.22、Bis3组11.81±4.58、Bis7组1.48±1.55、Ash3组28.17±4.02、Ash7组28.11±4.14、Bah3组29.64±5.99、Bsh7组30.21±2.95。Ais3组、Ais7组显著多于相应的Bis3组、Bis7组(P<0.01)。Ais3组、Bis3组显著多于相应的Ais7组、Bis7组(P<0.01)。结论:氯化锂预处理能明显减少沙土鼠脑缺血再灌注后海马CA1区延迟性神经元死亡。