延龄草皂苷对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响

目的观察延龄草皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响,探讨其改善脑缺血损伤的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、TSTT 65 mg/kg组、TSTT 33 mg/kg组和金纳多组,各给药组灌胃相应药物,连续15 d。HE染色观察脑组织病理变化,LFB染色观察脑组织神经纤维损伤,免疫荧光染色检测梗死灶周围皮层2′,3′-环核苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)、蛋白聚糖(NG2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,实时荧光定量PCR检测梗死灶周围皮层GSK-3、β-catenin、脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP2)基因表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠患侧脑组织明显坏死,神经细胞大量死亡,胞体皱缩,单位面积神经细胞数量显著减少(P<0.01),神经纤维丢失、排列混乱,髓鞘中有大量空泡,神经纤维相对积分光密度显著减少(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠神经细胞形态有所改善,单位面积神经细胞数量显著增加(P<0.05,P<0.01),神经纤维排列较有序,髓鞘中空泡较少,神经纤维相对积分光密度显著增加(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层CNPase阳性表达显著降低,NG2阳性表达显著升高(P<0.01),NG2/GSK-3β、NG2/β-catenin、CNPase/GSK-3β、CNPase/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层CNPase、NG2表达显著升高,CNPase/GSK-3β、NG2/GSK-3β阳性细胞显著减少,CNPase/β-catenin、NG2/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.05,P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3αmRNA表达显著升高(P<0.05),β-catenin、CRMP2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,TSTT 65 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3α、GSK-3βmRNA表达显著降低,β-catenin和CRMP2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论TSTT可减轻脑缺血大鼠脑组织损伤,保护少突胶质细胞,促进少突胶质前体细胞存活,其机制可能与下调GSK-3表达,上调β-catenin、CRMP2表达有关。

HPLC法同时测定延龄草根及根茎中延龄草皂苷B_2、B_1、B_3的含量

目的:建立HPLC法同时测定延龄草Trillium tschonoskiiMaxim.根及根茎中延龄草皂苷B2、B1、B3的含量。方法:采用UItimate RXB-C18(4.6 mm×150 mm,3μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(10%-100%梯度),检测波长为203 nm,流速1.0mL/min,柱温30℃。结果:在该色谱条件下,三种延龄草皂苷的分离度良好,延龄草皂苷B2、B1、B3浓度在0.05-0.5 mg/mL范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.2%、102.5%、101.4%。结论:该方法简便、准确、重现性好,适用于同时测定延龄草皂苷B2、B1、B3的含量,可作为延龄草质量标准制定的依据。

延龄草总皂苷对2-VO模型大鼠认知功能及神经血管单元的作用

目的观察延龄草总皂苷(TST)对大鼠的血管性认知障碍及其神经血管单元(NVU)和神经环路完整性的作用。方法将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TST组及多奈哌齐组,每组12只。除假手术组外,其他3组大鼠均采用双侧颈总动脉结扎(2-VO)法建立脑缺血后认知障碍模型。造模后,TST组给予TST100mg/kg灌胃,多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐0.45mg/kg灌胃,对照组及模型组给予同体积的生理盐水,1次/d,连续28d。采用水迷宫实验检测各组大鼠的认知功能;HE、尼氏染色观察大鼠脑组织病理改变;免疫组织化学染色观察大鼠海马突触核蛋白(SYN)的表达情况;高尔基染色观察海马神经元树突棘的变化;Westernblotting检测各组大鼠海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-10、血管内皮生长因子A(VEGFA)、突触后致密蛋白95(PSD95)和生长关联蛋白43(GAP43)表达水平。结果水迷宫实验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比均减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比增多(P<0.05)。与假手术组比较,模型组海马CA1区神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量增多(P<0.05)。Westernblotting结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠海马组织IL-1β、VEGFA表达水平升高(P<0.05),PSD95、GAP43表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组IL-1β表达水平均降低(P<0.05),VEGFA、IL-10、GAP43表达水平均升高(P<0.05)。结论TST可能通过促进突触可塑性和NVU重塑减轻2-VO模型大鼠的认知障碍,有望用于卒中的治疗。

延龄草总皂苷对D-gal诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响

目的探讨延龄草总皂苷(total saponins from Trillium tschonoskii maxim,TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(D-gal,皮下注射)、干预组(TST,灌胃给予低、中、高3个剂量),每组10只,连续给药6周。Morris水迷宫评价大鼠认知功能;HE、Nissl染色观察海马及皮质组织形态;免疫组织化学法检测Pink1、Parkin的定位表达;Western blot检测Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62、Beclin1的表达水平。结果与正常对照组相比,D-gal模型组逃避潜伏期时间延长、穿越平台次数减少(P<0.05);大鼠海马组织内神经元数量明显减少;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达减少;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显下降,p62的表达明显升高(P<0.05)。与D-gal模型组相比,TST各剂量组逃避潜伏期时间缩短、穿越平台次数增多、停留在平台所在象限时间增加(P<0.05);海马神经元数量明显增多;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达增多;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显升高,p62的表达明显降低(P<0.05)。结论TST具有明确的神经保护作用,对D-gal所致衰老大鼠的学习记忆降低具有改善作用,其机制可能与Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响

目的探讨延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响及作用机制。方法采用改良线栓法制备卒中后认知障碍大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、延龄草总皂苷组(100 mg/kg)和盐酸多奈哌齐组(0.45 mg/kg),每组10只,另设假手术组10只,给药组分别予相应药物灌胃,连续4周。Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能,HE和尼氏染色观察脑组织病理变化,TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡情况,高尔基染色观察海马树突棘变化,Western blot检测海马组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、SYN、PSD-95、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著减少(P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元排列紊乱、尼氏体减少,凋亡神经元数量增加,树突棘密度减小(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,延龄草总皂苷组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著减少(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著增加(P<0.05,P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元饱满、尼氏体增多,凋亡神经元数量减少,树突棘密度增加(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论延龄草总皂苷可显著改善卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力,抑制神经元和突触损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制神经元凋亡有关。

延龄草皂苷通过NF-κB/MAPK信号通路调控MMPs表达并抑制骨肉瘤Saos-2细胞的迁移和侵袭

目的：观察延龄草皂苷（diosgeninglucoside，Dgg）对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：应用不同浓度（6．25～100gmol／L）的Dgg处理骨肉瘤Saos-2细胞96h后，采用CCK-8法检测细胞增殖情况。用不同浓度（12．5～50gmol／L）的Dgg作用骨肉瘤Saos-2细胞24h后，分别采用FCM和Transwell小室法检测细胞凋亡、迁移和侵袭能力的变化。最后，采用蛋白质印迹法检测Dgg（12．5和25μmol/L）作用后，Saos-2细胞中核因子κB（nuclear factor—κB，NF-κB）／丝裂原活化蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase，MAPK）通路相关蛋白以及该通路下游效应分子基质金属蛋白酶（matrix metalloproteases，MMPs）的表达水平。结果：Dgg可明显抑制骨肉瘤Saos-2细胞的增殖，诱导细胞凋亡，抑制细胞迁移和侵袭（P值均〈0．05），并呈浓度和时间依赖性。Dgg下调NF—κB信号通路中p38的磷酸化（P〈0．05），但不影响细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase，ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N—terminal kinase，JNK）的磷酸化（P值均〉0．05）。Dgg抑制MAPK通路中磷酸化核因子κB激酶抑制蛋白（phospho—inhibitor of nuclear factor kappa—Bldnase，p-IKK）、磷酸化核因子κB抑制蛋白α（phospho—inhibitor of nuclear factor kappa—Bα，p-κBα）、IκBα和磷酸化p65（phospho—p65，p-p65）的表达（P值均〈0．05），并下调下游效应分子MMP-1、MMP-2和MMP-9的表达水平（p值均〈0．05）。结论：Dgg可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并促进细胞凋亡。这一作用可能与肿瘤细胞中NF—κB／MAPK信号通路被阻滞，以及MMPs表达被下调有关。

不同产地及不同药用部位延龄草中3种皂苷的含量测定

[目的]建立HPLC法测定不同产地及不同药用部位延龄草中延龄草皂苷B2、B1、B3的含量。[方法]以UItimateXB-C18(4.6mm×150 mm,3μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水(10%～100%梯度,0～50 min),检测波长为203 nm,流速为1.0 ml/min,柱温30℃。[结果]延龄草皂苷B2、B1、B3分别在0.1～2.0 mg/ml(R=0.999 6)、0.05～2.0 mg/ml(R=0.999 4)、0.05～3.5 mg/ml(R=0.998 9)范围内与峰面积的线性关系良好,平均加样回收率分别为97.8%(RSD=1.19%)、102.6%(RSD=1.62%)和101.5%(RSD=2.38%)。不同产地及不同药用部位中延龄草皂苷B2、B1和B3的含量差异较大。[结论]该测定方法简便、准确、重现性好,可有效地评价不同产地及不同药用部位延龄草药材的质量。

延龄草皂苷通过抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路改善大鼠肺纤维化

目的探讨延龄草皂苷对肺间质纤维化大鼠的治疗作用及其可能机制。方法雄性SD大鼠50只,随机分为对照组,模型组,延龄草皂苷低、中、高剂量组[25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)],每组10只。除对照组外,其余各组采用气管插管注入博来霉素法(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;次日开始连续给药28 d。处死大鼠后,取肺组织称重并计算肺系数;进行HE和Masson染色观察小鼠肺组织形态病理学变化;ELISA法检测大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的表达以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blotting法检测大鼠肺组织中纤连蛋白(fibronectin)、胶原蛋白Ⅰ型(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)、SMAD同源物3(Smad3)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的蛋白表达水平。结果与模型组比较,延龄草皂苷低、中、高剂量组的肺系数降低,大鼠肺组织炎性细胞浸润、胶原沉积和纤维化程度改善,大鼠IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA和ROS的表达水平降低,SOD的活性升高,发挥抗炎、抗氧化作用;肺纤维化标志蛋白fibronectin,CollagenⅠ和α-SMA表达被抑制;大鼠肺组织TGF-β1、Smad3、Wnt3a、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达水平降低,且治疗效果呈现剂量依赖性。结论延龄草皂苷可通过抗炎、抗氧化,抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对肺纤维化产生保护作用。

延龄草皂苷通过降低成纤维细胞活化蛋白表达水平抑制人类结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的研究延龄草皂苷是否能通过影响纤维细胞活化蛋白(FAP)表达来抑制结肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法将对数生长期结肠癌细胞HCT116分为5组:对照组、siRNA组、低剂量实验组、中剂量实验组和高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用含浓度为30, 60, 90 mg·L^(-1)延龄草皂苷的DMEM培养基100μL进行培养,对照组用等剂量的1%甲醇溶剂DMEM培养基进行培养,siRNA组用等剂量siRNA试剂且不含药物的DMEM培养基进行培养。用四唑盐(MTT)比色法增殖细胞实验筛选半数抑制浓度(IC_(50))及药物干预浓度;用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应分析检测FAP基因表达水平;用MTT比色法检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果对照组、siRNA组、低剂量实验组、中剂量实验组和高剂量实验组的细胞增殖抑制率分别为(0.00±0.01)%,(55.03±6.32)%,(12.63±1.82)%,(28.92±2.48)%和(46.22±5.01)%;这5组的FAP基因表达分别为1.00±0.01,0.01±0.01,0.42±0.13,0.12±0.06和0.03±0.05;这5组的细胞凋亡率分别为(5.02±0.92)%,(68.92±7.01)%,(18.02±2.11)%,(35.22±4.67)和(60.18±6.33)%;这5组的细胞迁移水平分别为150.67±16.24,21.97±1.63,90.27±9.33,65.20±5.31和41.37±3.46;这5组的细胞侵袭水平分别为139.00±13.52,12.40±1.00,87.17±8.00,52.43±4.20和35.63±2.18。上述指标,实验组与对照组比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论延龄草皂苷通过降低FAP表达水平抑制人类结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。

延龄草皂苷对小鼠急性胰腺炎和相关肺损伤的影响

目的研究延龄草皂苷对小鼠急性胰腺炎(AP)和相关肺损伤的作用。方法从BALB/c小鼠胰腺中分离原代腺泡细胞,通过碘化丙锭(PI)和Hochest染色,评估延龄草皂苷在体外对牛磺胆酸钠(NaT)诱导的腺泡细胞坏死的影响。将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组和低、高剂量(50、100mg·kg^-1)延龄草皂苷组,经胰胆管逆行注射3%NaT构建AP;于造模1、4 h后,ip给予延龄草皂苷,空白对照组和模型组给予等体积的生理盐水。造模24 h后,处死小鼠并收取血液、胰腺和肺组织,用于生化和病理检测。结果延龄草皂苷可显著抑制牛磺胆酸钠诱导的腺泡细胞坏死,降低胰腺淀粉酶和脂肪酶的升高,改善胰腺和肺的病理损伤。结论延龄草皂苷可显著减轻AP诱导的胰腺和肺损伤。

延龄草皂苷抗肿瘤作用机制的研究进展

延龄草皂苷是从延龄草属植物中提取分离的甾体皂苷,是发挥生物活性作用的主要成分。其通过抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞转移,逆转耐药性,调节机体免疫力,增强化疗药物疗效等发挥抗肿瘤的作用。本综述主要分析和总结延龄草皂苷抗肿瘤作用的主要途径和机制。

延龄草总皂苷对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨延龄草总皂苷(Total saponins of Trillium,TST)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的实验性糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法雄性SPF级SD大鼠50只,随机分为正常对照组、糖尿病组、延龄草总皂苷50、100、200 mg/kg组(TST50,TST100,TST200),后四组采用一次性腹腔注射STZ 40 mg/kg复制糖尿病模型。造模成功后正常组和糖尿病组给予同体积纯净水,其余三组分别给予延龄草总皂苷50、100、200 mg/kg/d连续灌胃给药10周,实验结束处死大鼠,取心脏称重计算心脏重量指数(心重/体重);TUNEL法计算心肌细胞凋亡指数;HE染色观察心肌结构改变;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factorα,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果 100和200 mg/kg TST均可明显降低糖尿病大鼠血清中炎症因子TNF-α(P<0.01)和IL-1β(P<0.05)的水平,而50 mg/kg TST作用不明显;不同剂量的TST均可降低糖尿病大鼠心肌组织中Bax的表达,抑制Caspase-3的活性,而100和200 mg/kg TST可增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的水平(P<0.05)。结论延龄草总皂苷可减轻糖尿病大鼠体内炎症反应,抑制心肌细胞凋亡从而保护糖尿病心肌损伤,有一定的抗炎、抗凋亡作用。

延龄草总皂苷调控hsacirc0025033/miR-149对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:研究延龄草总皂苷对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:将不同浓度的延龄草总皂苷作用于A549细胞,应用实时定量PCR检测hsa_circ_0025033和miR-149的表达,应用双荧光素酶基因系统验证hsa_circ_0025033与miR-149的靶向关系。分析干扰hsa_circ_0025033表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果:延龄草总皂苷可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,下调hsa_circ_0025033表达,上调miR-149表达(P<0.05)。干扰hsa_circ_0025033可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡(P<0.05)。hsa_circ_0025033可靶向结合miR-149,干扰hsa_circ_0025033表达可上调miR-149表达(P<0.05)。过表达hsa_circ_0025033逆转延龄草总皂苷对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论:延龄草总皂苷能够抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,可能与调节hsa_circ_0025033/miR-149通路有关。

延龄草总皂苷通过下调miR-1470表达抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨延龄草总皂苷对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其对miR-1470的调控作用。方法:体外人肺癌细胞A549、延龄草总皂苷处理细胞、anti-miR-NC、anti-miR-1470分别转染入A549细胞,miR-NC、miR-1470 mimics分别转染入A549细胞后加入延龄草总皂苷处理细胞;采用MTT实验检测细胞增殖抑制率;采用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭;采用qRT-PCR法检测miR-1470的表达量。结果:延龄草总皂苷处理后细胞增殖抑制率升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数均明显减少(P<0.05),miR-1470的表达水平降低(P<0.05);转染anti-miR-1470后细胞增殖抑制率升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数均明显减少(P<0.05)。结论:延龄草总皂苷可通过下调miR-1470的表达减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

延龄草甾体皂苷对脑缺血大鼠星形胶质细胞GFAP、Cx43及Wnt3a/Dvl3信号通路的影响

目的观察延龄草甾体皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、缝隙连接蛋白43(Cx43)及Wnt3a/Dvl3信号通路的影响,探讨其改善脑缺血的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金纳多组(60 mg/kg)及TSTT低、高剂量组(33、65 mg/kg),每组12只。分别进行相应干预,连续15 d。采用透射电镜观察神经元、星形胶质细胞超微结构,免疫荧光染色检测缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达,RT-PCR检测缺血周围脑组织Wnt3a、Dvl3基因表达。结果透射电镜观察结果显示:模型组大鼠神经元核明显固缩,核仁消失,染色质电子密度增加,细胞质内细胞器明显减少,可见大量空泡,星形胶质细胞肿胀明显,染色质消融,核周围出现空白区,细胞器减少;与模型组比较,TSTT低、高剂量组和金纳多组大鼠神经元和星形胶质细胞超微结构损伤明显减轻。免疫荧光染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,TSTT低、高剂量组和金纳多组大鼠缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达显著降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠缺血周围脑组织Dvl3基因表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,TSTT高剂量组和金纳多组大鼠缺血周围脑组织Wnt3a和Dvl3基因表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论TSTT可通过上调Wnt3a/Dvl3基因表达、下调GFAP和Cx43表达,抑制星形胶质细胞异常活化,减轻脑缺血大鼠神经元、星形胶质细胞超微结构损伤。

延龄草总皂苷通过促进人β防御素2(HBD-2)的表达抑制HuH-7细胞侵袭和迁移

目的探讨延龄草总皂苷调控人β防御素2(HBD-2)对HuH-7细胞侵袭和迁移的影响和机制。方法采用(0.5、1.0、2.0、4.0)mg/L延龄草总皂苷处理HuH-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,TranswellTM小室测定细胞侵袭和迁移能力,Western blot法检测细胞中HBD-2、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9的蛋白水平。将HBD-2小干扰RNA(siRNA)转染至HuH-7细胞中,用延龄草总皂苷处理,实时定量PCR和Western blot法验证干扰效果,TranswellTM法分别检测细胞侵袭和迁移能力。结果除0.5 mg/L延龄草总皂苷对HuH-7细胞增殖无影响外,其他各剂量延龄草总皂苷均可抑制HuH-7细胞增殖。(0.5、1.0)mg/L的延龄草总皂苷处理均可下调细胞MMP2、MMP9蛋白水平、增加HBD-2蛋白水平并抑制细胞侵袭和迁移。HBD-2 siRNA转染可明显降低HuH-7细胞HBD-2水平。下调HBD-2提高延龄草总皂苷处理的HuH-7细胞侵袭和迁移能力并增加细胞MMP2、MMP9蛋白水平。结论延龄草总皂苷通过促进HBD-2表达抑制HuH-7细胞侵袭和迁移。

延龄草总皂苷体内外抗结肠癌活性的作用

目的基于RAS/AKT/ERK信号通路探讨延龄草总皂苷体内外抗结肠癌作用及机制。方法建立移植瘤小鼠模型,延龄草总皂苷水溶液(5、10、15 mg/kg)灌胃给药,通过RT⁃PCR方法检测瘤体组织细胞基因表达,HE染色法测定组织病理学变化,Western blot法测定瘤组织中RAS蛋白的表达;体外实验包括MTT法检测延龄草总皂苷对其抑制率的影响,Western blot法检测细胞中RAS蛋白、AKT、ERK1/2蛋白及其磷酸化蛋白的表达。结果体内实验结果表明对照组瘤重为(3.101±0.301)g、延龄草总皂苷低剂量组为(2.325±0.241)g、延龄草总皂苷中剂量组为(2.019±0.305)g、延龄草总皂苷高剂量组为(1.513±0.178)g;瘤体组织细胞RAS基因表达呈现剂量依赖性降低;HE染色显示延龄草总皂苷(10、15 mg/kg)可见大片肿瘤细胞坏死;瘤组织RAS蛋白表达呈现浓度依赖性降低。细胞毒性实验结果表明延龄草总皂苷可以有效抑制结肠癌CT26细胞增殖;Western blot实验结果显示延龄草总皂苷能够下调结肠癌CT26细胞中RAS蛋白以及磷酸化AKT、磷酸化ERK1/2蛋白的表达。结论延龄草总皂苷可以在体内外产生抗结肠癌作用,其机制可能与干扰RAS/AKT/ERK信号通路相关。

延龄草总皂苷抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231转移的作用及机制研究

目的观察延龄草总皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与迁移的影响及相关机制。方法培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,加入延龄草总皂苷(1.5、3 mg·L^(-1))24 h后,采用细胞侵袭实验、划痕实验观察延龄草总皂苷对MDA-MB-231细胞侵袭与迁移的影响,以Western blot方法检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果延龄草总皂苷能够有效地抑制MDA-MB-231细胞的侵袭与迁移,降低MMP-2与MMP-9的蛋白表达并呈现浓度依赖性。结论延龄草总皂苷能够有效地抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与迁移,其可能机制与降低MMP-2、MMP-9的表达水平有关。

延龄草总皂苷调控IL-6/STAT3信号抑制胃癌细胞侵袭和迁移的作用研究

目的:研究延龄草总皂苷对胃癌细胞侵袭和迁移的作用及机制。方法:以延龄草总皂苷处理胃癌细胞,CCK-8法测定细胞增殖能力变化,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力变化,Westernblot检测细胞中MMP-2、MMP-9、E-cadherin、Vimentin、IL-6、STAT3、p-STAT3蛋白表达变化。方法:以IL-6重组慢病毒感染胃癌细胞,经延龄草总皂苷处理以后,Transwell小室、Westernblot分别测定细胞侵袭迁移能力和MMP-2、E-cadherin、MMP-9、Vimentin、IL-6、STAT3、p-STAT3蛋白表达变化。结果:延龄草总皂苷处理后的胃癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力也下降,细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高,IL-6、p-STAT3蛋白表达水平也降低。IL-6重组慢病毒感染可以提高延龄草总皂苷作用条件下胃癌细胞中IL-6、p-STAT3蛋白表达水平。过表达IL-6可以逆转延龄草总皂苷对胃癌细胞侵袭迁移和MMP-2、E-cadherin、MMP-9、Vimentin蛋白表达影响。结论:延龄草总皂苷抑制IL-6/STAT3信号下调胃癌细胞侵袭和迁移能力。