延龄草苷对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤和炎症因子表达的影响

探讨延龄草苷对过氧化氢(H_2O_2)诱导的PC12细胞氧化损伤和炎症因子表达的影响。采用MTT法和LDH活性测定观察延龄草苷对PC12细胞模型的影响,采用相关试剂盒检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,Western blot检测Sirt1、NF-κB和TNF-α的蛋白表达。延龄草苷(5~20μM)能够显著提高H_2O_2损伤的PC12细胞的活力,提高细胞抗氧化能力,并上调Sirt1的表达,下调NF-κB和TNF-α的表达,其保护作用可能与提高抗氧化能力,降低炎症因子损伤,调控Sirt1/NF-κB信号通路有关。

高效液相-质谱联用法(LC-MS/MS)测定延龄草苷血药浓度及其药物动力学研究

目的:进行延龄草苷在小鼠体内的药物动力学研究。方法:采用甲醇沉淀蛋白进行血浆样品预处理,选用人参皂苷 Rh2为内标,以 LC-MS/MS 法测定小鼠血浆中延龄草苷的含量。色谱柱为 MetaChem ODS-3(50mm×2.0mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲酸(80:20:0.1),流速为0.2mL·min^(-1)。电喷雾离子化(ESI)方式,采用多反应监测,检测离子为正离子,分别选择 m/z 577.6→253.6amu 和 m/z 621.5→603.7amu 作为延龄草苷和内标物人参皂苷 Rh2的检测离子对。结果:延龄草苷在2.0μg·mL^(-1)～200μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9964)。方法的准确度范围为-3.0%～1.4%,日内精密度 RSD 范围为1.1%～3.3%,日间精密度 RSD 范围为3.2%～5.1%。小鼠尾静脉注射延龄草苷(7.6mg·kg^(-1))后,药-时数据符合二室模型,主要药物动力学参数:t_(1/2)为5.56h、K_e 为0.12h^(-1)、C_(max)为130.1μg·mL^(-1)、V_d 为4.6mL、Cl 为0.049mL·h·kg^(-1)。结论:建立的含量测定方法快速、准确,适用于延龄草苷在小鼠体内的药物动力学研究。

延龄草苷通过上调miR⁃1247⁃3p表达减轻高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤

目的探讨延龄草苷对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRVEC)损伤的影响及作用机制。方法5、10、20μmol/L的延龄草苷作用于30 mmol/L葡萄糖诱导的HRVEC细胞,或30 mmol/L葡萄糖诱导转染miR⁃1247⁃3p模拟物的HRVEC细胞,或20μmol/L的延龄草苷作用于30 mmol/L葡萄糖诱导的转染miR⁃1247⁃3p抑制剂的HRVEC细胞,DCFH⁃DA法检测细胞中ROS水平,酶联免疫吸附法检测MDA和SOD水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl⁃2和Bax蛋白表达,RT⁃qPCR法检测miR⁃1247⁃3p表达。结果延龄草苷降低了高糖诱导的HRVEC中ROS和MDA水平、凋亡率及Bax蛋白表达(P<0.05),提高了SOD活性、Bcl⁃2蛋白表达及miR⁃1247⁃3p表达(P<0.05),且呈剂量依赖性。过表达miR⁃1247⁃3p降低了高糖诱导的HRVEC中ROS和MDA水平、凋亡率和Bax蛋白表达(P<0.05),提高了SOD活性和Bcl⁃2蛋白表达(P<0.05)。抑制miR⁃1247⁃3p逆转延龄草苷对高糖诱导的HRVEC细胞氧化应激和凋亡的影响(P<0.05)。结论延龄草苷可能通过上调miR⁃1247⁃3p表达抑制高糖诱导的HRVEC细胞氧化应激和凋亡,减轻细胞损伤。

延龄草苷的制备

延龄草苷是中药中的一个有效成分,采用提取分离的方法从中药材大量获得它是困难的.我们以易得的原料薯蓣皂素和葡萄糖为原料合成了它.首先从葡萄糖起始,通过酰化、溴代反应,采用一锅煮的方法合成中间体溴-D-四乙酰葡萄糖;再与薯蓣皂素通过催化剂Hg(Ac)催化立体选择性的生成β-苷键,水解反应制备得到延龄草苷,总产率38.2%。反应条件温和,适于大量制备。产物结构通过IR,1HNMR和MS确证。

延龄草苷对脊髓损伤大鼠核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路的影响

目的探索延龄草苷对大鼠脊髓损伤后核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路及氧化应激反应的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠108只,随机分为假手术组、模型组和延龄草苷组,每组36只,每组再分为1 d、3d和7d三个亚组,每个亚组12只。模型组和延龄草苷组采用改良Allen重物打击法制备髓损伤模型,假手术组不损伤脊髓。延龄草苷组每天给予延龄草苷200mg/kg灌胃,假手术组和模型组每天给予等量生理盐水,每天2次。术后1d、3d、7d进行BBB评分;术后7d,取损伤部位脊髓组织进行尼氏染色,观察形态学变化;ELISA检测脊髓内氧化应激因子丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化;术后1d、3 d、7 d,Western blotting分析检测脊髓组织内Nrf2、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、血红素加氧酶-1(HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶-1(NQO1)的表达情况。结果与模型组相比,延龄草苷组BBB评分提高(P<0.05);脊髓结构较完整,神经元形态较正常,尼氏小体数量增多;脊髓组织内SOD活性提高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05);脊髓内抗氧化相关蛋白Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1的表达均升高(P<0.05)。结论延龄草苷对大鼠脊髓损伤有保护作用,可能通过抑制组织内氧化应激反应改善运动功能。

延龄草苷的合成方法研究

延龄草苷为薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,来源于中药延龄草,为甾体皂苷类化合物,具有广泛的生物活性。通过两种方法合成延龄草苷:Koenigs-Knorr法,以溴代糖为糖基供体,以碳酸银作为催化剂,将薯蓣皂苷元与溴代-α-D-四乙酰葡萄糖成苷合成延龄草苷;三氟化硼-乙醚催化法,全乙酰葡萄糖作为糖供体,将薯蓣皂苷元与α-D-五乙酰葡萄糖成苷合成延龄草苷。合成产物和中间体的结构经^(1)H-NMR和^(13)C-NMR法确认。比较两种合成方法:Koenigs-Knorr法路线较长,步骤略为繁琐,收率较高,为74.7%;三氟化硼-乙醚催化法路线较短,反应迅速,成本更低,但收率较低,为34.9%。采用的两种方法均具有操作简单、反应条件温和的优点,可为延龄草苷的广泛应用提供物质保证,并为甾体皂苷类化合物的化学合成提供技术支持。

延龄草苷对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨延龄草苷(Trillium tschonoskii maxim,TTM)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法PC12细胞随机分为正常对照组、H_(2)O_(2)损伤组(300μmol/L H_(2)O_(2))、H_(2)O_(2)+TTM(6.25μmol/L)、H_(2)O_(2)+TTM(12.50μmol/L)组、H_(2)O_(2)+TTM(25.00μmol/L)。通过H_(2)O_(2)刺激PC12细胞建立细胞损伤模型,TTM干预后,以甲氮甲唑蓝[3-(4,5-dimethy lthiazol-2-yl)-2,5dipheny ltetrazolium bromide,MTT]法检测各组细胞活力,流式细胞术进行细胞凋亡分析,利用Western blot检测凋亡通路分子蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3的表达情况。结果MTT检测结果显示,与正常对照组相比,H_(2)O_(2)损伤组细胞活力显著降低(P<0.01),凋亡细胞百分比显着增高(P<0.01),而H_(2)O_(2)+TTM(12.50μmol/L)组细胞活力较H_(2)O_(2)损伤组显著增高(P<0.01),凋亡细胞百分比显著降低(P<0.01);Western blot结果显示,相较于正常对照组,H_(2)O_(2)损伤组Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bax和Cleaved-caspase 3的表达水平显著升高(P<0.05;P<0.01);H_(2)O_(2)+TTM(12.50μmol/L)组较H_(2)O_(2)损伤组Bcl-2的蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bax和Cleaved-caspase 3的表达水平升高显著降低(P<0.01;P<0.05)。结论H_(2)O_(2)诱导了PC12细胞的细胞凋亡,TTM通过抑制细胞凋亡逆转H_(2)O_(2)诱导的细胞损伤,对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。

延龄草总皂苷对2-VO模型大鼠认知功能及神经血管单元的作用

目的观察延龄草总皂苷(TST)对大鼠的血管性认知障碍及其神经血管单元(NVU)和神经环路完整性的作用。方法将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TST组及多奈哌齐组,每组12只。除假手术组外,其他3组大鼠均采用双侧颈总动脉结扎(2-VO)法建立脑缺血后认知障碍模型。造模后,TST组给予TST100mg/kg灌胃,多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐0.45mg/kg灌胃,对照组及模型组给予同体积的生理盐水,1次/d,连续28d。采用水迷宫实验检测各组大鼠的认知功能;HE、尼氏染色观察大鼠脑组织病理改变;免疫组织化学染色观察大鼠海马突触核蛋白(SYN)的表达情况;高尔基染色观察海马神经元树突棘的变化;Westernblotting检测各组大鼠海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-10、血管内皮生长因子A(VEGFA)、突触后致密蛋白95(PSD95)和生长关联蛋白43(GAP43)表达水平。结果水迷宫实验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比均减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比增多(P<0.05)。与假手术组比较,模型组海马CA1区神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量增多(P<0.05)。Westernblotting结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠海马组织IL-1β、VEGFA表达水平升高(P<0.05),PSD95、GAP43表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组IL-1β表达水平均降低(P<0.05),VEGFA、IL-10、GAP43表达水平均升高(P<0.05)。结论TST可能通过促进突触可塑性和NVU重塑减轻2-VO模型大鼠的认知障碍,有望用于卒中的治疗。

延龄草皂苷对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响

目的观察延龄草皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响,探讨其改善脑缺血损伤的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、TSTT 65 mg/kg组、TSTT 33 mg/kg组和金纳多组,各给药组灌胃相应药物,连续15 d。HE染色观察脑组织病理变化,LFB染色观察脑组织神经纤维损伤,免疫荧光染色检测梗死灶周围皮层2′,3′-环核苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)、蛋白聚糖(NG2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,实时荧光定量PCR检测梗死灶周围皮层GSK-3、β-catenin、脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP2)基因表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠患侧脑组织明显坏死,神经细胞大量死亡,胞体皱缩,单位面积神经细胞数量显著减少(P<0.01),神经纤维丢失、排列混乱,髓鞘中有大量空泡,神经纤维相对积分光密度显著减少(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠神经细胞形态有所改善,单位面积神经细胞数量显著增加(P<0.05,P<0.01),神经纤维排列较有序,髓鞘中空泡较少,神经纤维相对积分光密度显著增加(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层CNPase阳性表达显著降低,NG2阳性表达显著升高(P<0.01),NG2/GSK-3β、NG2/β-catenin、CNPase/GSK-3β、CNPase/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层CNPase、NG2表达显著升高,CNPase/GSK-3β、NG2/GSK-3β阳性细胞显著减少,CNPase/β-catenin、NG2/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.05,P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3αmRNA表达显著升高(P<0.05),β-catenin、CRMP2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,TSTT 65 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3α、GSK-3βmRNA表达显著降低,β-catenin和CRMP2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论TSTT可减轻脑缺血大鼠脑组织损伤,保护少突胶质细胞,促进少突胶质前体细胞存活,其机制可能与下调GSK-3表达,上调β-catenin、CRMP2表达有关。

延龄草总皂苷对D-gal诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响

目的探讨延龄草总皂苷(total saponins from Trillium tschonoskii maxim,TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(D-gal,皮下注射)、干预组(TST,灌胃给予低、中、高3个剂量),每组10只,连续给药6周。Morris水迷宫评价大鼠认知功能;HE、Nissl染色观察海马及皮质组织形态;免疫组织化学法检测Pink1、Parkin的定位表达;Western blot检测Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62、Beclin1的表达水平。结果与正常对照组相比,D-gal模型组逃避潜伏期时间延长、穿越平台次数减少(P<0.05);大鼠海马组织内神经元数量明显减少;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达减少;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显下降,p62的表达明显升高(P<0.05)。与D-gal模型组相比,TST各剂量组逃避潜伏期时间缩短、穿越平台次数增多、停留在平台所在象限时间增加(P<0.05);海马神经元数量明显增多;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达增多;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显升高,p62的表达明显降低(P<0.05)。结论TST具有明确的神经保护作用,对D-gal所致衰老大鼠的学习记忆降低具有改善作用,其机制可能与Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

延龄草苷对脂多糖刺激的小胶质细胞炎症抑制作用

目的探讨延龄草苷(trillin)对小胶质细胞(BV-2)的炎性激活的抑制作用。方法不同浓度的延龄草苷孵育0.5h,然后用脂多糖进行刺激,培养24 h后收集上清,Greiss法检测NO浓度;CCK-8检测延龄草苷对小胶质细胞活力的影响;Elisa检测肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度;实时定量PCR(RT-PCR)检测TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-1、COX-2基因的表达。结果在不影响细胞活力的前提下,延龄草苷能明显抑制NO的释放,同时能抑制激活诱导细胞死亡,能明显抑制TNF-α的产生,能明显抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2 mRNA的表达,但是不能抑制COX-1 mRNA的表达。结论延龄草苷可以抑制LPS诱导的小胶质细胞的炎性激活,抑制炎性基因的表达。

HPLC法测定穿山龙中伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的含量

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定穿山龙中伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的含量。方法:采用Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～18 min,25%A线性变为36%A;18～40min,36%A线性变为90%A;40～55 min,90%A保持不变),流速1.0 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温30℃。结果:伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性范围分别为9.80～588.0μg.mL-1(r=0.9994),20.20～1212μg.mL-1(r=0.9995),5.330～319.8μg.mL-1(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为97.3%,99.4%,97.6%。结论:该方法简便、准确,为穿山龙药材的质量评价提供了方法。

延龄草苷可提高氟尿嘧啶的抗宫颈癌疗效

目的 :观察延龄草苷对氟尿嘧啶抗宫颈癌疗效的促进作用。方法 :宫颈癌He La细胞分别与延龄草苷(300μg/m L)、氟尿嘧啶(10μg/m L)以及氟尿嘧啶(10μg/m L)+延龄草苷(30、100和300μg/m L)孵育后,采用MTT法检测延龄草苷与氟尿嘧啶对体外培养的He La细胞增殖的抑制作用,应用FCM法检测He La细胞的凋亡情况。蛋白质印迹法检测延龄草苷联用氟尿嘧啶对He La细胞中丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶、丝/苏氨酸蛋白激酶Akt以及凋亡相关信号通路蛋白表达的影响。建立小鼠移植瘤模型,腹腔注射给药后检测延龄草苷(300 mg/kg)对裸鼠体内肿瘤形成的拮抗作用。结果 :延龄草苷与氟尿嘧啶在体外联合应用,可增强氟尿嘧啶对宫颈癌He La细胞增殖的抑制作用(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05)。延龄草苷与氟尿嘧啶联用可抑制裸鼠体内的肿瘤生长,并且比单独应用氟尿嘧啶的效果显著(P<0.05)。延龄草苷与氟尿嘧啶联合作用可降低肿瘤细胞中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶和磷酸化Akt蛋白的表达,同时活化型caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(均P<0.05)。结论 :延龄草苷可提高氟尿嘧啶的抗宫颈癌疗效,推测其可作为一种有潜力的化疗药物增敏剂。

延龄草苷对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨延龄草苷对肺炎链球菌(SP)感染的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法取对数生长期细胞A549,用1×10^8 CFU·mL^-1的肺炎链球菌培养作为模型组,正常培养细胞作为正常组。细胞A549分别用5,10,20μmol·L^-1的延龄草苷处理,再用1×10^8 CFU·mL^-1的肺炎链球菌培养,分别作为第一实验组至第三实验组。转染后,将miR-NC、miR-340-5p、si-NC、si-NOX1转染至A549细胞中,再用1×10^8 CFU·mL^-1的肺炎链球菌培养,分别记为第五转染组至第八转染组。将anti-miR-NC、anti-miR-340-5p转染至A549细胞后,再用20μmol·L^-1的延龄草苷处理,再用1×10^8 CFU·mL^-1的肺炎链球菌培养,作为第九转染组至第十转染组,转染步骤按照LipofectamineTM 2000试剂盒进行操作。以流式细胞术检测细胞凋亡;以酶联免疫吸附法检测白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-6(IL-6)的含量。以实时荧光定量-PCR法检测miR-340-5p和NOX1基因表达水平。结果正常组、模型组、第一实验组、第二实验组、第三实验组、第五转染组、第六转染组、第七转染组、第八转染组、第九转染组和第十转染组的细胞凋亡率分别为(7.54±0.75)%,(27.63±2.72)%,(20.11±2.05)%,(15.32±1.57)%,(10.45±1.05)%,(25.18±2.53)%,(12.47±1.28)%,(26.54±2.63)%,(13.48±1.39)%,(10.98±1.09)%和(23.41±2.25)%;这11组的IL-10含量分别为(24.98±2.41),(8.03±0.82),(12.95±1.31),(17.42±1.34),(21.03±1.87),(8.73±0.88),(18.41±0.72),(8.24±0.81),(16.48±1.63),(22.54±2.37)和(12.48±1.25)ng·L^-1;这11组的IL-6含量分别为(5.39±0.58),(19.64±1.82),(16.49±1.64),(11.43±1.18),(7.32±0.81),(19.32±1.88),(9.64±0.97),(20.04±2.03),(10.65±1.08),(6.84±0.69)和(15.54±1.57)ng·mL^-1。模型组、第三实验组、第九转染组和第十转染组的miR-340-5p基因表达水平分别为1.01±0.09,2.31±0.23,2.38±0.24,1.33±0.13;这4组的NOX1基因表达水平分别为0.86±0.08,0.46±0.04,0.43±0.04,0.73±0.06。上述指标:模型组与正常组相比,或第一实验组至第三实验组与模型组相比,或第六转染组与第五转染组相比,或第八转染组与第七转染组相比,或第十转染组与第九转染组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论延龄草苷可保护肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤,其机制可能与miR-340-5p/NOX1表达有关。

延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响

目的探讨延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响及作用机制。方法采用改良线栓法制备卒中后认知障碍大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、延龄草总皂苷组(100 mg/kg)和盐酸多奈哌齐组(0.45 mg/kg),每组10只,另设假手术组10只,给药组分别予相应药物灌胃,连续4周。Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能,HE和尼氏染色观察脑组织病理变化,TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡情况,高尔基染色观察海马树突棘变化,Western blot检测海马组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、SYN、PSD-95、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著减少(P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元排列紊乱、尼氏体减少,凋亡神经元数量增加,树突棘密度减小(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,延龄草总皂苷组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著减少(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著增加(P<0.05,P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元饱满、尼氏体增多,凋亡神经元数量减少,树突棘密度增加(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论延龄草总皂苷可显著改善卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力,抑制神经元和突触损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制神经元凋亡有关。

HPLC-ELSD同时测定白英中延龄草苷和去半乳糖替告皂苷的含量

目的:建立同时测定白英中延龄草苷(trillin)和去半乳糖替告皂苷(desgalactotigonin)含量的HPLC-ELSD法。方法:采用Diamonsil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-10 mmol.L-1醋酸铵溶液52∶48,柱温25℃,流速0.6mL.min-1,进样量20μL,检测器漂移管温度为95℃,氮气流速2.3 L.min-1。结果:延龄草苷和去半乳糖替告皂苷分别在20～200 mg.L-1(r=0.999 8)和10～100 mg.L-1(r=0.999 7)内线性关系良好。延龄草苷的平均回收率为99.4%,RSD为0.90%;去半乳糖替告皂苷的平均回收率为100.3%,RSD 1.1%。结论:该方法准确,重复性良好,适用于白英药材的质量控制。

延龄草总皂苷对D-半乳糖诱导的SD大鼠心肌线粒体自噬的影响

目的探讨延龄草苷(TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的大鼠心肌组织保护作用及其对心肌线粒体自噬的影响。方法50只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、D-gal模型组(200 mg·kg^(-1),sc)和D-gal+TST 50,100和200 mg·kg^(-1)组(ig给予TST,2 h后sc给予D-gal),连续给药7周。心脏取血检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBD)和谷草转氨酶(GOT)水平;HE染色法观察大鼠心肌组织病理变化;免疫组织化学染色检测线粒体外膜结构域包含蛋白FUN141(FUNDC1)和线粒体BNIP3L膜蛋白(NIX)的定位和表达;Western印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链LC3Ⅱ/Ⅰ比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)、Beclin1、P62、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、E3泛素-连接酶活性帕金森病蛋白2(Parkin)、FUNDC1和NIX蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,D-gal模型组大鼠血清CK,CK-MB,LDH,HBD和GOT水平均显著升高(P<0.05,P<0.01);HE染色结果显示,D-gal模型组大鼠心肌细胞明显萎缩并伴脂肪变性;免疫组化结果显示,FUNDC1和NIX蛋白表达降低(P<0.01);Western印迹结果显示,LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin1、PINK1、Parkin、FUNDC1和NIX蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),P62表达升高(P<0.05)。与D-gal模型组相比,D-gal+TST 50,100和200 mg·kg^(-1)组大鼠血清总心肌酶谱各项指标均显著下降(P<0.05,P<0.01),心肌损伤明显改善,LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin1、PINK1、Parkin、FUNDC1和NIX蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),D-gal+TST 200 mg·kg^(-1)组P62蛋白表达水平无显著性差异。结论TST对D-gal诱导的大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能与PINK1,Parkin,FUNDC1和NIX蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

不同产地及不同药用部位延龄草中3种皂苷的含量测定

[目的]建立HPLC法测定不同产地及不同药用部位延龄草中延龄草皂苷B2、B1、B3的含量。[方法]以UItimateXB-C18(4.6mm×150 mm,3μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水(10%～100%梯度,0～50 min),检测波长为203 nm,流速为1.0 ml/min,柱温30℃。[结果]延龄草皂苷B2、B1、B3分别在0.1～2.0 mg/ml(R=0.999 6)、0.05～2.0 mg/ml(R=0.999 4)、0.05～3.5 mg/ml(R=0.998 9)范围内与峰面积的线性关系良好,平均加样回收率分别为97.8%(RSD=1.19%)、102.6%(RSD=1.62%)和101.5%(RSD=2.38%)。不同产地及不同药用部位中延龄草皂苷B2、B1和B3的含量差异较大。[结论]该测定方法简便、准确、重现性好,可有效地评价不同产地及不同药用部位延龄草药材的质量。

HPLC法同时测定延龄草根及根茎中延龄草皂苷B_2、B_1、B_3的含量

目的:建立HPLC法同时测定延龄草Trillium tschonoskiiMaxim.根及根茎中延龄草皂苷B2、B1、B3的含量。方法:采用UItimate RXB-C18(4.6 mm×150 mm,3μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(10%-100%梯度),检测波长为203 nm,流速1.0mL/min,柱温30℃。结果:在该色谱条件下,三种延龄草皂苷的分离度良好,延龄草皂苷B2、B1、B3浓度在0.05-0.5 mg/mL范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.2%、102.5%、101.4%。结论:该方法简便、准确、重现性好,适用于同时测定延龄草皂苷B2、B1、B3的含量,可作为延龄草质量标准制定的依据。