QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定大米、小麦和动物源食品中异丙隆及其代谢物脱甲基异丙隆残留

本研究建立了超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)同时测定异丙隆及其代谢物脱甲基异丙隆在大米、小麦、牛肉、牛奶、鸡肉和鸡蛋的残留检测方法。样品经2%甲酸乙腈提取,以N-丙基乙二胺(PSA)净化,利用乙腈和0.2%甲酸水作为流动相梯度洗脱,T3色谱柱分离,在多反应监测模式下定量分析,基质外标法定量。结果表明:异丙隆及其代谢物脱甲基异丙隆溶剂标准曲线和基质标准曲线在1~1 000μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99。在4个加标水平下,异丙隆日内平均回收率为74.0%~107.0%,相对标准偏差0.7%~12.9%;日间平均回收率为76.2%~108.7%,相对标准偏差1.1%~19.8%。脱甲基异丙隆日内平均回收率为76.9%~113.5%,相对标准偏差0.6%~13.9%;日间平均回收率为77.7%~107.4%,相对标准偏差2.2%~17.4%。异丙隆和脱甲基异丙隆的定量限均为1.0μg/kg。该方法简便、快捷、准确、灵敏度高,适用于异丙隆和脱甲基异丙隆在大米、小麦、牛肉、牛奶、鸡肉和鸡蛋6种基质中残留的检测,为解决异丙隆和脱甲基异丙隆在食品中残留的安全问题提供技术方法。

异丙隆原药对大鼠的致畸作用

目的:研究异丙隆原药对大鼠的致畸作用。方法:将受孕的雌性Wistar大鼠随机分为对照组(花生油)和低(36.9 mg/kg)、中(73.8 mg/kg)、高(369.0 mg/kg)3个异丙隆原药染毒剂量组,每组15只孕鼠。对照组和各染毒组于大鼠妊娠第6~15天灌胃给予受试物,每天1次,连续10 d。于妊娠第20天处死各组孕鼠,观察母鼠和胎鼠的生长、发育情况。结果:与对照组比较,低、中剂量组孕鼠各项观察指标差异均无统计学意义(P>0.05)。高剂量组孕鼠于受孕第9天出现萎靡不振、背毛蓬松、体质量下降(P<0.01);着床数、活胎数减少,死胎数增多,窝均体质量降低(P<0.5);部分胎鼠出现囟门大、枕骨及胸骨骨化不全、肋骨弯曲,骨骼畸形率为27.78%,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:在本实验条件下,369.0 mg/kg组异丙隆原药可引起Wistar大鼠的母体毒性和胚胎发育毒性。

种植抗异丙隆转基因水稻和施用异丙隆对转基因水稻根际微生物群落的影响

【目的】明确种植抗异丙隆转基因水稻和施用除草剂异丙隆对转基因水稻根际微生物群落的影响,为抗异丙隆水稻种植的生态风险评价提供科学依据。【方法】基于盆栽试验,采用高通量测序技术分析2个抗异丙隆转基因水稻株系及其亲本和施用异丙隆转基因在不同水稻生长阶段的根际微生物群落多样性与组成的差异。【结果】高通量测序结果显示,在水稻所有生长阶段,变形菌门(Proteobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、芽单胞菌门(Gemmatimonadota)、拟杆菌门(Bacteroidota)和粘球菌门(Myxococcota)是根际微生物中的优势细菌门;罗兹菌门(Rozellomycota)、子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、球囊菌门(Glomeromycota)和被孢霉门(Mortierellomycota)是根际微生物中的优势真菌门。在水稻相同生长阶段,无论是种植抗异丙隆转基因水稻、非转基因水稻还是施用除草剂异丙隆,水稻根际微生物群落的丰富度指数、辛普森多样性指数和香农多样性指数均未受到显著影响(P>0.05,下同);抗异丙隆转基因水稻、施用异丙隆的转基因水稻与非转基因水稻根际微生物中多数优势微生物门类相对丰度无显著差异,个别优势微生物门在水稻特定的生长阶段发生变化。基于相对丰度前15位微生物属的聚类分析显示,在水稻某些生长阶段根际微生物群落的组成在抗异丙隆转基因水稻、施用异丙隆的转基因水稻与非转基因水稻间存在一定差异。根际微生物群落的主成分分析显示,抗异丙隆转基因水稻、施用异丙隆的转基因水稻和非转基因水稻根际微生物群落组成间无显著差异,但不同生长阶段的根际微生物群落组成出现空间分异。根际微生物群落变差分解分析显示,水稻生长阶段对根际土壤中的细菌群落结构变化的影响为45.62%,而品种和施用异丙隆对根际土壤中细菌群落结构变化的影响分别为1.15%和2.76%;水稻生长阶段对根际土壤中真菌群落结构变化的影响为48.36%,而品种和施用异丙隆对根际土壤中真菌群落结构变化的影响分别为1.36%和2.45%。【结论】种植抗异丙隆转基因水稻和施用异丙隆并未对转基因水稻根际微生物群落产生显著影响,但根际土壤中的细菌和真菌群落一定程度上受水稻生长阶段的影响。

36%氟噻草胺·异丙隆悬浮剂的高效液相色谱分析

为了实现产品生产与质量控制,建立了同时测定36%氟噻草胺·异丙隆悬浮剂中氟噻草胺、异丙隆的高效液相色谱分析法。该方法采用以甲醇和水为流动相,流速1.0mL/min,使用C18为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器,在230nm检测波长下对试样中的氟噻草胺和异丙隆进行高效液相色谱分离和外标法定量。结果显示,氟噻草胺为0.0596~0.1218mg/mL、异丙隆为0.299~0.604mg/mL时,线性相关系数分别为0.9994和0.9991,标准偏差为0.04和0.12,变异系数分别为0.67%和0.40%,平均回收率为100.03%和100.15%,该方法具有简便、快速、准确度高等特点,可以满足氟噻草胺和异丙隆的定性和定量分析。

HPLC法测定44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂中有效成分含量

建立了一种同柱分离检测44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂中有效成分的高效液相色谱定量方法,确定的色谱条件为250 mm×4.6 mm ODS-C18不锈钢色谱柱和紫外检测器,柱温30℃,甲醇+水溶液(60︰40,体积比)为流动相,检测波长为220 nm。结果表明:在设定的质量浓度范围内,砜吡草唑和异丙隆的线性相关系数r均为0.9999,变异系数分别为1.07%和0.1421%,回收率分别为99.78%和99.50%,说明该方法操作简单、分离效果好,线性关系、准确度和精密度均符合分析的基本要求,可用于制剂产品中砜吡草唑和异丙隆的质量控制。

75%吡氟酰·异丙隆·唑啉草防除冬小麦田一年生杂草试验

[目的]考察多元复配型麦田除草剂75%吡氟酰·异丙隆·唑啉草(商品名“搏草”)对冬小麦田一年生杂草的综合防治效果。[方法]对郭河镇小麦田冬季发生量较大的禾本科杂草的防治效果、除草剂最佳使用剂量和药剂施用后对小麦的安全性等方面展开试验研究。[结果]药后45 d以75%吡氟酰·异丙隆·唑啉草1200 g/hm^(2)与50%异丙隆1500 g/hm^(2)混配对杂草的防除效果最佳,且对小麦生长安全。[结论]试验结果为农户防除小麦田一年生杂草提供了技术依据。

氟噻草胺与异丙隆复配防除冬小麦田杂草效果及对小麦产量的影响

为探明氟噻草胺与异丙隆复配对冬小麦田一年生杂草的防治效果及对小麦产量的影响,以“马兰一号”、播娘蒿和雀麦为调查对象,采用田间试验,测定了不同剂量35%氟噻草胺·异丙隆悬浮剂对冬小麦田一年生杂草的株防效、鲜重防效及冬小麦产量。试验结果表明:在冬小麦1叶一心期至2叶一心期,一年生杂草2~5叶期,以35%氟噻草胺·异丙隆悬浮剂喷雾处理茎叶,对试验地播娘蒿和雀麦均有较好的防效,末次株防效为83.47%~88.53%,鲜重防效为84.92%~90.81%,且对冬小麦安全,其产量与人工除草的产量差异不显著,显著高于空白对照,有较高的增产率。35%氟噻草胺·异丙隆悬浮剂推荐剂量为420~840 g.a.i./hm^(2)。

耐异丙隆和甲基二磺隆小麦种质资源筛选

异丙隆是我国应用最为广泛、施药量最大的麦田除草剂之一,对防除多种禾本科杂草和阔叶类杂草有显著效果;甲基二磺隆是目前有效防除节节麦、雀麦、菵草等恶性杂草的除草剂,但两者在敏感小麦品种上应用会产生药害,特别是低温药害。种植耐除草剂的小麦品种是减轻药害的可行途径。以50%异丙隆可湿性粉剂和30 g/L甲基二磺隆可分散油悬浮剂为供试药剂,对江苏省85个小麦品种(系)进行耐药性测定。首先以4个小麦品种通过系列剂量测定其耐药性,确定50%异丙隆可湿性粉剂36000 g/hm^(2)(推荐剂量的12倍)和30 g/L甲基二磺隆可分散油悬浮剂6300 mL/hm^(2)(推荐剂量的14倍)为整株生测法的批量筛选剂量。在此剂量下测试江苏省85个主要种植小麦品种(系)对这2种除草剂的耐药性差异。结果表明:筛选出的对异丙隆高度耐药性(耐药级别之和12~15)、中度耐药性(耐药级别之和10~11)品种(系)分别为7、8个;对甲基二磺隆高度耐药性(耐药级别之和12~14)、中度耐药性(耐药级别之和11)品种(系)分别为11、8个。其中对异丙隆和甲基二磺隆均具有较强耐药性的有明麦133、徐麦33和宁麦28。

异丙隆降解菌Y57的分离鉴定及其降解特性

从农药厂的活性污泥中分离出1株能高效降解异丙隆的细菌Y57,通过生理生化鉴定和16SrDNA同源性序列分析,鉴定为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonassp.).接种量为1%的Y57可以在48h之内将30mg/L的异丙隆完全降解,降解率达到99%以上,降解最适pH值为7.0,降解效率与接种量呈正相关,在通气良好状况下降解速率较高.1mmol/L的Li+、Ca2+、Mg2+可以提高Y57降解异丙隆速率;1mmol/L的Ni2+、Zn2+对降解有明显的抑制作用;1000mg/L的酵母粉、葡萄糖、牛肉膏或蛋白胨对降解具有抑制作用.降解谱实验表明,Y57还可以降解绿麦隆、敌草隆、敌稗等除草剂.

日本看麦娘对氯磺隆、异丙隆和骠马的抗药性

在连续施用氯磺隆不同年限的麦田采集日本看麦娘种子.室内进行不同剂量的氯磺隆、异丙隆、骠马处理,测定日本看麦娘植株鲜重抑制率.连续施用氯磺隆5～6年后再施用异氯混剂(异丙隆与氯磺隆的混配剂)3～5年,日本看麦娘的抗性指数达325.80～613.40;麦田连续施用氯甲混剂(氯磺隆与甲磺隆的混配剂)3～4年、异氯混剂2～3年,日本看麦娘的抗性指数为15.22～42.45;对氯磺隆产生抗性的日本看麦娘种群(R1～R9)均对异丙隆、骠马敏感;连续施用骠马2～3年麦田的日本看麦娘种群对骠马未产生抗性.

异丙隆分子印迹敏感膜传感器

在弱酸(pH5.5)条件下,采用电聚合法在金电极上制备邻氨基酚异丙隆分子印迹膜,对该印迹膜的性能、分子印迹效应和印迹膜对模板分子及其结构相似物的选择性响应等进行了研究。以K3Fe(CN)6为印迹电极和底液间的探针,建立了一种检测异丙隆的方法。该传感器对异丙隆具有良好的选择性和敏感度,异丙隆浓度在1.0×10-7～4.0×10-4mol/L范围内与K3Fe(CN)6还原峰电流减少量呈线性关系;检出限为2.95×10-8mol/L。对农田水中异丙隆含量进行了测定,回收率为99.0%～102.0%。

Sphingobium属细菌土壤中降解异丙隆的特性

通过在不同环境条件的土壤中接人异丙隆降解菌悬液，研究了Sphingobium属的3株细菌-YBL1、YBL2和YBL3在土壤中降解异丙隆的特性，分析了土壤类型、温度、碳氮源、土壤含水量和菌株接种量等因素对3株细菌降解土壤中异丙隆的影响。结果表明，3株细菌在马肝土（pH6．7）中能够高效降解异丙隆，在红壤（pH4．5）中不能降解异丙隆，菌株YBL3在潮土（pH8．2）中也有较好的降解效果；当接种量低于10。CFU g^-1土时，3株细菌均不能降解马肝土中的异丙隆，接种量高于10^6 CFU g^-1土时，菌株可以高效地降解土壤中的异丙隆；马肝土含水量低于40％时，3株细菌降解土壤中异丙隆的速率与土壤含水量呈正相关关系：在16～37℃范围内，菌株降解马肝土中异丙隆的速率与温度亦呈正相关关系。

抗异丙隆多克隆抗体的研制

【目的】为了建立测定脲类除草剂异丙隆残留的免疫分析方法(ELISA),对制备高效价抗异丙隆多克隆抗体的方法进行了研究。【方法】以对异丙基苯基异氰酸酯、N-甲基吡咯环酮和N-甲基己内酰胺为反应原料,经两步化学反应合成了两种异丙隆半抗原:1-(3-丙基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲(HAPTEN 4C)和1-(5-戊基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲(HAPTEN 6C)。通过活性酯法将半抗原与载体蛋白(BSA、OVA)偶联制备了两种异丙隆的人工抗原HAPTEN 6C-BSA和HAPTEN 4C-OVA。利用免疫抗原HAPTEN 6C-BSA免疫新西兰大白兔获得了高效价的异丙隆的多克隆抗体。建立了以HAPTEN 4C-OVA为包被原的间接竞争ELISA方法。【结果】合成的半抗原经薄层色谱、IR、1HNMR确证;人工抗原HAPTEN 6C-BSA和HAPTEN 4C-OVA的结合比分别为46﹕1和36﹕1。抗血清的最高效价为1.6×105。经优化确定的间接竞争ELISA分析方法中包被抗原的浓度为0.1μg.ml-1,抗血清的工作稀释倍数为1.0×105。根据异丙隆的标准抑制曲线,异丙隆对免疫反应的的IC50值为0.07μg.ml-1。抗体对氯溴隆、绿谷隆、特丁塞隆等6种取代脲类除草剂的交叉反应率都小于0.1%。【结论】异丙隆是小分子,本身没有免疫活性,也没有与载体蛋白偶联的活性基团。高效价、高特异性抗体的制备是利用免疫学方法进行异丙隆残留分析的最关键因素。本研究合成的两种异丙隆的相似物具有不同长度碳链的羧基,并且使异丙基和苯基充分暴露,具备了异丙隆半抗原的特点。将半抗原偶联到载体蛋白上获得的人工抗原经免疫兔子后获得了高效价、高特异性的抗异丙隆抗体。

不同浓度扑草净和异丙隆对大麦生理生化特性的影响

为研究扑草净和异丙隆浓度对分蘖期大麦生理生化特性的影响,本文以0、1.5、3.0、4.5 g/L的扑草净和0、3.0、6.0、9.0g/L的异丙隆对保大麦1号进行处理,并测定了SOD活性、POD活性、可溶性蛋白质含量、MDA含量、脯氨酸含量、相对电导率和O2-产生速率。结果表明,随扑草净和异丙隆浓度增加,O2-清除系统作用明显,导致O2-产生速率显著降低;扑草净对分蘖期大麦的伤害较异丙隆更为显著,低SOD和POD活性因清除更多O2-而显著降。

PPM法确定异丙隆对几种冬小麦田主要杂草的最低致死剂量

于2005-2006年,在河北省农林科学院粮油作物研究所温室内,用植物光合作用测定法研究了光合作用抑制型除草剂异丙隆防除冬小麦田5种主要杂草的最低致死剂量。试验结果表明,在用药6 d后杂草才表现出明显的药害症状,新叶黄化,生长受抑制;而杂草的光合作用在施药后2 d就明显地受到抑制,药剂处理的杂草叶片的PPM值显著下降,随着用药剂量的增加,杂草的PPM值显著下降。通过测定和统计杂草的鲜质量防效,可以发现,供试的5种杂草对异丙隆的敏感性存在显著差异,播娘蒿(Descurainia sophia)、藜(Chenopodium album)对药剂最敏感,ED90值分别为301.51,286.02 ga.i./hm2;看麦娘较敏感,ED90值为654.83 ga.i./hm2;而荠菜、雀麦不敏感。经回归分析发现,施药后2,4 d杂草的PPM值与用药后14 d的杂草鲜质量防效密切相关,其R2分别为0.968 8,0.942 5。这表明用药后早期的PPM值可以较好地预测除草剂对杂草防效和对冬小麦的安全性。当杂草的PPM值低于20时,异丙隆对杂草的鲜质量防效高于90%;而当PPM值高于40时,药剂对杂草的鲜质量防效低于50%;当小麦的PPM值高于60时,异丙隆对小麦的株高、地上部鲜质量基本无影响。当杂草的PPM值低于20,而冬小麦的PPM值高于60时,异丙隆的剂量即为最低致死剂量。

异丙隆在土壤中的淋溶迁移及其影响因素研究

采用室内土壤淋洗柱法,以黄褐土、砂姜黑土和水稻土为供试土壤,研究了异丙隆在土壤中的淋溶迁移行为,探讨了淋溶水量、淋溶水pH值、施药量和添加外源木炭等因素对异丙隆在土壤中淋溶迁移的影响。结果表明,不同土壤中异丙隆淋出率为黄褐土>砂姜黑土>水稻土;淋溶水量与异丙隆的淋出率呈正相关,且对淋溶后异丙隆在土层中的分布有明显影响;用不同pH值的淋溶水时,异丙隆的淋出率为pH5>pH9>pH7;施加不同药量时,异丙隆的淋出率为10mg>5mg>20mg;异丙隆的淋出率随外源木炭添加量的增大而减小,而异丙隆在土壤柱中的滞留量则随着木炭添加量增大而增大,提示添加外源木炭可明显减少异丙隆在土壤中的淋出率,降低异丙隆在土壤中的淋溶深度。

异丙酚复合芬太尼静脉全麻在隆乳术中的应用

目的:观察异丙酚、芬太尼复合静脉全麻应用于门诊隆乳手术的麻醉效果。方法:ASAI～II级门诊行隆乳手术的患者60例,麻醉前30min给予阿托品0.5mg,诱导用芬太尼0.1mg,咪唑安定2mg,然后接微量注射泵按3～8mg/kg/h的速度泵注异丙酚达所需麻醉深度并维持,分离胸大肌时加芬太尼0.05mg,手术缝合时停止泵注异丙酚。记录麻醉前、麻醉后、手术开始时、分离胸大肌时、术毕时的SBP、DBP、SPO2、HR及术毕清醒时间,术中记忆、术后头晕、恶心、呕吐的发生例数。结果:组内各时点SBP、DBP、SPO2、HR比较无显著差异(P>0.05),24例苏醒期间有轻微头晕,8例有轻恶心,但无呕吐。结论:异丙酚复合芬太尼用于隆乳手术的麻醉镇静、镇痛效果好,过程平稳,对呼吸、循环功能干扰小,不良反应少,是一种较理想的麻醉方法。

高效液相色谱法测定土壤中异丙隆及其降解产物对异丙基苯胺

利用高效液相色谱仪,建立了土壤中异丙隆及其降解产物对异丙基苯胺的分离测定方法。土壤样品采用超声波振荡提取,以乙腈为提取剂。色谱分析条件:C18色谱柱(4.6mm×150mm,粒径5mm),流动相乙腈∶水=70∶30(V/V),流速0.3mL·min-1,检测波长245nm。异丙隆和对异丙基苯胺标准曲线的线性范围为25￣200mg·L-1,线性相关系数分别为0.9946和0.9976,最低检测限分别为0.042和0.45mg·L-1,平均回收率分别为91.76%和92.57%,测定相对标准偏差分别为3.06%和2.95%。

低温和异丙隆对大麦生理生化特性的影响

以0,3,6,9 g.L-1异丙隆对大麦品种保大麦1号叶面喷施处理,24 h后分别在-2,0,2℃低温条件下处理4和8 h,随后测定其SOD活性、POD活性、可溶性蛋白质含量、MDA含量、脯氨酸含量、相对电导率和O.2-产生速率,结果表明:低温对各生理生化指标有显著影响,SOD较POD在活性氧清除中作用更大,所用异丙隆浓度并未对大麦产生明显的伤害作用。