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荧光定量PCR检测TTV方法学建立及临床应用
被引量:
2
1
作者
杨建荣
陈晓东
陶志华
《华中医学杂志》
2004年第1期17-18,28,共3页
目的 建立一种灵敏度高、特异性好、操作简便的荧光实时定量PCR技术。方法 设计针对TT型肝炎病毒(TTV)基因保守序列非转录区的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段克隆 ,作为定量检测的标准品。对 36例丙肝患...
目的 建立一种灵敏度高、特异性好、操作简便的荧光实时定量PCR技术。方法 设计针对TT型肝炎病毒(TTV)基因保守序列非转录区的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段克隆 ,作为定量检测的标准品。对 36例丙肝患者及 12 3例不同血清标志物阳性的乙肝患者、16 6例健康体检者血清中TTVDNA定量检测 ,评估TTVDNA在不同人群中检出阳性率的差异显著性。结果 该方法检测TTVDNA的灵敏度高于普通套式PCR ELISA方法 ,线性范围为 10 2~ 7拷贝 /ml;批间CV为 13.2 %~ 16 .0 % ,批内CV为 6 .5 %~ 11.3%。健康体检者、丙肝患者、乙肝患者三组人群阳性检出率无显著性差异 ;且乙肝患者 (TTVDNA +)血清ALT水平与TTVDNA载量无显著相关性 (P >0 .0 5 ) ;乙肝患者血清ALT异常与正常两组TTVDNA阳性检出率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 该方法操作简单、灵敏度高、特异性好、结果数据化 ,适合于临床实验室进行临床标本的TTVDNA定量检测。
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关键词
TT型肝炎病毒
荧光实时定量聚合酶链反应
DNA诊断
开放读码框2
非转录区
下载PDF
职称材料
稳定表达绿色荧光蛋白标记的人单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体ORF2融合蛋白的Vero细胞株的建立
被引量:
1
2
作者
杨慧兰
白利利
+1 位作者
樊建勇
王颖
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010年第6期566-568,共3页
目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)融合蛋白的Vero细胞株。方法构建重组真核表达质粒pEGFP-ORF2,经酶切及测序鉴定正确后,体外转染Vero细胞,经G418筛选稳定表达...
目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)融合蛋白的Vero细胞株。方法构建重组真核表达质粒pEGFP-ORF2,经酶切及测序鉴定正确后,体外转染Vero细胞,经G418筛选稳定表达融合蛋白的克隆,扩大培养后,荧光显微镜观察EGFP的表达,RT-PCR检测目的基因的转录。结果重组真核表达质粒pEGFP-ORF2经酶切及测序鉴定构建正确,经G418培养20d筛选出的Vero细胞株荧光显微镜下可见融合蛋白表达,RT-PCR检测显示,转染了重组表达质粒的Vero细胞内有目的基因的表达。结论已成功建立了稳定表达EGFP-ORF2的Vero细胞株,为进一步研究HSV-2LATORF2的功能奠定了基础。
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关键词
疱疹病毒
2
型
人
潜伏相关转录体
开放读码框2
绿色荧光蛋白质类
VERO细胞
原文传递
题名
荧光定量PCR检测TTV方法学建立及临床应用
被引量:
2
1
作者
杨建荣
陈晓东
陶志华
机构
温州医学院附属第一医院检验科
出处
《华中医学杂志》
2004年第1期17-18,28,共3页
文摘
目的 建立一种灵敏度高、特异性好、操作简便的荧光实时定量PCR技术。方法 设计针对TT型肝炎病毒(TTV)基因保守序列非转录区的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段克隆 ,作为定量检测的标准品。对 36例丙肝患者及 12 3例不同血清标志物阳性的乙肝患者、16 6例健康体检者血清中TTVDNA定量检测 ,评估TTVDNA在不同人群中检出阳性率的差异显著性。结果 该方法检测TTVDNA的灵敏度高于普通套式PCR ELISA方法 ,线性范围为 10 2~ 7拷贝 /ml;批间CV为 13.2 %~ 16 .0 % ,批内CV为 6 .5 %~ 11.3%。健康体检者、丙肝患者、乙肝患者三组人群阳性检出率无显著性差异 ;且乙肝患者 (TTVDNA +)血清ALT水平与TTVDNA载量无显著相关性 (P >0 .0 5 ) ;乙肝患者血清ALT异常与正常两组TTVDNA阳性检出率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 该方法操作简单、灵敏度高、特异性好、结果数据化 ,适合于临床实验室进行临床标本的TTVDNA定量检测。
关键词
TT型肝炎病毒
荧光实时定量聚合酶链反应
DNA诊断
开放读码框2
非转录区
Keywords
Transfusion-transmissible virus PCR Hepatitis virus
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
下载PDF
职称材料
题名
稳定表达绿色荧光蛋白标记的人单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体ORF2融合蛋白的Vero细胞株的建立
被引量:
1
2
作者
杨慧兰
白利利
樊建勇
王颖
机构
广州军区广州总医院皮肤科
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010年第6期566-568,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30972666)
全军医药卫生科研基金资助项目(06J008)
文摘
目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)融合蛋白的Vero细胞株。方法构建重组真核表达质粒pEGFP-ORF2,经酶切及测序鉴定正确后,体外转染Vero细胞,经G418筛选稳定表达融合蛋白的克隆,扩大培养后,荧光显微镜观察EGFP的表达,RT-PCR检测目的基因的转录。结果重组真核表达质粒pEGFP-ORF2经酶切及测序鉴定构建正确,经G418培养20d筛选出的Vero细胞株荧光显微镜下可见融合蛋白表达,RT-PCR检测显示,转染了重组表达质粒的Vero细胞内有目的基因的表达。结论已成功建立了稳定表达EGFP-ORF2的Vero细胞株,为进一步研究HSV-2LATORF2的功能奠定了基础。
关键词
疱疹病毒
2
型
人
潜伏相关转录体
开放读码框2
绿色荧光蛋白质类
VERO细胞
Keywords
Herpes virus type
2
human
Latency associated transcript(LAT)
Open reading frame
2
(ORF
2
)
Green fluorescent proteins
Vero cells
分类号
R373.11 [医药卫生—病原生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
荧光定量PCR检测TTV方法学建立及临床应用
杨建荣
陈晓东
陶志华
《华中医学杂志》
2004
2
下载PDF
职称材料
2
稳定表达绿色荧光蛋白标记的人单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体ORF2融合蛋白的Vero细胞株的建立
杨慧兰
白利利
樊建勇
王颖
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010
1
原文传递
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
统计分析
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