异位子宫内膜细胞增殖及增殖动力学研究

目的 探讨异位内膜细胞的增殖特性及增殖动力学。 方法 对 1 0例异位内膜组织 (试验组 )及 1 0例正常内膜组织 (对照组 )进行原代培养 ,采用免疫细胞化学检测两组内膜 ki-67表达 ,采用流式细胞术检测两组细胞的细胞周期。 结果 ( 1 )异位内膜腺上皮细胞的 ki-67积分 ( 4.2 0± 0 .55)与正常内膜腺上皮细胞 ( 3 .90± 0 .70 )相当 ( P>0 .0 5)。异位内膜间质细胞 ki-67积分 ( 2 .92± 0 .58)与正常内膜间质细胞 ( 2 .60± 0 .3 7)相当 ( P>0 .0 5)。( 2 )异位内膜 G0 / G1、G2 / M、S期的比例分别为 ( 78.1 4± 3 .51 ) %、( 1 1 .53±2 .1 8) %、( 1 0 .3 2± 1 .72 ) %与正常内膜 ( 79.2 7± 2 .49) %、( 1 1 .53± 1 .43 ) %、( 9.2 0±1 .66) %相似 ( P>0 .0 5)。 结论 ( 1 )异位内膜细胞并非高度增殖 ;( 2 )

异位子宫内膜细胞中整合素α_5的表达及其性激素调控

目的:探讨异位子宫内膜细胞中整合素α5的表达及性激素对其的影响。方法:对18例卵巢子宫内膜异位症(EM)患者的异位子宫内膜组织行体外细胞培养并传代。传代培养中细胞分为非药物干预组(对照组)、雌二醇(E2)组、安宫黄体酮(P)组、米非司酮(RU486)组、三苯氧胺(TAM)组5组,细胞收获后用逆转录-聚合酶链反应技术检测各细胞组中整合素α5mRNA的表达。结果:整合素α5在E2组及P组的表达水平分别为1.415±0.286及1.304±0.170,与对照组的1.082±0.069相比,差异具有统计学意义(P<0.05),而TAM组及RU486组中整合素α5表达水平(分别为0.882±0.013及1.304±0.170)明显低于对照组(P<0.05)。结论:整合素α5表达受雌、孕激素调控,E2、P可能通过上调整合素α5的表达而促进EM粘附的发生,TAM、RU486可能通过拮抗E2、P或抑制异位内膜细胞分泌整合素5α分子而延缓EM的发展,从而起到治疗作用。

内异停对离体培养的子宫内膜异位症的异位子宫内膜细胞的直接抑制作用

家兔4只,分别以0 8g/mL内异停10mL/kg·d和0 0 8g/mL达那唑10mL/kg·d灌胃,每日一次,连续7d后,制备含药血清研究对内异症患者子宫内膜细胞生长的影响。发现内异停血清0 0 5g/mL ,0 0lg/mL和0 0 2 g/mL ,能显著抑制离体培养的内异症患者异位子宫内膜细胞的生长。而达那唑血清0 0 1g/mL无明显抑制作用。结论:内异停对人异位子宫内膜细胞的生长具有直接抑制作用。

莪术醇对子宫腺肌症异位子宫内膜间质细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的探讨莪术醇对子宫腺肌症异位子宫内膜间质细胞(EESCs)细胞增殖、凋亡及迁移的影响,为临床治疗子宫腺肌症提供理论依据。方法对EESCs进行分离、纯化培养及细胞鉴定。将传至第2—3代的EESCs细胞随机分为5组:Control组(加入质量浓度为10 mg·L-1的无水乙醇作用于EESCs)和莪术醇1、2、3、4组(分别加入质量浓度为12.50、25.00、50.00、100.00 mg·L-1的莪术醇作用于EESCs)。采用CCK-8法检测EESCs的细胞存活率,细胞划痕实验检测EESCs的细胞迁移率,流式细胞术联合FITC-Annexin V/PI双染色法检测EESCs的细胞凋亡率。结果分别用鼠抗人vimentin、cytokine抗体鉴定EESCs显示细胞纯度在95%以上,成功分离培养出原代EESCs细胞。与Control组比较,莪术醇1、2、3、4组24、48 h时EESCs细胞增殖率、24 h EESCs细胞迁移率均降低,EESCs细胞凋亡率均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。莪术醇1、2、3、4组24、48及72 h时EESCs细胞增殖率均低于96 h,莪术醇3、4组EESCs细胞凋亡率均较莪术醇1、2组升高,莪术醇4组EESCs细胞凋亡率较莪术醇3组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论莪术醇在体外能显著抑制子宫腺肌症EESCs细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡,具有潜在的治疗子宫腺肌症作用。

米非司酮与利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞凋亡的影响

目的 探讨米非司酮和利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞凋亡形态学和凋亡率的影响。方法 应用光学显微镜观察细胞生长状态 ;应用电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构 ,应用 TUNEL法观察细胞凋亡率。结果 两种抗孕激素以浓度 1× 10 - 6 mol/ L、培养 4 8小时 ,异位子宫内膜间质细胞开始出现早期细胞凋亡变化 ,随作用时间延长和浓度增加 ,细胞凋亡形态学变化更趋明显 ,细胞凋亡率增加 ,利洛司酮诱导细胞凋亡作用大于米非司酮。结论 抗孕激素米非司酮和利洛司酮以时间和剂量依赖性方式促进异位子宫内膜间质细胞的凋亡 ;

榆栀止血颗粒含药血清对异位子宫内膜间质细胞PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨榆栀止血颗粒含药血清对异位子宫内膜间质细胞(ESCs)中第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法:制备榆栀止血颗粒含药血清,体外培养人异位ESCs细胞,分为对照组(空白血清)、低剂量组(榆栀止血颗粒低剂量血清)、中剂量组(榆栀止血颗粒中剂量血清)和高剂量组(榆栀止血颗粒高剂量血清)。CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中PTEN mRNA表达情况;蛋白印迹(WB)法检测细胞中PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达情况。结果:与对照组相比,低、中、高剂量组异位ESCs细胞OD值、侵袭细胞数、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞中PTEN mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);随着榆栀止血颗粒含药血清剂量升高,异位ESCs细胞OD值、侵袭细胞数、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平逐步递减(P<0.05),细胞中PTEN mRNA及蛋白表达水平逐步递增(P<0.05)。结论:榆栀止血颗粒含药血清可抑制异位ESCs细胞增殖与侵袭,上调PTEN表达并抑制PI3K/AKT信号通路。

芳香化酶抑制剂对异位子宫内膜间质细胞NO/ET表达的影响和意义

目的:探讨NO/ET与异位子宫内膜间质细胞凋亡的关系以及芳香化酶抑制剂依西美坦的作用。方法:体外培养原位和异位子宫内膜间质细胞,应用发光免疫法检测雌二醇的水平,应用ELISA检测内皮素表达,用硝酸还原酶法检测一氧化氮,应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:与正常内膜间质细胞相比,异位内膜间质细胞可以合成雌激素,其NO和ET合成相应增加,但NO/ET比值下降,细胞凋亡率也相应降低(P<0.05)。依西美坦作用72 h后,异位内膜间质细胞雌激素合成减少,NO/ET比值增加,凋亡率相应升高(P<0.05)。结论:NO/ET比值可以预测异位子宫内膜间质细胞的凋亡情况,依西美坦可升调NO/ET比值并增加异位内膜间质细胞的凋亡。

依西美坦对异位子宫内膜间质细胞β-内啡肽表达的影响和意义

目的:探讨β-内啡肽对异位子宫内膜间质细胞凋亡的影响和芳香化酶抑制剂依西美坦的作用。方法:应用发光免疫法检测雌二醇的水平;应用免疫组织化学法检测β-内啡肽的表达;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:与正常内膜间质细胞相比,异位间质细胞可以合成雌激素,β-内啡肽的表达较低,凋亡率较低(P<0.05);依西美坦作用72 h后,异位间质细胞雌激素合成减少,β-内啡肽的表达增加,凋亡率升高(P<0.05);反向添加雌二醇后,异位间质细胞的β-内啡肽和凋亡率与异位间质细胞对照组无明显差异(P>0.05)。结论:β-内啡肽与异位子宫内膜间质细胞的凋亡有关,依西美坦经降调β-内啡肽的表达而增加异位内膜间质细胞的凋亡,反加雌激素可以阻断这一作用。

从异位子宫内膜分离获得的内膜干细胞的生物学特点

目的建立子宫内膜异位症(内异症)患者异位病灶来源子宫内膜干细胞(En SCs)的分离培养及鉴定方法,并对所分离细胞的生物学特性进行检测,为研究En SCs在内异症发病机制中的潜在作用提供支持。方法收集临床内异症患者异位病灶内膜组织样本,机械剪碎后Ⅰ型胶原酶消化,分离获得异位En SCs,常规培养传代(n=10);免疫荧光检测细胞波形蛋白(vimentin)的表达(n=3);MTT法检测细胞增殖活性(n=5);成脂成骨诱导检测细胞多向分化潜能(n=3),流式细胞仪检测细胞表面标志物(n=3);蛋白芯片检测细胞条件培养基中促血管再生因子及相关炎症因子的分泌(n=6),同时检测细胞表面相关黏附分子的表达(n=7)。结果成功从异位病灶中分离获得异位En SCs,所分离细胞强阳性表达骨架蛋白vimentin,且细胞阳性表达间充质干细胞表面标志物CD29、CD73、CD90及CD105,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45;经成脂诱导分化后油红O染色可见明显脂滴,成骨诱导分化后茜素红染色可见明显钙结节;蛋白芯片检测结果表明,异位En SCs能够分泌高浓度的促血管再生因子血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素(ANG)及血小板衍生生长因子(PDGF)-AA,以及与促血管再生密切相关的炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),且细胞表面高表达活化白细胞黏附分子(ACLAM)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)。结论本研究成功建立内异症患者异位病灶来源En SCs的分离培养及鉴定方法;对其活性因子分泌的研究表明,异位En SCs具有明显的促血管再生作用。上述实验结果肯定了内异症患者异位病灶中干细胞的存在,在支持内异症发病机制中"干细胞学说"的同时,为进一步围绕异位En SCs开发潜在的内异症治疗靶点提供可能。

人参皂苷Rg3对子宫内膜异位症组织中ID-1基因表达的影响

本研究采用SupperArray功能分类基因芯片检测的方法,探讨体外培养的经人参皂苷Rg3作用后子宫内膜异位症（EMs）患者在位、异位子宫内膜细胞中ID-1基因的表达,旨在了解其在EMs发病机制中的作用。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨三棱-莪术含药血清对人异位子宫内膜间质细胞增殖、凋亡和迁移的影响

基于酪氨酸蛋白激酶(Janus kinase, JAK)2/信号传导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription, STAT)3信号通路,研究三棱-莪术含药血清对异位的子宫内膜间质细胞(ectopic endometrial stromal cells, ESCs)增殖、凋亡、迁移和炎症因子分泌的影响。原代培养ESCs,噻唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)检测不同质量分数(5%、10%、20%)三棱、莪术、两药配伍的含药血清和AG490溶液(50μmol·L^(-1))对ESCs增殖的影响,并由此选择最优剂量用于后续实验;将细胞分为空白血清组、三棱组(10%)、莪术组(10%)、配伍组(10%)和AG490组,以流式细胞术检测ESCs凋亡水平,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α分泌水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, caspase)-3、B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma, Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的蛋白表达以及JAK2、STAT3蛋白的磷酸化水平。结果显示,与空白血清组相比,各给药组均能使ESCs的活力显著降低(P<0.01),尤其10%含药血清细胞活力低于其他组,因此后续实验采用10%的含药血清进行观察。10%的三棱、莪术和两药配伍的含药血清均能使细胞凋亡率显著增加(P<0.01),细胞中caspase-3和Bax蛋白表达均显著升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),细胞迁移率显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞分泌的IL-1β、IL-6和TNF-α显著减少(P<0.05或P<0.01),JAK2和STAT3的磷酸化水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与三棱、莪术组相比,10%配伍组含药血清孵育后细胞活力更低(P<0.01),caspase-3和Bax蛋白表达较高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达更低(P<0.05),JAK2蛋白磷酸化程度较低(P<0.05)。10%配伍组含药血清孵育后,细胞凋亡率明显高于莪术组(P<0.05),细胞的迁移率明显低于莪术组(P<0.01),对STAT3蛋白磷酸化的抑制作用明显强于三棱组(P<0.05)。三棱、莪术及其配伍应用改善子宫内膜异位症的作用机制可能与阻断JAK2/STAT3信号通路,抑制ESCs增殖,促进细胞凋亡,减弱其迁移能力,减少炎症因子的分泌有关,并且三棱-莪术等比配伍效果优于两药单用。