“心痛三两三”方对异丙肾上腺素引起的斑马鱼心肌缺血的作用

目的:研究“心痛三两三”方对异丙肾上腺素引起的斑马鱼心肌缺血的作用。方法:用“心痛三两三”方9.4、18.75、37.5、75、150和300μL/mL浓度干预受精后2~3 d野生型AB品系斑马鱼,根据斑马鱼的毒性表型和死亡情况确定“心痛三两三”方的最大耐受浓度,从而筛选出本研究的给药剂量。实验设“心痛三两三”方高、中、低剂量组,浓度分别为75.0、25,0、8.3μL/mL,阳性对照丹参滴丸组浓度为500μg/mL,正常对照组和模型对照组,每组30尾置于六孔板中,各组均置于28℃培养箱中培养4 h后,用50 mg/mL盐酸异丙肾上腺素诱导60 min建立斑马鱼心肌缺血模型。共同处理结束后,用吖啶橙法染色分析斑马鱼心脏部位凋亡细胞荧光强度;心跳血流分析软件录制斑马鱼血流视频,分析斑马鱼心输出量和血流速度。结果:与模型对照组比较,“心痛三两三”方中、高剂量组斑马鱼心脏部位凋亡细胞荧光强度显著降低(P<0.05,P<0.01),其凋亡改善率分别为34%和54%。“心痛三两三”方低、中、高剂量组斑马鱼心输出量和血流速度明显提高(P<0.01),其改善率分别为52%、93%、62%和29%、53%、32%。结论:“心痛三两三”方对异丙肾上腺素诱导的斑马鱼心肌缺血具有明显改善作用,与改善心肌细胞凋亡有关。

异丙肾上腺素诱导慢性心衰模型不同方案的比较

目的比较3种不同方案制备的动物模型,探索稳定、可靠且重复性好的小鼠慢性心力衰竭模型。方法将25只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:正常组(ZC组)、实验A组(MA组)、B组(MB组)和C组(MC组)。实验组采取不同制备方案连续注射ISO,其中MA组和MB组为浓度递减造模法,MA组(第1天10 mg/kg、第2天5 mg/kg、第3~30天2.5 mg/(kg·d);皮下注射30 d);MB组(第1天20 mg/kg、第2天10 mg/kg、第3~14天5 mg/(kg·d);皮下注射14 d);MC组(浓度恒定7.5 mg/(kg·d),腹腔注射28 d),构建慢性心衰动物模型。在注射结束后的第2天,计算各组小鼠存活率和成模率情况。通过心脏超声检测心功能,并用ELISA测定血清中NT-pro BNP、IL-6、TNF-α水平。结果在第30天注射结束后,各实验组虽都能有效诱导慢性心力衰竭,但发现7.5 mg/kg浓度MC组的造模情况最稳定,更适合后续开展中医药相关的心衰研究。结论ISO制备小鼠慢性心衰模型以恒定7.5 mg/(kg·d),连续腹腔注射28 d为最佳方案。

肢体导联与胸导联心电图对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌梗死的诊断价值

目的 分析注射异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)法建立的大鼠心肌梗死模型各导联的心电图表现,探讨适用于该模型的判断心肌梗死是否形成的观测导联。方法 给20只大鼠皮下注射ISO,间隔24 h后再次给药,每24 h内各记录一次肢体、胸导联心电图,测量除aVR导联以外的各导联J点的偏移值,并与各自导联用药前及用药后比较。48 h后处死大鼠,并取心脏做病理检查。结果 第2天用药前V_(2)导联J点抬高较Ⅱ、Ⅲ、aVF导联明显(P<0.01),Ⅱ、Ⅲ、aVF导联两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ISO法建立大鼠心肌梗死模型的梗死区域较分散,多个导联可出现J点抬高,其中以V_(2)导联最为明显。实验中可选择上述导联之一予以观测,亦可采用肢体、胸导联同步监测。

刺梨果多糖对异丙肾上腺素诱导的心肌缺血小鼠保护作用及机制

目的:探究刺梨果(Rosa roxburghii Tratt)多糖对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌缺血(myocardial ischemia,MI)小鼠保护作用及作用机制。方法:将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:对照组,模型组,普萘洛尔(30 mg/kg)组,刺梨果多糖低、高剂量(50、100 mg/kg)组,每组8只。各给药组小鼠连续灌胃(ig)给药14 d,从第8天开始,ig给药1 h后,除对照组腹腔注射(ip)相同剂量的生理盐水外,其余各组小鼠ip ISO(10 mL/kg),连续7 d,构建MI小鼠模型。末次给药1 h后检测小鼠心电图变化,麻醉后取心脏,计算心脏指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌组织病理变化;采用2%2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色液(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色检测心肌梗死面积;采用生化试剂盒检测小鼠血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用免疫印迹法(Western blot)检测心脏组织中NADPH氧化酶2(NADPH oxidase2,NOX2)、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma2,Bcl2)、Bcl2相关X(Bcl2-associatedX,Bax)、半胱天冬酶3(Caspase 3)、中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-related protein 1,Keap1)、血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白的表达情况。结果:与对照组小鼠比较,模型组小鼠心脏肿大,心电图ST段发生明显升高,HE染色可观察到心脏组织出现明显的炎症浸润和细胞间隙,TTC染色结果发现明显的心肌组织梗死。进一步实验发现模型组小鼠血清MDA含量和LDH活性显著升高(P<0.001),自由基清除酶SOD活性降低(P<0.05),Western blot结果显示,Nrf2、HO-1和Bcl2显著下调(P<0.05,P<0.01),Keap1、NOX2、Bax和Caspase 3显著上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组小鼠比较,刺梨果多糖组小鼠心肌损伤都有不同程度的恢复,心电图ST段降低,小鼠心脏组织病理损伤减少,血清MDA含量和LDH活性显著降低(P<0.001),SOD活性显著升高(P<0.01,P<0.001),心脏组织蛋白Nrf2、HO-1和Bcl2表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Keap1、NOX2、Bax和Caspase 3表达显著下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论:刺梨果多糖能通过调节Keap1-Nrf2信号通路,抑制氧化应激损伤,继而调控Caspase 3、Bax、Bcl2蛋白,减少心肌细胞凋亡发生,从而对ISO诱导的MI小鼠起到保护作用。

基于β1-AR/TGF-β1/Smad2通路探讨稳心颗粒对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨稳心颗粒通过β1-AR/TGF-β1/Smad2通路对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导大鼠心肌纤维化的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、ISO组与稳心颗粒低、中、高剂量组以及胺碘酮组,每组10只,连续给药14天。第15天起,ISO组、各药物组大鼠以ISO 5 mg/(kg•d)皮下多点注射构建大鼠心肌纤维化模型。检测大鼠心脏质量指数的变化;采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌形态学变化,Masson染色观察心肌胶原分布和含量变化;检测心肌组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测大鼠心肌组织交感神经系统-β1肾上腺素能受体(β1 adrenoceptor,β1-AR)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、p-Smad2蛋白表达变化。结果ISO组大鼠心脏质量指数明显升,细胞结构紊乱,胶原沉积和心肌纤维化明显,心肌HYP含量显著增多,GSH含量减少,β1-AR、TGF-β1与p-Smad2表达水平显著升高(P<0.01);与ISO组相比,各治疗组心脏质量指数降低,细胞结构损伤与胶原沉积减轻,心肌纤维化改善,HYP含量降低,GSH含量增多,β1-AR、TGF-β1与p-Smad2表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。稳心颗粒高剂量组效果较稳心颗粒低剂量组更为明显(P<0.05),与胺碘酮组相比无明显差异(P>0.05)。结论稳心颗粒能够改善ISO引起的心肌纤维化,减轻心肌细胞损伤与胶原纤维堆积,其机制可能与β1-AR/TGF-β1/Smad2通路有关。

不同剂量异丙肾上腺素对家兔动脉血压及心脏损伤的影响探讨

目的:探讨与分析不同剂量异丙肾上腺素对家兔动脉血压及心脏损伤的影响。方法:研究时间为2022年4月—2023年2月,健康成年雄性家兔18只随机平分为低剂量异丙肾上腺素组、高剂量异丙肾上腺素组与对照组,每组6只。低剂量异丙肾上腺素组、高剂量异丙肾上腺素组家兔每日背部皮下注射0.1ml/kg与0.4ml/kg的异丙肾上腺素100μl,1次/d;对照组在同样位置注射无菌生理盐水100μl,1次/d,持续应用14d,检测家兔中心动脉压变化情况。结果:低剂量、高剂量异丙肾上腺素组处理第7天、第14天的平均动脉压、血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量都高于对照组(P<0.05),高剂量异丙肾上腺素组也高于低剂量异丙肾上腺素组(P<0.05)。低剂量、高剂量异丙肾上腺素组处理第7天、第14天的维持窦性节律时间均短于对照组(P<0.05),且高剂量异丙肾上腺素组短于低剂量异丙肾上腺素组(P<0.05)。低剂量、高剂量异丙肾上腺素组处理第14天的心脏组织Caspase-3、Bcl-2蛋白相对表达水平高于对照组(P<0.05),且高剂量异丙肾上腺素组高于低剂量异丙肾上腺素组(P<0.05)。结论:高低剂量的异丙肾上腺素均可降低家兔维持窦性节律时间,提高血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量,促进其心脏组织Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达,且存在量效关系,这为异丙肾上腺素诱导家兔心肌损伤模型的构建提供机制及理论依据指导。

基于异丙肾上腺素致心肌细胞损伤探讨红参治疗心衰的药效物质基础研究

目的探讨红参中药及其组分对异丙肾上腺素(ISO)致H9c2大鼠细胞损伤的保护作用。方法将H9c2细胞随机分为6组:对照组、模型组、红参多糖组、红参寡糖组、红参总皂苷组和红参小极性组。对照组细胞正常培养不做任何处理;模型组调整培养基再进行ISO处理;各给药组用不同浓度含药培养液预处理后,再进行ISO给药处理。采用CCK-8法检测各组细胞存活率,在此基础上进行SPSS分析,评价不同组分对ISO致H9c2细胞损伤的保护作用。结果选取含ISO浓度为0.25μmol/L的无血清DMEM培养液,作为ISO致心肌细胞H9c2损伤模型的造模条件。红参的生药浓度在0.01~5mg/mL时对H9c2细胞无明显毒性,且当红参在1 mg/mL时保护作用最强,细胞存活率为61.555%,具有统计学意义(P<0.05)。红参各组分实验结果表明,多糖组和寡糖组保护作用较弱,而皂苷组和小极性组的作用较强,同时皂苷组的活性要大于小极性组。结论红参对ISO致H9c2细胞损伤具有较强的保护作用,红参皂苷为其主要的药效物质基础。

骨髓间充质干细胞来源外泌体对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体(Exo)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心肌纤维化的影响,并初步阐明其作用机制。方法:从BMSCs中分离提取Exo,采用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析仪和Western blotting法对Exo进行分析鉴定。将40只SD大鼠分为对照组、模型组、BMSCs-Exo组和BMSCs-Exo+铁死亡激活剂(Erastin)组,每组10只。除对照组外,其余3组大鼠均皮下注射ISO建立心肌纤维化模型,BMSCs-Exo组和BMSCs-Exo+Erastin组大鼠尾静脉注射BMSCs-Exo,且BMSCs-Exo+Erastin组大鼠再腹腔注射Erastin。4周后,超声心动图检测各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室舒张末期内径(LVEDD)和左心室收缩末期内径(LVESD), HE染色观察各组大鼠心肌组织病理形态表现,Masson染色观察各组大鼠心肌组织纤维化程度,免疫组织化学染色检测各组大鼠心肌组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)阳性表达率,比色法测定各组大鼠心肌组织中铁离子(Fe^(2+))水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中酰基辅酶A合成酶长链家族成员4 (ACSL4)、铁蛋白重链1 (FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)和溶质载体家族7成员11 (SLC7A11)蛋白表达水平。结果:从BMSCs中分离的颗粒物具有典型的脂质双分子层,粒径大多分布在波长100 nm处,CD63、CD9、肿瘤易感基因101 (TSG101)和热休克蛋白70 (HSP70)蛋白均高表达,由此判定为Exo。与对照组比较,模型组大鼠LVEF和LVFS明显降低(P<0.05),LVEDD和LVESD明显升高(P<0.05),心肌细胞排列紊乱,部分细胞核皱缩和坏死,胶原容积分数(CVF)明显升高(P<0.05),α-SMA、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ阳性表达率明显升高(P<0.05),心肌组织中Fe^(2+)水平明显升高(P<0.05),ACSL4蛋白表达水平明显升高(P<0.05),FTH1、GPX4和SLC7A11蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,BMSCs-Exo组大鼠LVEF和LVFS明显升高(P<0.05),LVEDD和LVESD明显降低(P<0.05),心肌组织损伤明显减轻,CVF明显降低(P<0.05),α-SMA、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ阳性表达率明显降低(P<0.05),心肌组织中Fe^(2+)水平明显降低(P<0.05),ACSL4蛋白表达水平明显降低(P<0.05),FTH1、GPX4和SLC7A11蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与BMSCs-Exo组比较,BMSCs-Exo+Erastin组大鼠LVEF和LVFS明显降低(P<0.05)、LVEDD和LVESD明显升高(P<0.05),心肌细胞出现水肿和坏死,CVF明显升高(P<0.05),α-SMA、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ阳性表达率明显升高(P<0.05),心肌组织中Fe^(2+)水平明显升高(P<0.05),ACSL4蛋白表达水平明显升高(P<0.05),FTH1、GPX4和SLC7A11蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:BMSCs来源Exo能够改善ISO诱导的大鼠心肌纤维化,该机制可能与抑制铁死亡有关。

大黄素甲醚对异丙肾上腺素诱导心肌损伤的保护作用

目的 探讨大黄素甲醚对异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)致心肌损伤的保护作用及相关机制。方法 通过皮下注射给予ISO,诱导大鼠心肌损伤模型,检测心脏质量指数,酶标仪检测大鼠血清中肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB, CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平,超声心动仪评估心功能。在体外培养的H9c2细胞中,用ISO构建心肌细胞损伤模型,MTT法检测细胞存活率,ELISA法检测细胞培养液中LDH水平,蛋白印迹法检测心肌细胞中相关蛋白表达。结果 在ISO诱导的心肌损伤大鼠模型中,心脏质量指数增加,血清CK-MB和LDH水平升高,心功能指标即射血分数(ejection fraction, EF)和缩短分数(fractional shortening, FS)降低,而分别用大黄素甲醚和普萘洛尔干预,均减弱上述指标变化。在ISO诱导的H9c2细胞损伤模型中,大黄素甲醚对ISO致细胞存活率下降、LDH水平升高、TLR4/MyD88/NF-κB和TNF-α蛋白表达水平增加均有显著的抑制作用。结论 大黄素甲醚对ISO致心肌损伤具有保护作用,其机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

全反式维甲酸减轻内质网应激反应改善异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化与心肌重构

目的全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导下大鼠心肌纤维化和心肌重构的影响及作用机制。方法将大鼠按随机数表法分为4组:对照组、ISO组、ATRA+ISO组、4-PBA(4-苯基丁酸,4-phenylbutyric acid)+ISO组,每组10只;ATRA+ISO组和4-PBA+ISO组预先分别通过腹腔注射ATRA与4-PBA,然后再通过背部皮下注射ISO进行诱导。心脏超声检测各组大鼠左心室舒张末期内径(left ventricular internal diameter in diastole,LVIDd)、左心室收缩末期内径(left ventricular internal diameter in systole,LVIDs)、左心室的射血分数(ejection fraction,EF)及短轴缩短率(fractional shortening,FS),称量各组大鼠体重、全心质量及左心室质量,计算全心质量指数(heart mass index,HMI)与左心室质量指数(left ventricle mass index,LVMI)。ELISA测定各组大鼠血清N端B型利钠肽原(N terminal pro B type natriuretic peptide,NT-proBNP)含量。HE染色和Masson染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化与胶原纤维化程度。蛋白质印迹检测心肌组织中G蛋白偶联受体78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homology protein,CHOP)、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、磷酸化真核翻译起始因子2α(phosphorylated eukaryotic translation initiation factor 2α,p-eIF2α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、胶原蛋白Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ的蛋白表达。结果与对照组比较,ISO组大鼠EF和FS显著降低(P<0.05),LVIDd、LVIDs、HMI及LVMI显著升高(P<0.05),血清NTproBNP含量显著增加(P<0.05),心肌组织病理损伤明显,胶原纤维面积显著增加(P<0.05),心肌组织中GRP78、CHOP、PERK、p-eIF2α、TGF-β1、α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ蛋白表达均显著上调(P<0.05);与ISO组比较,ATRA+ISO组和4-PBA+ISO组的大鼠EF和FS显著升高(P<0.05),LVIDd、LVIDs、HMI及LVMI显著降低(P<0.05),血清NT-proBNP含量显著减少(P<0.05),心肌组织损伤程度明显减轻,胶原纤维面积显著减小(P<0.05),心肌组织中GRP78、CHOP、PERK、p-eIF2α、TGF-β1、α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论ATRA能够减轻ISO诱导的大鼠心肌损伤及其纤维化,抑制心肌重构,改善心功能,该作用与其抑制内质网应激反应有关。

基于“以方测证”理论探讨异丙肾上腺素诱导慢性心力衰竭大鼠模型的制备及中医证型

目的 构建异丙肾上腺素(isoprenaline, ISO)诱导的慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)大鼠模型,运用以方测证法反推其中医证型。方法 采用随机数字表法将SD大鼠分为正常组及ISO低、中、高剂量组。制备CHF大鼠模型,将成模大鼠按随机数字表法分为6组:模型组、参附组、丹红组、参麦组、黄芪组、普萘组。分别于造模结束后、给药15 d后,检测各组大鼠心脏质量指数及左心室质量指数;超声心电图检测各组大鼠心功能;ELISA法检测大鼠氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro brain natriuretic peptide, NT-pro BNP);HE及Masson染色方法观察大鼠心脏组织病理形态以及纤维化状态改变。结果 不同剂量ISO诱导CHF大鼠模型的制备:与正常组比较,ISO低剂量组各方面均无明显改变;ISO中、高剂量组大鼠左室射血分数(left ventricular fraction shortening, LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening, LVFS)、体质量降低(P<0.01),左心室舒张末期内径(left ventricular internal dimension diamete, LVIDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular internal systolic dimension, LVISD)、NT-pro BNP、心脏质量指数、左心室质量指数明显升高(P<0.01),但ISO高剂量组死亡率低、炎性细胞浸润及纤维化程度更高。基于“以方测证”理论探讨ISO诱导CHF大鼠中医证型:与模型组比较,参附组LVEF、LVFS、体质量升高,LVIDD、LVISD、NT-pro BNP、心脏质量指数及左心室质量指数降低(P<0.05,或P<0.01);纤维结缔组织增生和炎性细胞浸润明显减少,胶原纤维沉积减轻,仅见少量胶原纤维。其余组各项指标均有改善,但无统计学意义(P>0.05)。结论 ISO中、高剂量均能制备CHF大鼠模型,但ISO高剂量更优。ISO诱导CHF大鼠模型可能属于心阳虚证。

异丙肾上腺素诱导慢性心衰模型的方法优化

目的目前对于慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)发病机制的研究和治疗手段均具有局限性,为了更好地研究其发病机理,本文对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导慢性心力衰竭大鼠模型的制备方法进行了优化研究。方法将SD雄性大鼠分为4组,模型A组大鼠连续以5 mg/(kg·d)注射ISO 10 d;模型B组大鼠前3 d注射ISO 2.5 mg/(kg·d),后9 d注射5 mg/(kg·d);模型C组大鼠第1天被给予15 mg/kg的戊巴比妥钠,注射ISO 1.25 mg/kg,第2、3天以2.5 mg/(kg·d)注射,后9 d以5 mg/(kg·d)注射,从第2天开始每天分2次注射间隔30 min。对照组给予等量生理盐水。通过超声心动图、病理学检测和荧光定量PCR等方法来验证模型的建立。结果模型A、B和C组的死亡率分别为80%、60%和40%。与对照组相比,模型C组大鼠的左心室短轴缩短率和射血分数显著降低(P<0.001);心肌细胞排列紊乱,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著增加(P<0.05);COL1A1、COL3A1、FN1和ACTA2 mRNA表达水平显著上调(P<0.05);血清氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-B type natriuretic peptide,NT-pro BNP)与甘油三脂的水平显著升高(P<0.05)。结论注射麻醉剂使大鼠处于半清醒状态,梯度增加每日注射剂量和减少单次注射量均可降低死亡率,为建立CHF大鼠模型提供新思路与新方式。

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌损伤的影响及作用机制

目的研究中药黄芪提取物黄芪甲苷对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌损伤的保护作用及机制。方法选取2021年4月至6月由辽宁长生生物技术股份有限公司提供的32例雄性SD大鼠作为研究对象,采用随机数字表法将其分为对照组(8例)、模型组(8例)、黄芪甲苷低剂量组(8例)、黄芪甲苷高剂量组(8例)。对照组皮下给予等量的生理盐水,采用普通饲料饲养;模型组采用ISO 50 mg/(kg·d)皮下多点注射1次/d,共2 d,建立大鼠心肌损伤模型,普通饲料饲养;黄芪甲苷低剂量组采用ISO 50 mg/(kg·d)皮下多点注射1次/d,共2 d,建立大鼠心肌损伤模型,成模后,采用黄芪甲苷药液20 mg/(kg·d)腹腔注射,普通饲料饲养;黄芪甲苷高剂量组采用ISO 50 mg/(kg·d)皮下多点注射1次/d,共2 d,建立大鼠心肌损伤模型,成模后,采用黄芪甲苷药液40 mg/(kg·d)腹腔注射,普通饲料饲养。比较四组给药28 d后超声心动图结果、HE染色心肌病理改变、心肌组织中丙二醛(MDA)的含量及血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin 1)、抗体微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)及泛素结合蛋白(P62)的表达水平。结果左心室射血分数(EF%)染色和电镜结果显示,模型组心肌损伤严重,心肌组织中MDA、血清中LDH、P62蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Beclin1和LC3Ⅱ蛋白表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪甲苷低剂量和高剂量组的MDA、LDH低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);黄芪甲苷低剂量和高剂量组的EF%、黄芪甲苷低剂量组的短轴缩短率(FS%)高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);黄芪甲苷高剂量组的FS%与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。黄芪甲苷低剂量组和高剂量组可以减轻心肌损伤大鼠的病理组织学改变。黄芪甲苷低剂量组和高剂量组的Beclin 1和LC3Ⅱ蛋白表达量高于模型组,P62蛋白表达量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪甲苷可通过促进细胞自噬减轻异丙肾上腺素诱导的心肌损伤。

高良姜素减轻异丙肾上腺素诱导心脏纤维化的作用机制

目的:探讨高良姜素(Galangin)对异丙肾上腺素(ISO)诱导心脏纤维化的作用机制。方法:将30只C57BL/6小鼠随机分为正常组、ISO组、高良姜素低剂量组[25 mg/(kg·d)]、高良姜素中剂量组[50 mg/(kg·d)]、高良姜素高剂量组[100 mg/(kg·d)]。处理结束后行心脏超声评估心功能[左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)];测量小鼠体质量(BW)、心脏重量(HW)、胫骨长度(TL),计算心脏重量与体质量比值(HW/BW)、心脏重量与胫骨长度比值(HW/TL),评估心肌肥厚情况。天狼星红染色评价心脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测炎症标志物白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和纤维化标志物胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA水平;试剂盒检测心脏组织氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与正常组比较,ISO组小鼠HW/BW、HW/TL、LVEDD及LVESD升高,LVEF和LVFS降低,IL-6、IL-1β、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ和TGF-β1mRNA表达水平升高,心脏SOD和CAT活性降低,MDA含量升高,心肌细胞横截面积增大,心脏纤维化面积增加(P<0.05)。与ISO组比较,高良姜素高剂量组心脏纤维化面积减小,CollagenⅠ、CollagenⅢ、IL-6 mRNA表达水平降低,SOD活性升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。高良姜素中剂量组TGF-β1低于ISO组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高良姜素可减轻ISO诱导的心脏纤维化,其机制可能与抑制炎症、氧化应激有关。

不同给药方式建立异丙肾上腺素诱导小鼠心肌纤维化模型的评价

目的评价2种不同的给药方式建立异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导小鼠心肌纤维化模型的效果。方法选取60只8~10周龄的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组A和模型组B,每组各20只。对照组小鼠给予腹腔注射0.9%氯化钠溶液,模型组A小鼠腹腔注射ISO[5mg/(kg·d)],模型组B小鼠皮下多点注射ISO[5mg/(kg·d)],每天1次,连续给药21天。在末次给药24h后采用小动物超声仪检测小鼠心功能,计算左心室重量(left ventricular mass,LV mass)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS),并计算不同时间点的小鼠死亡率;小鼠安乐死后取材计算心脏重量与体质量比率(HW/BW)、心脏重量与胫骨长度比率(HW/TL)和肺脏重量与体质量比率(LW/BW);通过Masson染色观察心肌纤维化的程度;Western blot法检测小鼠心脏组织胶原蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组A和模型组B小鼠均出现心脏重量增加,心室腔变大,心功能下降,心肌纤维增生,心肌胶原蛋白表达增加,表明心肌纤维化模型构建成功。与模型组B比较,模型组A小鼠的生存率、EF和FS值较低(P<0.05),LW/BW值较高(P<0.05),表明模型组A小鼠出现心力衰竭。心肌胶原蛋白定量和Masson染色结果表明,模型组A和模型组B小鼠纤维化相关指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论腹腔注射和皮下多点注射ISO均可成功建立小鼠心肌纤维化模型,但皮下多点注射方法构建小鼠心肌纤维化模型的效果更好。

丁香酚对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌梗死保护作用

目的探讨丁香酚对异丙肾上腺素(ISO)诱导的急性心肌梗死(AMI)模型大鼠的保护作用及其机制。方法40只Wistar大鼠按随机数字表法分成对照组、模型组和丁香酚低、中、高剂量组,每组8只。连续2 d注射ISO建立AMI模型大鼠,不同剂量(1、10和100 mg/kg)丁香酚处理后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色计算大鼠心脏梗死面积,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡水平,Western blot分析iNOS和Cleaved Caspase 3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠CK[(0.93±0.06)U/mL比(0.22±0.04)U/mL,P<0.01]、CK-MB[(210.06±11.96)IU/L比(81.61±3.36)IU/L,P<0.01]、LDH[(5870.87±681.37)U/L比(1699.72±250.51)U/L,P<0.01]、cTnT[(0.63±0.09)U/mL比(0.07±0.03)U/mL,P<0.01]、iNOS蛋白表达[(1.15±0.02)比(0.42±0.03),P<0.01]、TNF-α[(318.61±28.27)pg/mg比(86.68±6.24)pg/mg,P<0.01]、IL-6[(5.33±0.98)pg/mg比(1.76±0.30)pg/mg,P<0.01]、MDA[(7.38±0.54)nmol/mg比(2.14±0.43)nmol/mg,P<0.01]和Cleaved Caspase 3蛋白表达[(1.13±0.07)比(0.64±0.03),P<0.01]升高,SOD含量[(82.46±14.77)U/mg比(188.19±19.34)U/mg,P<0.01]下降,梗死面积[(45.95±3.35)%比(0.00±0.00)%,P<0.01]和心肌细胞凋亡[(41.74±5.02)%比(9.05±0.71)%,P<0.01]增加。中、高剂量丁香酚给药后,AMI大鼠CK[(0.64±0.02)U/mL、(0.45±0.06)U/mL比(0.93±0.06)U/mL,P<0.01]、CK-MB[(144.11±8.28)IU/L、(121.10±7.88)IU/L比(210.06±11.96)IU/L,P<0.01]、LDH[(4076.81±465.13)U/L、(3438.28±361.19)U/L比(5870.87±681.37)U/L,P<0.01]、cTnT[(0.40±0.03)U/mL、(0.26±0.04)U/mL比(0.63±0.09)U/mL,P<0.01]、iNOS蛋白表达[(0.62±0.03)、(0.41±0.07)比(1.15±0.02),P<0.01]、TNF-α[(252.79±26.56)pg/mg、(222.29±18.40)pg/mg比(318.61±28.27)pg/mg,P<0.01]、IL-6[(3.33±0.47)pg/mg、(2.91±0.52)pg/mg比(5.33±0.98)pg/mg,P<0.01]、MDA[(4.47±0.45)nmol/mg、(3.97±0.49)nmol/mg比(7.38±0.54)nmol/mg,P<0.01]和Cleaved Caspase 3蛋白表达[(0.73±0.07)、(0.65±0.09)比(1.13±0.07),P<0.05]显著降低,SOD含量[(138.62±13.76)U/mg、(159.67±15.32)U/mg比(82.46±14.77)U/mg,P<0.01]显著升高。同时,中、高剂量丁香酚可有效减少AMI大鼠的梗死面积[(26.23±4.02)%、(15.49±3.13)%比(45.95±3.35)%,P<0.01],抑制心肌细胞凋亡[(23.34±2.73)%、(18.44±2.03)%比(41.74±5.02)%,P<0.01]。结论丁香酚能够改善ISO诱导的大鼠AMI,其机制可能与调节iNOS、炎症和氧化应激有关。

红芪多糖通过调控PI3K/Akt信号通路对异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚的改善作用

目的研究红芪多糖对异丙肾上腺素(ISO)诱导小鼠心肌肥厚及PI3K/Akt信号通路的影响。方法50只小鼠随机分为空白组、模型组、普萘洛尔组(40 mg/kg)和红芪多糖低、高剂量组(60、120 mg/kg),每组10只,灌胃给予相应剂量药物15 d,给药1 d后皮下注射ISO 14 d进行造模。给药结束后24 h,计算小鼠心脏指数,Masson染色观察心肌组织形态变化,ELISA法检测心肌组织FFA、ATP、AMP水平,RT-qPCR法检测心肌组织ANP、BNP mRNA表达,Western blot法检测心肌组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠心脏指数升高(P<0.05,P<0.01),心肌细胞肥大、胶原纤维增生,FFA水平升高(P<0.01),ATP/AMP比值降低(P<0.01),ANP、BNP mRNA表达升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达均降低(P<0.01);红芪多糖可改善ISO诱导小鼠的各项指标(P<0.05,P<0.01),且高剂量效果更佳。结论红芪多糖对ISO诱导小鼠心肌肥厚具有改善作用,该作用可能与其提高PI3K/Akt信号通路活性有关。

异丙肾上腺素诱导小鼠急性心肌梗死模型制备方法研究

目的探讨异丙肾上腺素给药方式对小鼠心肌损伤的影响,建立小鼠急性心肌梗死(AMI)模型。方法小鼠皮下注射异丙肾上腺素(150 mg/kg),于不同时点取小鼠血样,检测血清中AMI相关指标[肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白介素6(IL-6)、降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)]的含量变化;通过苏木素-伊红染色观察小鼠心脏组织的病理改变。结果造模后,血清中CK、CK-MB、LDH、cTnT、ALT、AST水平升高(P<0.05或P<0.01);2次连续给予异丙肾上腺素,小鼠血清中AMI相关指标升高,且相关指标在给药后16 h达到最高浓度(P<0.05或P<0.01)。苏木素-伊红染色结果显示,肌组织发生病理学改变。结论皮下注射异丙肾上腺素可诱导小鼠AMI,其中连续2次注射后16 h心肌损伤最为严重,这为AMI的临床治疗药物研究和创新药物开发奠定基础。

小鼠横向主动脉弓缩窄与异丙肾上腺素注射构建心肌肥厚模型方法的比较

目的 比较由主动脉弓缩窄术(TAC)和异丙肾上腺素(ISO)构建的小鼠慢性心衰模型在超声心动图和病理上的变化差异。方法 小鼠适应性喂养1周后,随机分为假手术组、TAC手术组、正常对照组、ISO给药组,分别在TAC小鼠术后第0、2、4、6、8、10、12周、ISO给药后第0、14天,对小鼠进行超声心动图检测心脏功能指标。在12周通过qRT-PCR实验检测小鼠心脏组织炎性细胞因子和肥大相关标志物的表达变化,同时对模型小鼠的心脏组织进行HE染色,检测其心脏组织炎性浸润情况,Masson染色实验对模型小鼠的心脏纤维化程度进行评估。结果 与假手术组和正常对照组小鼠相比,TAC手术后12周和ISO给药组的小鼠心脏质量与体质量之比(HW/BW)和心脏质量与胫骨长度之比(HW/TL)都有明显上升,说明TAC术小鼠的心脏出现了明显的心肌肥大。超声心动图检测结果显示,模型组小鼠心脏舒张期和收缩期的室间隔厚度(IVSd和IVSs)明显下降,左心室内径(LVIDd和LVIDs)增加,左心室后壁厚度(LVPWd和LVPWs)呈轻度下降趋势,射血分数(EF%)、短轴缩短分数(FS%)、E/A峰比值降低。实时荧光定量PCR实验结果显示,TAC组、ISO给药组小鼠的心脏组织中IL-1β、IL-18、TNF-α等炎症因子均显著提高。HE和Masson染色结果显示,与假手术组和正常对照组的小鼠相比,模型组的小鼠心肌细胞排列障碍,细胞核增大、细胞肿胀,并伴有炎性浸润;同时,TAC小鼠的心脏组织中沉积了大量胶原纤维。结论 TAC手术方法和ISO给药方法均能导致小鼠出现从心肌肥厚、心肌肥大到心力衰竭的一系列病理性改变,但由于不同造模方法导致发病部位不一致,需要根据实验目的选择造模方法再进行实验研究。

大龄大鼠空肠平滑肌对异丙肾上腺素反应下降的机制

目的:观察不同月龄大鼠空肠平滑肌对β受体激动剂异丙肾上腺素(Iso)反应性的变化,初步探讨其变化的机制.方法:采用灌流法加药,利用张力换能器记录离体空肠平滑肌张力的变化.结果:20月龄组大鼠空肠平滑肌收缩频率都低于3月龄组(27.0±2.5vs30±3.1,P<0.05);灌流10-9-10-6mol/L终浓度的Iso后,20月龄组大鼠空肠平滑肌收缩幅度变化的百分率(即舒张反应)都低于3月龄组(3×10-8,-41.4%,P<0.05;1×10-7,-34.6%,P<0.05;3×10-7,-25.0%,P<0.05;1×10-6,-19.5%,P<0.05);加Nω-nitro-L-arginine(L-NNA)后,3月龄组对Iso的舒张反应降低,而20月龄组对IsO的舒张反应未见明显变化;抑制NOS前,20月龄组Iso的pD2值比3月龄组的pD2值小(6.52±0.54vs6.98±0.3,P<0.05).结论:大龄大鼠空肠平滑肌对Iso的反应性下降;NOS或一氧化氮(NO)的作用降低可能是引起大龄大鼠空肠平滑肌对Iso的反应性下降的重要原因之一.