有效积温对建泽泻和川泽泻抗氧化酶活性及功效物质的影响

根据泽泻道地产区福建建瓯和四川彭山近40年气象数据,分析建泽泻(东方泽泻Alismaorientale)和川泽泻(泽泻A.plantago-aquatica)大田生长期的有效积温变化范围与分布规律。模拟2个道地产区有效积温变化规律,比较研究有效积温对建泽泻和川泽泻的抗氧化酶活性及功效物质积累的影响。结果表明:(1)建泽泻和川泽泻所需有效积温范围分别在1044~1340℃·d和602~962℃·d之间,且在不同生长阶段所需有效积温也存在显著差异;(2)建泽泻与川泽泻在道地产区有效积温条件下,抗氧化能力较强,块茎中23-乙酰泽泻醇B含量较高,快速积累期均出现在第105~120天,而两种泽泻23-乙酰泽泻醇C积累变化规律则相反,道地产区有效积温条件下的含量较低。以上结果表明,有效积温可显著影响建泽泻与川泽泻的抗氧化能力与功效物质积累,该研究为探究建泽泻与川泽泻道地性成因以及规范化栽培管理提供理论依据。

水稻与建泽泻轮作及高效栽培技术

水稻种植为南平市农业主导产业,建泽泻是福建省闽北的道地药材,水稻—建泽泻轮作栽培具有用工少、成本低、容易管理、效益稳定等优势,保证粮食生产的同时又增加农户收入。总结了水稻—建泽泻轮作高效栽培技术。

保健食品建泽泻及其混淆品的PCR-RFLP分子鉴别

目的:寻找简易可重复的分子标记方法对保健食品建泽泻及其混淆品进行鉴定。方法:对建泽泻及其混淆品的rDNA ITS区进行PCR扩增、测序,运用ClustalX、Mega3.0、DNAMAN 4.0等软件对ITS区进行序列分析和PCR限制性酶切图谱分析(PCR-RFLP)。结果:依据建泽泻及其混品完整的rDNA ITS区片段长度,将慈菇和甘薯两种混淆品首先区分开;再通过PCR-RFLP分析,可将建泽泻从川泽泻、窄叶泽泻、小泽泻和芋等混淆品中成功鉴别出来。结论:rDNA ITS片段长度不足以用于鉴别保健食品建泽泻原料的真伪;PCR-RFLP可对保健食品建泽泻及其混淆品进行简便而快捷的分子鉴别。

氮磷钾肥对地道药材建泽泻生长与品质的影响

通过田间正交试验并结合室内HPLC分析,研究了氮、磷和钾素营养对建泽泻〔Alisma orientale(Sam.)Juzepcz.〕生长和品质的影响。结果表明,施用基肥对建泽泻生长前期的叶片数、株高、叶宽和叶长等农艺性状的影响均大于不施基肥处理;氮、磷和钾施用量对建泽泻产量均无显著影响,当施肥量为纯N 225.0 kg.hm-2、P2O5187.5 kg.hm-2和K2O 225.0 kg.hm-2,总施肥量为637.5 kg.hm-2时,产量最高;氮、磷和钾施用量对建泽泻块茎的粒重均无显著影响;磷的施用量对建泽泻指标性成分23-乙酰泽泻醇B含量有显著影响,而氮和钾均没有显著影响,且影响作用从高至低次序依次为P2O5、N、K2O。

建泽泻HMGR基因保守区片段克隆与组织分布研究

目的:对建泽泻三萜类成分生物合成关键酶HMGR基因保守区片段进行克隆与组织分布研究。方法:以建泽泻总RNA为模板,通过RT-PCR方法,克隆HMGR基因的保守区片段,并用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测HMGR基因在不同器官中的表达情况。结果:所克隆的建泽泻HMGR基因保守区序列长度为458 bp(Gen-Bank注册号为HQ913638),与药用植物黄花蒿、柴胡、杜仲、丹参的同源性分别达到86.8%、88.2%、88.2%、85.5%,QRT-PCR结果显示HMGR基因在建泽泻各器官中均有表达,其中叶片表达量较高,块茎、根、叶柄表达量相对较低。结论:首次分离并报道了建泽泻HMGR基因保守区片段克隆及其组织分布,为泽泻三萜类成分生物合成途径的阐明和生物工程应用提供科学依据。

建泽泻盐炙工艺优化及其HPLC指纹图谱的建立

目的:优化建泽泻盐炙工艺并建立其高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法:以23-乙酰泽泻醇B、总三萜含量和外观性状综合评分为指标,采用单因素试验和正交试验,优化建泽泻盐炙工艺中用盐量、炒制温度和炒制时间3个因素的水平。采用HPLC法分别在208、245 nm波长下建立10批建泽泻盐炙品的指纹图谱,经软件比较其与对照图谱的相似度。结果:最优工艺为每100 kg泽泻加10 kg水溶解的2 kg盐,闷润1 h,在100℃下炒制8 min。验证试验中,3批盐炙品外观性状均符合要求,综合评分平均值为93.94(RSD=6.63%,n=3);23-乙酰泽泻醇B和总三萜含量稳定,RSD分别为7.41%、7.39%(n=3)。在208、245 nm波长下分别标定了建泽泻盐炙品的17、10个共有峰;10批样品指纹图谱相似度均大于0.9。结论:优化的建泽泻盐炙工艺合理可行、重现性好;建立的指纹图谱共有峰稳定,可用于建泽泻盐炙品的质量评价。

基于ITS2序列的建泽泻及其混伪品鉴定研究

目的利用ITS2条形码鉴别建泽泻及其混伪品。方法提取28份建泽泻及其混伪品基因组DNA,PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,测序结果提交至GenBank,同时从GenBank下载泽泻科植物及其混伪品10种17条ITS2序列,对提交与下载的45条序列,应用MEGA 5.1软件进行序列比对,计算种内和种间距离,采用相似性搜索法、最近距离法进行鉴定分析,并构建NJ系统进化树直观反映鉴定结果。结果建泽泻、川泽泻ITS2序列长度均为311bp,存在1个变异位点;建泽泻与泽泻科泽泻属物种距离较近,与泽泻科其他属及其混伪品之间遗传距离较远;NJ树结果显示建泽泻及其混伪品均可明显区分,表现出良好的单系性。结论 ITS2序列作为DNA条形码可以准确快捷地鉴别建泽泻及其混伪品,为其种质资源鉴定及临床安全用药提供了新的技术手段。

垄畦栽培对地道药材建泽泻产量与品质的影响

以建泽泻的当地传统种植方法为对照,对地道药材建泽泻进行垄畦栽培试验。结果表明:垄畦栽培有利于建泽泻块茎产量的提高,促进其主要有效成分24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B的累积,是一项值得推广的改良种植方法。

建泽泻光合特性及其与环境因子的相互关系研究

目的研究建泽泻叶片光合特性及其与环境因子的相互关系。方法利用LI-6400型便携式光合测定仪,测定建泽泻叶片的净光合速率日变化、环境因子日变化以及光响应。结果建泽泻叶片净光合速率(Pn)与气孔导度(Gs)光合日变化呈双峰曲线,蒸腾速率(Tr),胞间CO2浓度(Ci)及气孔限制值(Ls)日变化呈单峰曲线,水分利用率(WUE)呈单谷型曲线。相关性分析表明,建泽泻叶片Pn与主要影响因子光合有效辐射(PAR),Gs,Tr,大气温度(Ta)和WUE呈正相关,与空气相对湿度(RH),Ci和Ls呈负相关。结论建泽泻为气孔限制型阳生植物,Pn存在明显的"光合午休"现象,气孔导度、水分利用率、光合有效辐射和蒸腾速率是影响建泽泻叶片净光合速率的主要环境因子,本研究为提高药材质量和产量及指导建泽泻合理栽培提供了科学依据。

育苗条件与建泽泻白斑病发生的关系

目的 研究育苗条件与建泽泻白斑病发生的关系 ,为建泽泻规范化栽培提供科学依据。方法 试验选择 3种不同田块 ,结合种子和苗床的消毒 ,设置 9种处理 ,每处理 3次重复 ,随机区组排列 ,调查发病率并进行显著性检验。结果 新园地培育的建泽泻种苗 ,白斑病发病率较老园的低 ,存苗率也高 ;建泽泻种子的药剂处理和育苗床消毒能有效抑制白斑病的发生 ,提高存苗率。结论 新园地适宜建泽泻育苗 。

建泽泻与川泽泻饮片的对比研究

目的对建泽泻与川泽泻进行对比研究。方法传统方法测量泽泻饮片的直径、败片率、碎屑率;采用现代方法测定其水分、总灰分、浸出物;采用HPLC法检测23-乙酰泽泻醇B含量及特征指纹峰。结果通过外观性状及内在质量可以看出建泽泻与川泽泻区别明显。结论建议建泽泻与川泽泻应分别收录。

HPLC法检测建泽泻中23-乙酰泽泻醇B含量

也目的页建立中药材建泽泻中23-乙酰泽泻醇B的提取及检测体系。也方法页采用石油醚超声处理，辅助旋转蒸发提取23-乙酰泽泻醇B，利用高效液相色谱法检测；色谱柱：Waters C18柱（4.6 mm＆#215;250 mm，5μm）；柱温：室温；流动相：乙腈-水（80：20）；流速：0.8 mL/min，检测波长：208 nm。也结果页建泽泻中23-乙酰泽泻醇B在25~500μg/mL的线性关系良好；平均回收率为98.1%，RSD为3.10%。也结论页该方法简便、准确、重复性好，适用于微量建泽泻的检测。

建泽泻的道地性研究

建泽泻是福建的道地药材,具有悠久的生产历史。本文从建泽泻的本草史籍及地方志记载传统的种植和加工技术,质量标准和规格等级化学成分,以及产销情况等五个方面论述建泽泻的道地性及质量优良。

建泽泻与川泽泻转录组测序及泽泻三萜生物合成分析

目的利用高通量测序技术获得建泽泻与川泽泻的转录组特征信息,并进行泽泻三萜类成分合成生物信息学分析。方法通过Illumina HiSeqTM2500对建泽泻与川泽泻进行转录组测序,采用Trinity软件组装获得Unigene,与SwissProt、Pfam、SignalP、TMHMM、GO、COG和KEGG数据库比对,对Unigene进行功能注释和生物信息学分析,得到建泽泻与川泽泻转录组数据。结果测序组装后,Unigene与7个数据库比对,获得建泽泻、川泽泻分别注释53566条、49448条Unigene。其中,在GO数据库中注释泽泻生物过程、细胞组分和分子功能3大类,其包含30个亚类;在COG数据库中注释泽泻24个功能类别;KEGG注释结果表明泽泻三萜类化合物生物合成途径为乙酰辅酶A在羟甲基戊二酰辅酶A合酶、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、甲羟戊酸磷酸激酶、焦磷酸甲羟戊脱羧酶催化下反应生成焦磷酸法尼酯,其次焦磷酸法尼酯在法尼基焦磷酸合酶催化下生成前喹啉,再经角鲨烯合酶生成角鲨烯,最后在角鲨烯环氧酶催化下生成骨架类型为原萜烷型的泽泻三萜。利用MISA软件对建泽泻与川泽泻Unigene进行SSR分析,有6种SSR重复类型,其中A/T类型的比例最高。结论本研究利用高通量测序技术获得建泽泻与川泽泻的转录组数据并进行泽泻三萜生物合成等生物信息学分析,为后续开展泽泻功能基因的挖掘、次生代谢途径解析奠定数据基础。

焦磷酸测序鉴定建泽泻方法的建立

目的:建立一种基于内部转录间隔区2(ITS 2)序列突变位点鉴别建泽泻的焦磷酸测序方法。方法:分别提取建泽泻与川泽泻的须根、叶片、叶柄DNA,采用焦磷酸测序方法进行分析鉴定,并通过毛细管电泳测序验证方法的正确性。结果:建立了一种基于ITS 2序列焦磷酸测序鉴定方法,经毛细管电泳测序验证结果准确可靠。建泽泻ITS 2序列中的突变位点A-T的突变频率均不小于83%。结论:焦磷酸测序方法可以准确鉴定不同基源的泽泻物种。

杂交稻科优186与药材建泽泻轮作高产栽培技术

介绍了水稻—建泽泻轮作的优点,总结轮作栽培技术,包括茬口安排、水稻栽培技术(播种、移栽、肥水管理、病虫害防治)、建泽泻栽培技术(选地整地、播种育苗、苗床管理、苗移栽、施肥管理、病虫害防治),以供种植者参考。

建泽泻GAP栽培技术操作规程

为了发挥建瓯吉阳泽泻种植历史悠久、生态条件优越和栽培技术独特的优势,根据多年参与建泽泻规范化生产的实践,结合前人有关文献,从培育壮苗、移栽定植、田间管理、病虫害防治以及采收与产地加工等几个方面总结建泽泻GAP栽培技术规程的主要内容。通过实施建泽泻规范化栽培,建泽泻药材质量可实现安全、优质和稳定可控,制定的建泽泻规范化栽培技术规程可为建泽泻的规范化生产实践提供参考。

建泽泻法呢基焦磷酸合酶分子克隆、分布表达及生物信息学研究

三萜类化合物是道地药材建泽泻中的主要药效成分,在癌症治疗方面有很大的应用潜力。法呢基焦磷酸合酶(FPPS)为三萜类化合物合成途径中的重要限速酶之一,本文运用同源克隆和快速cDNA末端扩增(RACE)技术相结合的方法,克隆了建泽泻FPPS基因的全长cDNA(accession no.HQ724508),FPPS cDNA全长为1 531 bp,含有1个1 032 bp的开放阅读框,编码343个氨基酸的蛋白,包含5个保守的功能域,其中两个富含天冬氨酸(DDXXD)。实时荧光定量PCR(QRT-PCR)结果显示建泽泻FPPS基因在各器官中均有表达,10月至12月上旬相对表达量呈上升趋势,后下降,其中叶片表达量较高,块茎、根、叶柄表达量相对较低。高效液相(HPLC)分析结果表明不同生长期建泽泻主要药效成分23-乙酰泽泻醇B变化趋势与FPPS基因表达量变化一致,初步证明FPPS是泽泻醇类化合物合成途径中的重要调控位点。本研究为利用植物基因工程改善中药材品质提供科学依据。

建泽泻鲨烯合酶基因克隆及其生物信息学分析

目的对建泽泻原萜烷型三萜类成分生物合成关键酶鲨烯合酶(squalene synthase,SS)进行基因全长的克隆和生物信息学分析。方法以建泽泻总RNA为模板,运用同源克隆法和RACE技术克隆建泽泻SS基因的cDNA全长,并通过DNAMAN软件及ExPASy在线分析等方法对其进行生物信息学研究。结果获得建泽泻SS基因全长cDNA,GenBank注册号为JX866770,序列分析表明,所克隆的cDNA序列全长为1 577 bp,包含一个长1 230 bp的开放阅读框架,编码409个氨基酸的蛋白,与其他药用植物具有较高的同源性。预测该蛋白的相对分子质量为4.68×104,等电点为5.97,无信号肽,包含2个富含天冬氨酸(DXXDD)的保守功能域。结论首次克隆获得建泽泻SS基因的全长cDNA,为泽泻原萜烷型三萜类成分生物合成途径阐明与生物工程应用提供科学依据。

建泽泻鲨烯合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究

泽泻鲨烯合酶(Ao SS)催化法呢基焦磷酸[(farnesyl diphosphate,FPP)]合成鲨烯,是碳源流向原萜烷型三萜生物合成的关键调节酶。为深入研究Ao SS基因的功能及表达,课题组将前期克隆获得的建泽泻鲨烯合酶基因(accession No.JX866770)的开放阅读框(ORF)构建到原核表达载体p Czn1上,并在大肠杆菌BL21(Roseta)中进行诱导表达,诱导表达出的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经纯化获得高纯度的目的蛋白;以此目的蛋白进行体外酶促反应验证其功能,其结果显示该目的蛋白具有催化法呢基焦磷酸生成鲨烯的活性;为进一步研究其表达规律,在此基础上,利用该蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体并纯化,ELISA检测抗体效价大于1∶51 200,Western blotting检测表明其具有较好的特异性;用制备得到的抗体免疫检测建泽泻Ao SS在不同组织中的表达情况,结果显示建泽泻块茎中Ao SS表达最高,其次为叶,根中表达甚微。原核表达载体的成功构建、基因功能的进一步验证及快速免疫检测方法的建立,为进一步开展Ao SS基因功能及其调控的研究奠定基础,为泽泻资源性成分原萜烷型三萜的合成生物学应用提供科学依据。