“心痛三两三”方对异丙肾上腺素引起的斑马鱼心肌缺血的作用

目的:研究“心痛三两三”方对异丙肾上腺素引起的斑马鱼心肌缺血的作用。方法:用“心痛三两三”方9.4、18.75、37.5、75、150和300μL/mL浓度干预受精后2~3 d野生型AB品系斑马鱼,根据斑马鱼的毒性表型和死亡情况确定“心痛三两三”方的最大耐受浓度,从而筛选出本研究的给药剂量。实验设“心痛三两三”方高、中、低剂量组,浓度分别为75.0、25,0、8.3μL/mL,阳性对照丹参滴丸组浓度为500μg/mL,正常对照组和模型对照组,每组30尾置于六孔板中,各组均置于28℃培养箱中培养4 h后,用50 mg/mL盐酸异丙肾上腺素诱导60 min建立斑马鱼心肌缺血模型。共同处理结束后,用吖啶橙法染色分析斑马鱼心脏部位凋亡细胞荧光强度;心跳血流分析软件录制斑马鱼血流视频,分析斑马鱼心输出量和血流速度。结果:与模型对照组比较,“心痛三两三”方中、高剂量组斑马鱼心脏部位凋亡细胞荧光强度显著降低(P<0.05,P<0.01),其凋亡改善率分别为34%和54%。“心痛三两三”方低、中、高剂量组斑马鱼心输出量和血流速度明显提高(P<0.01),其改善率分别为52%、93%、62%和29%、53%、32%。结论:“心痛三两三”方对异丙肾上腺素诱导的斑马鱼心肌缺血具有明显改善作用,与改善心肌细胞凋亡有关。

刺梨果多糖对异丙肾上腺素诱导的心肌缺血小鼠保护作用及机制

目的:探究刺梨果(Rosa roxburghii Tratt)多糖对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌缺血(myocardial ischemia,MI)小鼠保护作用及作用机制。方法:将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:对照组,模型组,普萘洛尔(30 mg/kg)组,刺梨果多糖低、高剂量(50、100 mg/kg)组,每组8只。各给药组小鼠连续灌胃(ig)给药14 d,从第8天开始,ig给药1 h后,除对照组腹腔注射(ip)相同剂量的生理盐水外,其余各组小鼠ip ISO(10 mL/kg),连续7 d,构建MI小鼠模型。末次给药1 h后检测小鼠心电图变化,麻醉后取心脏,计算心脏指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌组织病理变化;采用2%2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色液(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色检测心肌梗死面积;采用生化试剂盒检测小鼠血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用免疫印迹法(Western blot)检测心脏组织中NADPH氧化酶2(NADPH oxidase2,NOX2)、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma2,Bcl2)、Bcl2相关X(Bcl2-associatedX,Bax)、半胱天冬酶3(Caspase 3)、中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-related protein 1,Keap1)、血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白的表达情况。结果:与对照组小鼠比较,模型组小鼠心脏肿大,心电图ST段发生明显升高,HE染色可观察到心脏组织出现明显的炎症浸润和细胞间隙,TTC染色结果发现明显的心肌组织梗死。进一步实验发现模型组小鼠血清MDA含量和LDH活性显著升高(P<0.001),自由基清除酶SOD活性降低(P<0.05),Western blot结果显示,Nrf2、HO-1和Bcl2显著下调(P<0.05,P<0.01),Keap1、NOX2、Bax和Caspase 3显著上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组小鼠比较,刺梨果多糖组小鼠心肌损伤都有不同程度的恢复,心电图ST段降低,小鼠心脏组织病理损伤减少,血清MDA含量和LDH活性显著降低(P<0.001),SOD活性显著升高(P<0.01,P<0.001),心脏组织蛋白Nrf2、HO-1和Bcl2表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Keap1、NOX2、Bax和Caspase 3表达显著下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论:刺梨果多糖能通过调节Keap1-Nrf2信号通路,抑制氧化应激损伤,继而调控Caspase 3、Bax、Bcl2蛋白,减少心肌细胞凋亡发生,从而对ISO诱导的MI小鼠起到保护作用。

大黄素甲醚对异丙肾上腺素诱导心肌损伤的保护作用

目的 探讨大黄素甲醚对异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)致心肌损伤的保护作用及相关机制。方法 通过皮下注射给予ISO,诱导大鼠心肌损伤模型,检测心脏质量指数,酶标仪检测大鼠血清中肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB, CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平,超声心动仪评估心功能。在体外培养的H9c2细胞中,用ISO构建心肌细胞损伤模型,MTT法检测细胞存活率,ELISA法检测细胞培养液中LDH水平,蛋白印迹法检测心肌细胞中相关蛋白表达。结果 在ISO诱导的心肌损伤大鼠模型中,心脏质量指数增加,血清CK-MB和LDH水平升高,心功能指标即射血分数(ejection fraction, EF)和缩短分数(fractional shortening, FS)降低,而分别用大黄素甲醚和普萘洛尔干预,均减弱上述指标变化。在ISO诱导的H9c2细胞损伤模型中,大黄素甲醚对ISO致细胞存活率下降、LDH水平升高、TLR4/MyD88/NF-κB和TNF-α蛋白表达水平增加均有显著的抑制作用。结论 大黄素甲醚对ISO致心肌损伤具有保护作用,其机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

异丙肾上腺素诱导慢性心衰模型不同方案的比较

目的比较3种不同方案制备的动物模型,探索稳定、可靠且重复性好的小鼠慢性心力衰竭模型。方法将25只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:正常组(ZC组)、实验A组(MA组)、B组(MB组)和C组(MC组)。实验组采取不同制备方案连续注射ISO,其中MA组和MB组为浓度递减造模法,MA组(第1天10 mg/kg、第2天5 mg/kg、第3~30天2.5 mg/(kg·d);皮下注射30 d);MB组(第1天20 mg/kg、第2天10 mg/kg、第3~14天5 mg/(kg·d);皮下注射14 d);MC组(浓度恒定7.5 mg/(kg·d),腹腔注射28 d),构建慢性心衰动物模型。在注射结束后的第2天,计算各组小鼠存活率和成模率情况。通过心脏超声检测心功能,并用ELISA测定血清中NT-pro BNP、IL-6、TNF-α水平。结果在第30天注射结束后,各实验组虽都能有效诱导慢性心力衰竭,但发现7.5 mg/kg浓度MC组的造模情况最稳定,更适合后续开展中医药相关的心衰研究。结论ISO制备小鼠慢性心衰模型以恒定7.5 mg/(kg·d),连续腹腔注射28 d为最佳方案。

不同剂量异丙肾上腺素对家兔动脉血压及心脏损伤的影响探讨

目的:探讨与分析不同剂量异丙肾上腺素对家兔动脉血压及心脏损伤的影响。方法:研究时间为2022年4月—2023年2月,健康成年雄性家兔18只随机平分为低剂量异丙肾上腺素组、高剂量异丙肾上腺素组与对照组,每组6只。低剂量异丙肾上腺素组、高剂量异丙肾上腺素组家兔每日背部皮下注射0.1ml/kg与0.4ml/kg的异丙肾上腺素100μl,1次/d;对照组在同样位置注射无菌生理盐水100μl,1次/d,持续应用14d,检测家兔中心动脉压变化情况。结果:低剂量、高剂量异丙肾上腺素组处理第7天、第14天的平均动脉压、血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量都高于对照组(P<0.05),高剂量异丙肾上腺素组也高于低剂量异丙肾上腺素组(P<0.05)。低剂量、高剂量异丙肾上腺素组处理第7天、第14天的维持窦性节律时间均短于对照组(P<0.05),且高剂量异丙肾上腺素组短于低剂量异丙肾上腺素组(P<0.05)。低剂量、高剂量异丙肾上腺素组处理第14天的心脏组织Caspase-3、Bcl-2蛋白相对表达水平高于对照组(P<0.05),且高剂量异丙肾上腺素组高于低剂量异丙肾上腺素组(P<0.05)。结论:高低剂量的异丙肾上腺素均可降低家兔维持窦性节律时间,提高血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量,促进其心脏组织Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达,且存在量效关系,这为异丙肾上腺素诱导家兔心肌损伤模型的构建提供机制及理论依据指导。

基于异丙肾上腺素致心肌细胞损伤探讨红参治疗心衰的药效物质基础研究

目的探讨红参中药及其组分对异丙肾上腺素(ISO)致H9c2大鼠细胞损伤的保护作用。方法将H9c2细胞随机分为6组:对照组、模型组、红参多糖组、红参寡糖组、红参总皂苷组和红参小极性组。对照组细胞正常培养不做任何处理;模型组调整培养基再进行ISO处理;各给药组用不同浓度含药培养液预处理后,再进行ISO给药处理。采用CCK-8法检测各组细胞存活率,在此基础上进行SPSS分析,评价不同组分对ISO致H9c2细胞损伤的保护作用。结果选取含ISO浓度为0.25μmol/L的无血清DMEM培养液,作为ISO致心肌细胞H9c2损伤模型的造模条件。红参的生药浓度在0.01~5mg/mL时对H9c2细胞无明显毒性,且当红参在1 mg/mL时保护作用最强,细胞存活率为61.555%,具有统计学意义(P<0.05)。红参各组分实验结果表明,多糖组和寡糖组保护作用较弱,而皂苷组和小极性组的作用较强,同时皂苷组的活性要大于小极性组。结论红参对ISO致H9c2细胞损伤具有较强的保护作用,红参皂苷为其主要的药效物质基础。

全反式维甲酸减轻内质网应激反应改善异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化与心肌重构

目的全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导下大鼠心肌纤维化和心肌重构的影响及作用机制。方法将大鼠按随机数表法分为4组:对照组、ISO组、ATRA+ISO组、4-PBA(4-苯基丁酸,4-phenylbutyric acid)+ISO组,每组10只;ATRA+ISO组和4-PBA+ISO组预先分别通过腹腔注射ATRA与4-PBA,然后再通过背部皮下注射ISO进行诱导。心脏超声检测各组大鼠左心室舒张末期内径(left ventricular internal diameter in diastole,LVIDd)、左心室收缩末期内径(left ventricular internal diameter in systole,LVIDs)、左心室的射血分数(ejection fraction,EF)及短轴缩短率(fractional shortening,FS),称量各组大鼠体重、全心质量及左心室质量,计算全心质量指数(heart mass index,HMI)与左心室质量指数(left ventricle mass index,LVMI)。ELISA测定各组大鼠血清N端B型利钠肽原(N terminal pro B type natriuretic peptide,NT-proBNP)含量。HE染色和Masson染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化与胶原纤维化程度。蛋白质印迹检测心肌组织中G蛋白偶联受体78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homology protein,CHOP)、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、磷酸化真核翻译起始因子2α(phosphorylated eukaryotic translation initiation factor 2α,p-eIF2α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、胶原蛋白Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ的蛋白表达。结果与对照组比较,ISO组大鼠EF和FS显著降低(P<0.05),LVIDd、LVIDs、HMI及LVMI显著升高(P<0.05),血清NTproBNP含量显著增加(P<0.05),心肌组织病理损伤明显,胶原纤维面积显著增加(P<0.05),心肌组织中GRP78、CHOP、PERK、p-eIF2α、TGF-β1、α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ蛋白表达均显著上调(P<0.05);与ISO组比较,ATRA+ISO组和4-PBA+ISO组的大鼠EF和FS显著升高(P<0.05),LVIDd、LVIDs、HMI及LVMI显著降低(P<0.05),血清NT-proBNP含量显著减少(P<0.05),心肌组织损伤程度明显减轻,胶原纤维面积显著减小(P<0.05),心肌组织中GRP78、CHOP、PERK、p-eIF2α、TGF-β1、α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论ATRA能够减轻ISO诱导的大鼠心肌损伤及其纤维化,抑制心肌重构,改善心功能,该作用与其抑制内质网应激反应有关。

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌损伤的影响及作用机制

目的研究中药黄芪提取物黄芪甲苷对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌损伤的保护作用及机制。方法选取2021年4月至6月由辽宁长生生物技术股份有限公司提供的32例雄性SD大鼠作为研究对象,采用随机数字表法将其分为对照组(8例)、模型组(8例)、黄芪甲苷低剂量组(8例)、黄芪甲苷高剂量组(8例)。对照组皮下给予等量的生理盐水,采用普通饲料饲养;模型组采用ISO 50 mg/(kg·d)皮下多点注射1次/d,共2 d,建立大鼠心肌损伤模型,普通饲料饲养;黄芪甲苷低剂量组采用ISO 50 mg/(kg·d)皮下多点注射1次/d,共2 d,建立大鼠心肌损伤模型,成模后,采用黄芪甲苷药液20 mg/(kg·d)腹腔注射,普通饲料饲养;黄芪甲苷高剂量组采用ISO 50 mg/(kg·d)皮下多点注射1次/d,共2 d,建立大鼠心肌损伤模型,成模后,采用黄芪甲苷药液40 mg/(kg·d)腹腔注射,普通饲料饲养。比较四组给药28 d后超声心动图结果、HE染色心肌病理改变、心肌组织中丙二醛(MDA)的含量及血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin 1)、抗体微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)及泛素结合蛋白(P62)的表达水平。结果左心室射血分数(EF%)染色和电镜结果显示,模型组心肌损伤严重,心肌组织中MDA、血清中LDH、P62蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Beclin1和LC3Ⅱ蛋白表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪甲苷低剂量和高剂量组的MDA、LDH低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);黄芪甲苷低剂量和高剂量组的EF%、黄芪甲苷低剂量组的短轴缩短率(FS%)高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);黄芪甲苷高剂量组的FS%与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。黄芪甲苷低剂量组和高剂量组可以减轻心肌损伤大鼠的病理组织学改变。黄芪甲苷低剂量组和高剂量组的Beclin 1和LC3Ⅱ蛋白表达量高于模型组,P62蛋白表达量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪甲苷可通过促进细胞自噬减轻异丙肾上腺素诱导的心肌损伤。

高良姜素减轻异丙肾上腺素诱导心脏纤维化的作用机制

目的:探讨高良姜素(Galangin)对异丙肾上腺素(ISO)诱导心脏纤维化的作用机制。方法:将30只C57BL/6小鼠随机分为正常组、ISO组、高良姜素低剂量组[25 mg/(kg·d)]、高良姜素中剂量组[50 mg/(kg·d)]、高良姜素高剂量组[100 mg/(kg·d)]。处理结束后行心脏超声评估心功能[左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)];测量小鼠体质量(BW)、心脏重量(HW)、胫骨长度(TL),计算心脏重量与体质量比值(HW/BW)、心脏重量与胫骨长度比值(HW/TL),评估心肌肥厚情况。天狼星红染色评价心脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测炎症标志物白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和纤维化标志物胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA水平;试剂盒检测心脏组织氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与正常组比较,ISO组小鼠HW/BW、HW/TL、LVEDD及LVESD升高,LVEF和LVFS降低,IL-6、IL-1β、TNF-α、CollagenⅠ、CollagenⅢ和TGF-β1mRNA表达水平升高,心脏SOD和CAT活性降低,MDA含量升高,心肌细胞横截面积增大,心脏纤维化面积增加(P<0.05)。与ISO组比较,高良姜素高剂量组心脏纤维化面积减小,CollagenⅠ、CollagenⅢ、IL-6 mRNA表达水平降低,SOD活性升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。高良姜素中剂量组TGF-β1低于ISO组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高良姜素可减轻ISO诱导的心脏纤维化,其机制可能与抑制炎症、氧化应激有关。

伪人参皂苷GQ对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血的改善作用

目的:探讨新化合物伪人参皂苷GQ(PGQ)对异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心电图改变的保护作用。方法:取Wistar大白鼠50只,随机分为生理盐水组、异搏定对照组及PGQ大、中、小3个剂量组, 每组10只。舌下静脉注射预防给药PGQ 3．0、6．0和12．0 mg·kg-1及异搏定0．2 mg·kg-1,然后静脉注射 2．0 mg·kg 1异丙肾上腺素,测量心电图(ECG)标Ⅱ、胸I(V1)和胸Ⅱ(V 2)ST段的变化。结果:标Ⅱ导联、V1导联、V 2导联PGQ小、中、大剂量组ST段在各时间点抬高不明显,ST段抬高幅度低于盐水组 (P<0．05,P<0．01,P<0．001)。结论:PGQ能明显降低异丙肾上腺素引起的ST段抬高,具有改善大鼠异丙肾上腺素致急性心肌缺血心电图改变的作用。

丁香酚对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌梗死保护作用

目的探讨丁香酚对异丙肾上腺素(ISO)诱导的急性心肌梗死(AMI)模型大鼠的保护作用及其机制。方法40只Wistar大鼠按随机数字表法分成对照组、模型组和丁香酚低、中、高剂量组,每组8只。连续2 d注射ISO建立AMI模型大鼠,不同剂量(1、10和100 mg/kg)丁香酚处理后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色计算大鼠心脏梗死面积,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡水平,Western blot分析iNOS和Cleaved Caspase 3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠CK[(0.93±0.06)U/mL比(0.22±0.04)U/mL,P<0.01]、CK-MB[(210.06±11.96)IU/L比(81.61±3.36)IU/L,P<0.01]、LDH[(5870.87±681.37)U/L比(1699.72±250.51)U/L,P<0.01]、cTnT[(0.63±0.09)U/mL比(0.07±0.03)U/mL,P<0.01]、iNOS蛋白表达[(1.15±0.02)比(0.42±0.03),P<0.01]、TNF-α[(318.61±28.27)pg/mg比(86.68±6.24)pg/mg,P<0.01]、IL-6[(5.33±0.98)pg/mg比(1.76±0.30)pg/mg,P<0.01]、MDA[(7.38±0.54)nmol/mg比(2.14±0.43)nmol/mg,P<0.01]和Cleaved Caspase 3蛋白表达[(1.13±0.07)比(0.64±0.03),P<0.01]升高,SOD含量[(82.46±14.77)U/mg比(188.19±19.34)U/mg,P<0.01]下降,梗死面积[(45.95±3.35)%比(0.00±0.00)%,P<0.01]和心肌细胞凋亡[(41.74±5.02)%比(9.05±0.71)%,P<0.01]增加。中、高剂量丁香酚给药后,AMI大鼠CK[(0.64±0.02)U/mL、(0.45±0.06)U/mL比(0.93±0.06)U/mL,P<0.01]、CK-MB[(144.11±8.28)IU/L、(121.10±7.88)IU/L比(210.06±11.96)IU/L,P<0.01]、LDH[(4076.81±465.13)U/L、(3438.28±361.19)U/L比(5870.87±681.37)U/L,P<0.01]、cTnT[(0.40±0.03)U/mL、(0.26±0.04)U/mL比(0.63±0.09)U/mL,P<0.01]、iNOS蛋白表达[(0.62±0.03)、(0.41±0.07)比(1.15±0.02),P<0.01]、TNF-α[(252.79±26.56)pg/mg、(222.29±18.40)pg/mg比(318.61±28.27)pg/mg,P<0.01]、IL-6[(3.33±0.47)pg/mg、(2.91±0.52)pg/mg比(5.33±0.98)pg/mg,P<0.01]、MDA[(4.47±0.45)nmol/mg、(3.97±0.49)nmol/mg比(7.38±0.54)nmol/mg,P<0.01]和Cleaved Caspase 3蛋白表达[(0.73±0.07)、(0.65±0.09)比(1.13±0.07),P<0.05]显著降低,SOD含量[(138.62±13.76)U/mg、(159.67±15.32)U/mg比(82.46±14.77)U/mg,P<0.01]显著升高。同时,中、高剂量丁香酚可有效减少AMI大鼠的梗死面积[(26.23±4.02)%、(15.49±3.13)%比(45.95±3.35)%,P<0.01],抑制心肌细胞凋亡[(23.34±2.73)%、(18.44±2.03)%比(41.74±5.02)%,P<0.01]。结论丁香酚能够改善ISO诱导的大鼠AMI,其机制可能与调节iNOS、炎症和氧化应激有关。

麦冬加钙通道阻滞剂防止异丙肾上腺素副作用效果观察

为解决异丙肾上腺素长期用药的不良副作用问题 ,我们试验观察了麦冬加钙通道阻滞剂防止该副作用的效果。实验用断乳前经致癌剂处理的雄性 ICR小鼠 ,断乳后每日皮下注射盐酸异丙肾上腺素和咖啡因造模。结果表明异丙肾上腺素用药达 5个月以上时动物呈现明显病态 ,包括消瘦、反应性低下、肝间隙连接通讯显著抑制乃至死亡 ;饮水和饲料中添加麦冬水煎液和钙通道阻滞剂的动物则无上述病态。说明麦冬加钙通道阻滞剂可以完全防止异丙肾上腺素长期用药的不良副作用。

红芪多糖通过调控PI3K/Akt信号通路对异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚的改善作用

目的研究红芪多糖对异丙肾上腺素(ISO)诱导小鼠心肌肥厚及PI3K/Akt信号通路的影响。方法50只小鼠随机分为空白组、模型组、普萘洛尔组(40 mg/kg)和红芪多糖低、高剂量组(60、120 mg/kg),每组10只,灌胃给予相应剂量药物15 d,给药1 d后皮下注射ISO 14 d进行造模。给药结束后24 h,计算小鼠心脏指数,Masson染色观察心肌组织形态变化,ELISA法检测心肌组织FFA、ATP、AMP水平,RT-qPCR法检测心肌组织ANP、BNP mRNA表达,Western blot法检测心肌组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠心脏指数升高(P<0.05,P<0.01),心肌细胞肥大、胶原纤维增生,FFA水平升高(P<0.01),ATP/AMP比值降低(P<0.01),ANP、BNP mRNA表达升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达均降低(P<0.01);红芪多糖可改善ISO诱导小鼠的各项指标(P<0.05,P<0.01),且高剂量效果更佳。结论红芪多糖对ISO诱导小鼠心肌肥厚具有改善作用,该作用可能与其提高PI3K/Akt信号通路活性有关。

基于“以方测证”理论探讨异丙肾上腺素诱导慢性心力衰竭大鼠模型的制备及中医证型

目的 构建异丙肾上腺素(isoprenaline, ISO)诱导的慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)大鼠模型,运用以方测证法反推其中医证型。方法 采用随机数字表法将SD大鼠分为正常组及ISO低、中、高剂量组。制备CHF大鼠模型,将成模大鼠按随机数字表法分为6组:模型组、参附组、丹红组、参麦组、黄芪组、普萘组。分别于造模结束后、给药15 d后,检测各组大鼠心脏质量指数及左心室质量指数;超声心电图检测各组大鼠心功能;ELISA法检测大鼠氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro brain natriuretic peptide, NT-pro BNP);HE及Masson染色方法观察大鼠心脏组织病理形态以及纤维化状态改变。结果 不同剂量ISO诱导CHF大鼠模型的制备:与正常组比较,ISO低剂量组各方面均无明显改变;ISO中、高剂量组大鼠左室射血分数(left ventricular fraction shortening, LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening, LVFS)、体质量降低(P<0.01),左心室舒张末期内径(left ventricular internal dimension diamete, LVIDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular internal systolic dimension, LVISD)、NT-pro BNP、心脏质量指数、左心室质量指数明显升高(P<0.01),但ISO高剂量组死亡率低、炎性细胞浸润及纤维化程度更高。基于“以方测证”理论探讨ISO诱导CHF大鼠中医证型:与模型组比较,参附组LVEF、LVFS、体质量升高,LVIDD、LVISD、NT-pro BNP、心脏质量指数及左心室质量指数降低(P<0.05,或P<0.01);纤维结缔组织增生和炎性细胞浸润明显减少,胶原纤维沉积减轻,仅见少量胶原纤维。其余组各项指标均有改善,但无统计学意义(P>0.05)。结论 ISO中、高剂量均能制备CHF大鼠模型,但ISO高剂量更优。ISO诱导CHF大鼠模型可能属于心阳虚证。

异丙肾上腺素诱导慢性心衰模型的方法优化

目的目前对于慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)发病机制的研究和治疗手段均具有局限性,为了更好地研究其发病机理,本文对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导慢性心力衰竭大鼠模型的制备方法进行了优化研究。方法将SD雄性大鼠分为4组,模型A组大鼠连续以5 mg/(kg·d)注射ISO 10 d;模型B组大鼠前3 d注射ISO 2.5 mg/(kg·d),后9 d注射5 mg/(kg·d);模型C组大鼠第1天被给予15 mg/kg的戊巴比妥钠,注射ISO 1.25 mg/kg,第2、3天以2.5 mg/(kg·d)注射,后9 d以5 mg/(kg·d)注射,从第2天开始每天分2次注射间隔30 min。对照组给予等量生理盐水。通过超声心动图、病理学检测和荧光定量PCR等方法来验证模型的建立。结果模型A、B和C组的死亡率分别为80%、60%和40%。与对照组相比,模型C组大鼠的左心室短轴缩短率和射血分数显著降低(P<0.001);心肌细胞排列紊乱,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著增加(P<0.05);COL1A1、COL3A1、FN1和ACTA2 mRNA表达水平显著上调(P<0.05);血清氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-B type natriuretic peptide,NT-pro BNP)与甘油三脂的水平显著升高(P<0.05)。结论注射麻醉剂使大鼠处于半清醒状态,梯度增加每日注射剂量和减少单次注射量均可降低死亡率,为建立CHF大鼠模型提供新思路与新方式。

赤土茯苓甙对异丙肾上腺素诱发的小鼠缺血心肌的保护作用

赤士茯苓甙（Smi）为赤土茯苓SmilaxglabraRoxb.中发现的有效成分。在异丙肾上腺素诱发小鼠急性心肌缺血期，心肌SOD，Se－GSH－Px活性均降低，MDA含量增加，血清CPK浓度升高，心肌超微结构广泛而严重损伤。Smi500，250，125，62．5mg／kg灌胃，呈剂量依赖性地保护急性心肌缺血期SOD，Se－GSH－Px活性，降低MDA含量，减少CPK释放，Smi125mg／kg灌胃及10mg／kg腹腔注射明显减轻缺血心肌超微结构损伤。提示Smi具有抗异丙肾上腺素介导的脂质过氧化作用及对缺血心肌的保护作用。

黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对异丙肾上腺素(isoprot-erenol,Iso)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,应用Iso 10μmol.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度的黄芪多糖及L型钙通道阻滞剂维拉帕米(Verapamil,VER)对心肌肥厚的影响。用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;RT-PCR法检测心肌细胞ANP的mR-NA表达;以Fluo-3/AM为荧光探针,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化。结果 APS和VER均能够有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为蛋白质含量降低,体积减小,ANP mRNA表达降低和细胞内钙离子浓度降低,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与降低[Ca2+]i有关。

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用和机制。方法体外培养的乳大鼠心肌细胞分别加入AsⅣ3,10,30和90μmol.L-1孵育30 min后,再加入Iso 10μmol.L-1作用48 h。另设AsⅣ30μmol.L-1和Iso 30μmol.L-1模型对照组。考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测量细胞体积;MTT测定细胞存活率;以Fura-2/AM为荧光探针,采用Till阳离子测定系统,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化。结果与正常对照组相比,AsⅣ30μmol.L-1对正常心肌细胞无影响;Iso 30μmol.L-1可使心肌细胞总蛋白含量明显增加,体积明显增大,心肌细胞内[Ca2+]i瞬间峰值增大,同时使心肌细胞存活率降低了48.1%(P<0.01)。与Iso模型组相比,预加入AsⅣ10和30μmol.L-1心肌细胞蛋白质含量明显降低,ASⅣ30μmol.L-1组可以恢复达到正常对照组水平;AsⅣ3~90μmol.L-1可以拮抗Iso对正常心肌细胞体积增大、细胞内[Ca2+]i瞬间变化幅度增大的作用;ASⅣ3,10和30μmol.L-1可显著升高细胞存活率(P<0.01)。结论 AsⅣ对Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有良好的保护作用,其机制可能与降低[Ca2+]有关。

黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚的保护作用

目的:考察黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚的保护作用并探讨其机制。方法:皮下注射异丙肾上腺素致小鼠心肌肥厚模型,以黄芪甲苷(40,80mg/kg)和阳性对照普萘洛尔(40mg/kg)灌胃给药,测量小鼠心脏重量指数和心肌羟脯氨酸(Hyp)含量,血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活力,心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR法检测心肌肌浆网钙泵(SERCA2a)和受磷蛋白(PLB)的mRNA表达。结果:与正常对照组相比,异丙肾上腺素组心脏重量指数、心肌Hyp含量、血清LDH和CK水平显著升高,心肌SOD活性下降,心肌MDA含量增加,SERCA2amRNA表达显著减少,PLBmRNA表达无明显变化。与异丙肾上腺素组相比,黄芪甲苷降低心脏重量指数和心肌Hyp含量,降低血清LDH和CK水平,增加心肌SOD活性,降低心肌MDA含量,上调SERCA2amRNA表达。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基,增加SERCA2amRNA表达有关。

通心络胶囊对异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤保护作用的实验研究

目的 :探讨通心络胶囊对异丙肾上腺素致心肌损伤的保护作用。方法 :于大鼠皮下注射异丙肾上腺素 ( 85mg/kg)制备心肌损伤模型 ,34只大鼠随机分成生理盐水对照组、异丙肾上腺素组及通心络胶囊干预组。HE染色及DNA末端标记法 (TUNEL)分别检测心肌组织病理改变及心肌细胞凋亡的变化 ,透射电镜检测心肌细胞超微结构的变化。结果 :生理盐水对照组无细胞变性与坏死 ,仅见极少凋亡阳性细胞 ;异丙肾上腺素组有明显心肌组织坏死 ,心肌凋亡细胞增多 ,电镜观察有凋亡细胞特征形态改变 ;通心络干预后心肌细胞坏死及凋亡均显著减轻。结论 :异丙肾上腺素可致大鼠心肌组织坏死与凋亡 ,通心络胶囊可通过抑制心肌细胞坏死与凋亡而减轻心肌损伤。