免疫抑制缓释用于治疗同种异体复合组织移植的研究进展

同种异体复合组织移植(Vascularized composite allotransplantation,VCA)是帮助肢体和颜面部等组织严重毁损的患者重建功能、恢复美观的重要手段之一。VCA患者术后需要接受终身的免疫抑制治疗,抑制免疫排斥反应。长期免疫抑制剂管理易引发各种机体的毒副反应,影响生活质量,甚至威胁生命安全。免疫抑制局部缓释治疗可以提高移植物局部的药物浓度,减轻全身毒副作用,相对于全身用药具有一定优势。本文对目前基于各种生物材料的局部缓释给药系统在VCA中的应用进行综述。

同种异体复合组织移植Banff移植病理学诊断标准及进展

同种异体复合组织移植(CTA)是一门新兴的用于治疗功能性组织或肢体缺损的移植学科,由于绝大多数CTA移植物为带血管的移植物,因此也称为带血管的复合组织移植(VCA)。CTA/VCA的移植物包含同种异体的皮肤、皮下组织、骨骼、肌肉、神经和血管等两种或多种组织结构成分。由于大多数CTA/VCA移植物中带有皮肤组织,而皮肤组织是抗原性最强的免疫成分,移植术后的急性排斥反应是导致CTA/VCA移植失败及其移植物失功的首要障碍,因此CTA/VCA移植物中的皮肤排斥反应的组织病理学特征成为首要的关注点。本文就CTA/VCA的排斥反应等病理学特征、2007年Banff诊断标准及其研究进展予以综述,以期为CTA/VCA的排斥反应及其他并发症的诊断及治疗提供参考。

异体复合组织移植皮肤淋巴引流隔绝动物模型的建立

目的:通过SD大鼠下腹部游离皮瓣及皮管的移植,建立大鼠异体复合组织移植皮肤淋巴引流隔绝模型。方法:7～8周龄雄性SD大鼠切取下腹部皮瓣并游离行同种异体移植,皮肤隔离组(A组):将供体皮瓣边缘对合、缝合成管状,底边留血管蒂出口用隔离器隔离皮肤,显微外科吻合血管,皮管缝合于隔离器,隔离器固定于受体;皮肤未隔离组(B组):将供体游离皮瓣卷制成管状,显微外科吻合血管并将供受体皮肤对位缝合;空白对照组(C组):行下腹部游离皮瓣异体移植。大体观察每组皮瓣或皮管存活时间,于术后3、5、7、14、28、35d取移植物皮肤组织行HE染色,观察病理学变化。结果:A组:皮管存活时间为32(34,32)天;B组:皮管存活时间为15(16,15)天;C组:皮瓣存活时间为6(7,6)天。A组与C组、B组与C组、A组与B组存活率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验成功建立了大鼠的异体复合组织移植淋巴引流隔绝模型,并证实了隔绝皮肤淋巴引流能有效延长移植物的存活时间。

局部转染CTLA-4Ig抑制大鼠异体复合组织移植急性排斥反应的研究

目的:观察腺病毒介导融合基因细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T-lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4Ig)局部转染大鼠同种异体移植的复合组织对急性排斥反应的抑制作用。方法:以近交系Brown Norway大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,采用腹部游离皮瓣作为异体复合组织移植(composite tissue allotransplantation,CTA)模型。将受者分为3组,A组(空白对照组):异体皮瓣离体保存时不感染腺病毒,只灌注PBS溶液;B组(阴性对照组):异体皮瓣离体保存时灌注携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-EGFP);C组(基因治疗组):异体皮瓣离体保存时灌注AdCTLA-4Ig。术后观察各组移植皮瓣的排斥情况及存活天数,进行组织病理学检查,并观察CTLA-4Ig在移植组织中的表达情况及对急性排斥反应的抑制作用。结果:①A组、B组皮瓣移植物平均生存时间分别为(7.8±1.5)天和(7.1±1.6)天,C组移植皮瓣平均存活时间为(10.4±2.3)天,C组存活期长于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01);②移植皮瓣病理学检查:术后第7天,A组与B组移植皮瓣均发生严重急性排斥反应,而C组排斥反应较A组和B组轻微,但C组术后第11天也表现出严重急性排斥反应;③移植前后血清白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)水平:各组移植术后早期发生急性排斥反应时,IL-2均有明显升高,但实验组血清IL-2水平在第3天、第7天时均明显低于两对照组(P<0.01)。结论:建立了一种新的异体复合组织移植局部基因转染模型,皮瓣灌注AdCTLA-4Ig能获得融合基因在移植复合组织中的表达,局部产生的CTLA-4Ig能抑制急性排斥反应的发生,延长移植物存活时间。

脂肪干细胞在同种异体复合组织移植中的作用及其临床应用展望

同种异体复合组织移植是临床修复重建的重要手段,但术后长期应用免疫抑制剂所导致的副作用仍是亟待解决的难题,细胞治疗联合传统免疫抑制剂治疗有望解决这一难题。间质干细胞,特别是脂肪干细胞,被认为可用于延长移植物存活及改善免疫排斥情况的发生。其在同种异体复合组织移植中发挥的作用包括旁分泌免疫调节因子抑制免疫排斥反应、诱导调节性T细胞产生、形成嵌合体诱导免疫耐受,以及改善移植过程中缺血再灌注损伤等。但是,该方法要真正应用于临床前,相关问题如使用剂量、时机及安全性等仍需经过进一步深入研究。

移植物局部引流淋巴结对异体复合组织皮瓣移植后存活时间的影响

目的:探讨移植物局部引流淋巴结在异体复合组织移植中是否参与了早期的排斥反应,干预淋巴结后能否延长皮瓣存活时间。方法:BN大鼠作为供体、Lewis大鼠作为受体,进行腹部游离皮瓣异体移植。将大鼠随机分为三组,A组:正常移植;B组:术中去除受体移植区域引流淋巴结;C组:将皮瓣卷成皮管,利用硅胶管隔离移植物和受体之间的皮肤接触,仅保留血管相通。观察三组皮瓣存活状态,术后不同时间点对各组皮瓣HE染色和血清白细胞介素-2(IL-2)水平检测。结果:B、C组皮瓣存活时间相对于A组均延长(均P<0.05)。A组3 d皮瓣出现水肿和出血点,B、C组在7 d以后才出现不同程度的水肿和出血点。A组相较于其他各组,IL-2表达水平明显升高,在排斥终点(术后第7天)达到最大;B、C组在术后第7天IL-2表达水平分别为(145.15±4.2)ng/L和(96.28±4.62)ng/L,A组与B、C组比较有统计学差异(均P<0.05)。结论:移植物局部引流淋巴结在免疫排斥早期起着关键的作用,移除移植物局部引流淋巴结可以延长皮瓣存活时间。如果早期能够干预引流淋巴结,就有可能减少效应T细胞的产生,从而减轻移植物的排斥反应。

吲哚胺2,3-双加氧酶基因修饰BMSCs在大鼠同种异体复合组织移植免疫排斥反应中的作用研究

目的探讨吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine2，3-dioxygenase，IDO）基因转染修饰大鼠BMSCs对同种异体复合组织移植免疫排斥反应的影响及其机制。方法以IDO过表达慢病毒IDO[绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）1-Lenti转染供体4～6周龄BN大鼠来源的第3代BMSCs，筛选目的基因高表达、具有生物活性的细胞株IDO-BMSCs。行RT-PCR、Westernblot检测基因修饰前后BMSCs中IDOmRNA及蛋白表达，通过测量培养上清犬尿氨酸生成量检测IDO生物学活性。在混合淋巴细胞反应体系中以IDO-BMSCs、反应细胞（受体4～6周龄LEWIS大鼠来源外周血单个核细胞）和刺激细胞（供体BN大鼠来源外周血单个核细胞）混合培养，细胞比例分别为1：5：5、1：10：10、1：50：50及1：100：100（实验组1、2、3、4）：每个反应体系另设IDO阻断孔，加入1mmol／LIDO特异性抑制剂1-甲基色氨酸（1-methyl．tryptophan，1-MT）；以IDO-BMSCs与反应细胞（1：5）培养为阴性对照组，刺激细胞与反应细胞（1：1）培养为阳性对照组，IDO-BMSCs在RPMll640培养基中单独培养作为空白对照组。于培养5d，采用MTT法检测T淋巴细胞增殖情况。进一步制备大鼠同种异体肢体移植模型，将GFP-BMSCs（A组）、IDO-BMSCs（B组）及生理盐水（C组）分别经尾静脉输入移植模型，观察移植物存活时间及免疫排斥反应。结果基因修饰后，BMSCs中IDOmRNA及蛋白表达显著提高。IDO-BMSCs较GFP-BMSCs可明显提高培养上清中犬尿氨酸含量（P〈0．05）。加入1-MT前，实验组1、2、3的T淋巴细胞增殖率随IDO-BMSCs与反应细胞比例逐渐减少而不断增加，组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；实验组4的T淋巴细胞增殖率与阳性对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。加入1-MT后，除实验组4的T淋巴细胞增殖率与加入前比较差异无统计学意义（P〉0．05）外，其余各实验组均高于加入前（P〈0．05）。体内输入后，IDO—BMSCs可在移植物内定植，抑制免疫排斥反应的发生；A、B、C组移植物存活时间分别为（11．5±0．6）、（14．5±0．8）、（9．0±0.3）d，B组存活时间明显长于A、C组，A组长于C组（P〈0．05）。结论ID0-BMSCs可促进大鼠同种异体复合组织移植物的成活，其机制与抑制T淋巴细胞增殖、促进BMSCs向移植物内定植有关。

同种异体复合组织移植的优势与风险

目的综述同种异体复合组织移植的研究进展,分析其优势及不足,展望可能的发展方向。方法广泛查阅同种异体复合组织移植相关文献,从常规修复重建外科治疗的局限性、同种异体复合组织移植的定义、潜在优势及治疗风险等方面进行综述。结果国内外同种异体复合组织移植的临床实践表明其疗效优于常规修复重建方法,但免疫抑制疗法带来的风险仍然是同种异体复合组织移植推广于临床的主要制约因素。结论免疫抑制治疗的发展为同种异体复合组织移植开拓了巨大发展前景,如何降低免疫抑制治疗风险将是今后同种异体复合组织移植领域的主要研究方向。

间充质干细胞在同种异体复合组织移植中的免疫调节作用

同种异体复合组织移植修复大面积和特殊部位组织缺损（肢体、颜面、阴茎等），无疑是修复重建外科理想的方法。但是移植后长期大剂量免疫抑制剂治疗常导致感染、糖尿病，甚至恶性肿瘤等并发症，成为临床开展同种异体复合组织移植的障碍。因此，探索诱导免疫耐受的方法以减少免疫抑制剂用量，成为亟待解决的课题。

同种异体肺和复合组织序贯移植大鼠模型研究

目的探讨大鼠同种异体序贯复合组织移植(SCTA)对先前实质器官移植免疫效应的影响。方法取WKY大鼠左肺原位移植到F344大鼠,应用Cuff技术分别吻合左肺动脉、左肺静脉及主支气管。术后对F344大鼠应用环孢素(CsA)5 mg/kg隔日皮下注射,共10 d;以呼吸频率检测移植左肺功能。肺移植后第11天,取Brown Norway大鼠腹部3 cm×3 cm肌皮瓣原位移植至F344大鼠,皮瓣吻合血管为股动脉和股静脉,皮瓣移植后停止应用免疫抑制剂。同种异体复合组织移植(CTA)10 d后,取移植皮瓣和肺组织行组织病理学检查,观察排斥反应。结果大鼠肺移植手术成功率90%,CTA手术成功率100%,SCTA成功率90%。移植肺的呼吸频率从移植10 d后(应用免疫抑制剂10 d)的(61±10)次/min增加到移植20 d后(停用免疫抑制剂10 d)的(75±15)次/min。移植肺显示出典型的急性免疫排斥反应,包括血管周围及肺组织内弥漫的淋巴细胞浸润。自体移植腹壁皮瓣病理组织学检查未发现免疫排斥反应,CTA术后皮瓣显示典型血管周围及皮瓣内弥漫的淋巴细胞浸润。结论 SCTA大鼠模型的建立对于实质器官移植后CTA及二次移植免疫抑制方案的研究具有重要意义。

同种异体复合组织移植的免疫研究进展

目的了解同种异体复合组织移植的免疫研究进展。方法查阅相关文献,对同种异体复合组织移植的免疫特点、实验进展、临床经验等进行总结。结果同种异体复合组织位于体表,包含组织成分复杂,抗原性高。其移植后在免疫抑制剂用药方案、排斥反应的诊断以及慢性排斥反应发生率等许多方面同内脏器官移植有不同的特点。结论在下一步研究中,应吸取同种异体复合组织移植独特的经验教训,在诱导耐受、局部用药、排斥诊断等方面树立同种异体复合组织的独特标准。

异体复合组织移植动物模型的选择

异体复合组织移植是外科修复的一个重要手段,在整形科、骨科、普通外科、眼科等多个临床学科均有开展,近些年也获得了相关基础实验和临床病例上的重要成就.其中基础实验中动物模型也种类繁多.本文仅针对异体复合组织移植实验中动物模型的选择进行了回顾,主要分为实验中较常见的主要模型(其中又分为皮瓣、肢体、颜面、耳廓等4种模型)以及比较专科、少见的其他模型(眼球、带血运骨、腹壁模型),以期望对基础研究和临床应用提供参考.

复合组织异体移植后功能恢复的研究进展

复合组织异体移植（composite tissue allotra nsplantation，CTA），如手、颜面、喉、腹壁移植等，相对于组织结构相对单一的肾、肝、心、肺等实质性内脏器官移植而言，是指两种或两种以上组织结构的异体移植，包括皮肤、皮下组织、骨、肌肉、神经、血管等组织的部分或全部。实体器官移植常常是为了挽救患者生命，而复合组织移植的目的在于修复患者某个功能部位的缺失，

复合组织异体移植的局部免疫抑制剂治疗

复合组织异体移植(Composite tissue allografts,CTAs)在严重烧伤、创伤性损伤、肿瘤以及先天性疾病等原因导致的周围组织缺损的结构和功能重建方面具有巨大的临床应用前景。一系列的动物实验证明,在使用免疫抑制剂的条件下,异体移植的皮肤、肌肉、骨、神经、关节、肢体等复合组织或其成分可以长期存活,并达到与自体移植相同的功能,但一旦停止使用免疫抑制剂,很快就会发生免疫排斥反应。免疫抑制剂的长期使用可导致机体免疫功能低下,可能发生严重的感染、恶性肿瘤等并发症。在重要的内脏器官的异体移植中使用免疫抑制治疗是合乎情理的,但将它应用于非生命必须的复合组织的异体移植就难以让人接受了。因此现在妨碍复合组织异体移植应用于临床的主要障碍是缺乏特异、安全、有效的免疫抑制药物,设法减少免疫抑制剂的用量也许有助于克服这一难题。

美国的血管化复合组织异体移植——OPTN数据分析

器官获得和移植网(Organ Procure Transplantation Network,OPTN/United Network for Organ Sharing,UNOS)于2014年6月3日起负责监测全美的血管化复合组织(vascularized composite allograft,VCA)的获取与移植。截至2017年12月31日,美国共批准27家中心的61个VCA项目,15家中心的50例患者列入术前等待名单。14个项目组已开展28例VCA移植,包括10例上肢移植、10例子宫移植、5例颅面移植、1例头皮移植、1例腹壁移植和1例阴茎移植。

异体脸面移植的研究进展

目的追溯国内外有关异体脸面移植的发展及应用。方法广泛查阅近年来关于异体脸面移植的文献进行综述。结果由于异体脸面移植技术的复杂性以及涉及免疫、心理、社会、伦理等各种问题,迄今为止尚有各种争论。结论异体脸面移植将使严重毁容患者从这项新技术中受益。