大鼠胚胎卵巢异体异位移植的研究

为了解胚胎卵巢异体异位移植后的存活和生长发育情况 ,将大鼠胚胎卵巢分别移植到去势雌鼠颈部皮下或肾被膜下 ,HE染色观察。移植后第 1 0天时移植物周围有结缔组织包裹 ,内有原始卵泡 ;移植后第 2 5天开始 ,移植物内可见大量发育卵泡及黄体与间质腺 ,移植卵巢中有丰富的血管。移植后平均 2 2天阴道上皮细胞出现周期性改变。细胞化学及免疫组织化学反应显示 :移植 3 5天后卵巢的卵泡膜内层细胞 3 -β羟甾脱氢酶呈阳性反应 ,卵巢血管内皮细胞碱性磷酸酶和 ATP酶为阳性 ;雌 ,孕激素及其受体反应强度与正常对照无明显差异。放射免疫法测定血清雌激素 ,孕激素 ,卵泡刺激素 (FSH)及黄体生成素 (L H)显示 ,移植 3 5天后 ,FSH和 L H的浓度接近正常。以上结果说明胚胎卵巢能在异体异位存活。

成年大鼠卵巢异体异位移植的实验研究

目的 :探讨大鼠卵巢组织异体异位移植后的生长发育及功能情况。方法 :将成年大鼠卵巢组织植入去势成年雌性大鼠的肾被膜下 ,观察动情周期的恢复及维持 ,通过组织学和组织化学研究移植效果和测定血清雌激素水平观察卵巢内分泌功能。结果 :移植后 13 55± 2 81d出现动情周期 ,对移植卵巢的组织学观察可见不同发育阶段的各级卵泡及间质腺 ;3- β -羟甾脱氢酶组织化学显示它们呈不同程度阳性反应 ;血清学研究显示移植卵巢具有与正常卵巢相近的分泌雌激素的能力。结论 :大鼠卵巢异体异位移植能存活。

新生大鼠卵巢异体异位移植的实验研究

目的 :探讨新生大鼠卵巢异体异位移植后的生长发育及功能。方法 :将新生大鼠的卵巢移植入去势成年雌性大鼠的肾被膜下 ,移植 5 0d后取材进行组织学及组织化学研究 ,观察移植效果 ;同时测定血清雌激素水平。结果 :受体在移植后第 16 6 0± 7 4 1d出现动情周期 ,移植物内可见不同阶段的发育卵泡和间质腺 ;3- β -羟甾脱氢酶组织化学染色显示它们呈不同程度的阳性反应 ;血清E2 水平与正常成年大鼠间无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :新生大鼠卵巢异体异位移植后能继续生长发育并具有内分泌功能。

新生小鼠睾丸组织异体异位移植物中精子形态及功能的研究

目的采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术探讨新生小鼠睾丸组织异体异位移植到裸鼠体内后所生成精子的受精能力。方法将含有原始生精细胞的新生1-2 d小鼠睾丸组织异体异位移植到BALB/c-nu/nu免疫缺陷小鼠背部皮下。8周后取出移植物,通过常规染色和电镜技术对生精小管中生精细胞组成和形态进行观察;以薄层明胶水解法检测精子顶体蛋白酶活性;采用ISCI技术检测移植物中具有成熟形态精子的受精能力。结果移植物的HE染色发现,新生小鼠睾丸组织在裸鼠体内已启动并进行精子发生过程,生精小管中含有包括精子在内的所有类型生精细胞;移植物组织经处理后,可计数到具有镰刀头状的长尾精子约1×103个/mg移植物;透射电镜标本中观察到的精原细胞和精母细胞均具有正常超微结构;薄层明胶水解法检测可观察到顶体蛋白酶呈阳性反应的精子;ICSI结果显示,单纯ICSI处理组与ICSI+电激活组均有受精和卵裂现象发生。结论仅含有原始生精细胞的新生小鼠睾丸组织在异体异位移植到裸鼠体内后,可以产生形态正常并具有受精能力的精子。

母兔卵巢异体异位移植的实验研究

目的:建立雌兔异体卵巢组织移植模型,探索非血管吻合卵巢组织移植的可行性。方法:以雌兔为实验动物,A组:阳性对照,不做任何处理;B组:阴性对照,切除双侧卵巢;C组:卵巢组织异体异位移植组,分离卵巢组织,切成约1mm×1mm×1mm大的组织块,移植于异体颈部皮下,术后观察阴道脱落细胞涂片变化,同时于移植后第18、25、35、45、55天检测血清E2及P水平,60天处死母兔,对移植物及子宫内膜进行组织学检查。结果:(1)C组3只雌兔阴道呈红色或粉红色、湿润、肿胀,进入发情期;(2)A、C组术后25天血清E2及P水平均高于B组,并逐渐下降,35天达到最低水平,随后又呈上升趋势,至55天已明显高于B组(P<0.05),B组则始终维持在较低水平,未出现升高趋势;(3)A、C组卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡。结论:兔卵巢组织异体异位移植后移植物可存活,并释放内源性激素,对靶器官产生作用。

大鼠牙胚同种异体异位移植的组织学观察

目的:观察牙胚在同种异体大鼠体内不同部位的发育情况,为进一步组织工程化牙齿的构建探寻合适的体内生长环境。方法:将封闭群SD仔鼠第一磨牙牙胚分别植入SD成年大鼠肾被膜下、肠系膜内、腹膜外间隙、腹腔内和口腔黏膜下,3周取材,HE染色,观察移植牙胚的发育情况。结果:牙胚在肾被膜下和肠系膜内生长良好,釉质和牙髓牙本质复合体继续发育,牙本质小管结构清晰可见;腹膜外间隙和腹腔内牙胚均未进一步发育,且牙髓腔内和移植物周边淋巴细胞浸润明显;口腔黏膜下未回收到移植物。结论:封闭群SD大鼠肾被膜下和肠系膜内环境有利于同种异体牙胚的生长,可为组织工程化牙齿的体内构建提供新的发育环境。

兔异体异位下丘脑-垂体移植的实验

目的 探讨幼兔的下丘脑 -垂体异体异位移植后 ,细胞成活及内分泌重建的可能性 .方法 以徒手定向穿刺成兔垂体区 ,射频毁损垂体建立去垂体动物模型 ,将制备好的幼兔下丘脑 -垂体组织植入模型兔的臀部肌肉内 ,放免测定术后 1,3及 8wk血清 T4,PRL,GH水平 .结果 垂体去除组上述激素水平持续下降 .移植组术后 8wk上述激素恢复到术前水平 .术后 3 wk移植物 HE染色见垂体及下丘脑细胞结构良好 .术后 8wk透射电镜下见垂体细胞结构正常 ,胞质内有大量的分泌颗粒 ,下丘脑神经细胞明显增生 ,部分细胞变形、空化 ,突轴终末有较多的神经分泌颗粒 .结论 下丘脑 -垂体细胞的异体异位移植 ,其细胞组织学分化良好 。

幼猪同种异体异位肾移植技术探讨

目的研究大动物活体肾移植的外科技术。方法应用氯胺胴、安定静脉麻醉,游离供体左肾动、静脉及输尿管,切取左肾,离体灌注后备用。游离受体腹主动脉、下腔静脉。将供肾动、静脉分别与受体腹主动脉、下腔静脉作端侧吻合,供体输尿管与受体膀胱吻合后单J管从腹壁引出作外引流。结果22头幼猪共完成15例次活体肾移植手术。移植肾冷缺血时间为35～70min,血管吻合时间为28～52min。手术中死亡3例,其中2例(供、受体各1例)死于麻醉过深,1例死于肺动脉血栓栓塞。出现输尿管膀胱吻合口尿瘘1例,输尿管狭窄1例。结论娴熟的外科技术和良好的人员配合是大动物活体肾移植成功的基础,是减少术后并发症的关键。

异体异位发育小鼠睾丸组织中精子蛋白17的表达研究

目的采用已建立的未成熟睾丸组织移植模型,研究异体异位生长发育的小鼠睾丸组织中精子蛋白17的表达情况,以评估该移植模型在生殖医学中应用的可行性。方法以1-2天小鼠睾丸组织为供体,7-12周雄性免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植;移植8周后收取移植物组织,采用荧光定量PCR法检测移植物中精子蛋白17的基因Spa17的表达,用免疫荧光法和western blot检测精子蛋白17的表达,并与其在正常小鼠睾丸组织的表达进行对比。结果基因检测显示,Spa17在移植物中的表达与其在8周正常小鼠睾丸组织中表达相比有下调;蛋白分析提示,SP17在8周正常小鼠睾丸组织中表达而在小鼠睾丸组织移植物中表达缺失。结论移植物中在精子的精子运动和受精功能中发挥作用的精子蛋白17的基因表达下调及蛋白表达缺失提示,异体异位睾丸组织移植在临床应用的可行性还需进一步评估。

甲状旁腺异体异位移埴术的配合

我院器官移植研究组在动物不灌洗带血管甲状腺连同甲状旁腺移植实验研究成功的基础上,自1986年6月起在国内首创应用不灌洗技术为16例甲状旁腺功能低下的患者施行了带血管甲状腺—甲状旁腺异体异位移植手术,获得成功,远期疗效满意。本文就该手术的术前准备、术中配合及注意事项讨论如下。

小鼠卵巢冷冻移植后卵泡发育和卵母细胞成熟的研究

本研究探讨了冷冻保存的1日龄小鼠卵巢异体异位移植后,其原始卵泡重新启动生长发育的能力。一日龄B6C2F1 小鼠卵巢分离冷冻后置液氮中保存,保存1周-6个月后解冻,并将卵巢移植到8-12周龄B6C2F1受体鼠肾脏包膜下,移植至少14 d。每侧肾囊移植2枚卵巢的40只受体鼠中卵巢的回收率为45．00％(72/160),而每侧肾囊移植1枚卵巢的20只受体鼠的回收率为82．50％(33/40)。移植卵巢上卵泡的发育基本与体外自然生长鼠的卵巢卵泡发育情况一致。对卵巢移植 19 d的受体鼠用孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)处理后,从移植卵巢上发育成熟卵泡中获得的卵母细胞在MEMα培养基中培养16-17 h,有40．90％,的卵母细胞发生生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD), 其中89．02％的卵母细胞发育到第二次减数分裂中期(metaphase Ⅱ,MⅡ)。将剩余的卵母细胞继续培养到20-21 h,又有50．83％的卵母细胞发生生发泡破裂,但其中只有21．40％的卵母细胞能够发育到MⅡ期。以上结果说明,小鼠早期卵巢经过冷冻- 解冻并异体异位移植后,其原始卵泡能够重新启动生长发育,发育后的卵泡卵母细胞能够在体外培养成熟。这些结果意味着原始卵泡或卵巢冷冻-移植技术有可能充分利用雌性生殖细胞用于濒危动物保种、建立动物基因库和人类辅助生殖等。

FSH干预对小鼠玻璃化冻融移植卵巢血流重建的影响

目的观察小鼠卵巢玻璃化冻融中卵泡刺激素(FSH)干预对移植48h卵巢血流重建的影响及相关机制。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG),0.3IU·mL-1FSH干预玻璃化冻存组(FSH-VG),采用卵巢异体肾被膜下移植技术,于移植48h通过卵巢形态学观察、荧光血管灌注、EdU检测细胞增殖情况、免疫组织化学及western-blot方法观察并分析血流重建的影响因素。结果小鼠玻璃化冻融卵巢移植48h,与VCG比较,FSH-VG血流灌注较广,且达到卵巢近中央部;FSH-VG组正常卵泡百分比明显高于VCG组(P<0.01),VCG组闭锁卵泡百分比明显高于FSH-VG组(P<0.01),增殖细胞主要为卵巢间质细胞。FSH-VG组CD34、PCNA蛋白表达高于VCG(P<0.01)。结论玻璃化冻融过程中的FSH干预可加速小鼠卵巢冻融后移植的血流重建,CD34及PCNA表达上调。

兔同种异体异位膝关节移植模型的建立

目的 建立兔同种异体异位膝关节移植实验动物模型。 方法 在观察兔的下肢解剖的基础上 ,设计兔同种异体异位膝关节移植术 ;观察吻合血管同种异体膝关节移植组的自然病程。 结果 兔吻合血管同种异体膝关节移植共 9例 ,移植成功 7例 ,移植物平均存活 ( 13 5 7± 0 79)d ,移植物液化坏死 ,受体生命体征受排斥反应影响大。 结论 兔同种异体异位膝关节移植模型操作简便 ,表现稳定 ,适用于复合组织移植免疫的研究。

异体异位发育小鼠睾丸组织中精子功能相关基因和蛋白的表达研究

目的采用已建立的未成熟睾丸组织移植模型，研究异体异位生长发育的小鼠睾丸组织中精子功能相关基因Asrgll、Gpx4、Asp、Prdx4和spa17及其相关蛋白GPX-4和PRX-IV的表达，以进一步评估该移植模型在生殖医学中应用的可行性。方法以1-2d小鼠睾丸组织为供体，7-12周雄性免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植；移植8周后收取移植物组织，采用荧光定量PCR法检测移植物中Asrgll、Gpx4、Asp、Prdx4和spa17的表达情况，并与正常小鼠睾丸组织进行对比；同时采用Western blot检测GPX-4和PRX-IV2种蛋白的表达情况。结果基因检测显示，5种受试基因在移植物中的表达与8周正常小鼠睾丸组织相比均有下调；蛋白分析提示，GPX-4和PRX-IV2种蛋白在8周正常小鼠睾丸组织中表达而在小鼠睾丸组织移植物中表达缺陷。结论几种主要在精子运动、精子项体形成及精子的受精功能中发挥作用的基因和蛋白在移植物中表达下调及缺失提示。

新型组织工程带瓣管道异种异位移植模型的建立

目的构建一种操作简便、重复性高的小动物带瓣管道异种异位移植模型。方法实验组采用四分枝聚乙二醇交联去细胞的sD大鼠肺动脉带瓣管道作为移植物，以端端吻合方式间断缝合于新西兰白兔右颈总动脉，术后第7、14、28天行多普勒超声检查管道通畅情况，28d后取出管道行石蜡切片形态学检查。对照组大鼠接受假手术。结果手术成功率实验组96．0％（24／25），对照组100．O％（20／20），28d实验组移植管道通畅率87．5％（21／24），对照组吻合VI通畅率95．0％（19／20），两组间差异均无统计学意义（P〉0．05），苏木素-伊红（HE）染色可见局部无明显炎症细胞浸润，瓣膜形态、结构完整。结论此模型操作简便、构建迅速、成功率高，有助于检测组织工程瓣膜在体性能。

小鼠原始生精细胞裸鼠皮下移植动物模型的制作

目的制作睾丸组织异体异位移植动物模型,并观察原始生精细胞在异体异位继续生长、发育情况。方法将鼠龄为1～2d昆明小鼠睾丸组织移植至去势裸鼠背部(n=29),于移植后30～110d取出移植物,观察移植物的生长情况、表观形状以及各级生精细胞、生精上皮发育的期相情况。结果术后29只受鼠全部存活,在其背部均观察到移植物的生长,移植物直径由移植前的(0.73±0.05)mm增加到(6.75±0.73)mm,湿重由移植前(5.67±0.72)mg增加到(113.12±78.23)mg,受鼠皮肤血管已广泛深入到移植物内;光镜下可见移植物中生精小管结构清晰,移植物与受鼠皮肤之间建立了紧密连接,移植物中含有各级生精细胞及精子,在过碘酸Schiff(PAS)染色的移植物标本可见整个精子发生周期(从StageⅠ到StageⅫ)各阶段的生精细胞。结论新生小鼠睾丸组织移植到去势裸鼠背部能够继续生长、发育,可作为研究生精细胞增殖发育规律和精子发生调控机制的动物模型。