脱细胞异体神经移植物联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊神经节的保护作用及机制

目的探讨脱细胞异体神经移植物(ANA)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节的保护作用及机制。方法选取50只雄性SD大鼠,10只制备ANA;40只随机分为正常组、模型组、ANA组和联合组,每组10只。分离右侧坐骨神经,于梨状肌下缘5 mm处去除10 mm制备SNI模型。ANA组将制备好的ANA连接在损伤神经的两断端处。联合组于ANA连接术后2 d采用电子针疗仪电针“环跳穴”和“阳陵泉穴”,15 min/d,7 d为1个疗程,共4个疗程。电生理检测各组大鼠坐骨神经传导速度,评估受损轴突再生情况;尼氏染色观察脊神经节中神经元的形态结构;Western blotting和免疫荧光法检测脊神经节中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经传导速度明显降低(P<0.01);神经节神经元中的尼氏体因肿胀、溶解导致结构不完整,数量显著减少(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ANA组和联合组大鼠坐骨神经传导速度明显增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体损伤减弱,数量明显增加(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与ANA组比较,联合组大鼠坐骨神经传导速度显著增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体形态较规则,数量明显增加(P<0.01);NGF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论ANA联合电针可提高大鼠坐骨神经传导速度,改善神经节中神经元的形态结构,发挥对脊神经节神经元的保护作用,其机制可能与提高神经元中NGF和BDNF蛋白的表达,尤其是NGF蛋白的表达相关。

经雷公藤预处理大鼠异体神经移植后早期组织形态及免疫学观察

目的观察经雷公藤预处理大鼠异体神经移植后髓鞘损伤程度及急性期免疫排斥反应,探讨雷公藤早期免疫抑制作用及合适用药浓度。方法取60只3月龄雄性SD大鼠制备右侧坐骨神经干缺损模型,随机分为A、B、C、D、E组5组(n=12)。取18只3月龄雄性Wistar大鼠,切取双侧坐骨神经干约15mm,置入含200、400、800mg/L雷公藤多甙细胞保存液(各浓度组浸泡12条神经),4℃下浸泡24h,作为A、B、C组神经修复供体,修复神经缺损;另取6只3月龄Wistar大鼠,切取12条新鲜坐骨神经桥接于D组神经缺损处;E组将切下的自体坐骨神经立即行原位缝合。术后不同时间对移植神经行大体、光镜、电镜观察,检测髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)含量变化及免疫组织化学分析移植物CD4+、CD8+T细胞入侵情况。结果术后1周,A、B、C组神经纤维形态及结构较完整,炎性细胞浸润程度较D组轻;术后1、2、4周,A、B、C组组织形态学观察结果相似,移植神经片段外形及结构清晰,与周围结缔组织粘连均较D组轻;术后48h及1、2、4周,各组均有不同程度髓鞘损伤,各时间点坐骨神经MBP含量B组最接近E组,两组差异无统计学意义(P>0.05)。术后1、4周,A、B、C组CD4+、CD8+分子的IA值与D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论雷公藤能有效降低异体神经移植术后早期急性排斥反应,对髓鞘发挥一定的保护作用。

超低温冷冻保存的吻合血管异体神经移植实验研究

目的探讨吻合超低温冷冻血管的异体神经移植的可行性。方法杂种雌性犬12只,体重15～20kg;制备带血管坐骨神经动物模型,分别切取坐骨神经6～10cm,直径4.5～6.5mm,滋养血管干长3.5～4.5cm。经超低温冷冻保存3个月后行异体移植。取杂种雄性犬48只,体重15～20kg;随机分为4组,每组12只,超低温冷冻吻合血管的异体神经移植组为A组,超低温冷冻不吻合血管的异体神经移植组为B组,新鲜吻合血管的异体神经移植组为C组,新鲜吻合血管的自体神经移植组为D组。于术后1、4和12周(n=4)行大体观察,观察吻合动脉血管的通畅率,取移植神经作组织学检测。术后4周测定白细胞介素2活性及T细胞亚群的变化,术后12周行肌电图检测和形态定量学检查。结果术后12周,A、D组后足趾无溃疡,后肢小腿肌肉萎缩和皮肤痛觉有恢复。B、C组后足均有溃疡,后肢小腿肌肉萎缩和皮肤痛觉未恢复。1、4及12周血管通畅率A、D两组平均为83.3%,显著高于C组的50%(P<0.05)。术后4周白细胞介素2活性及T细胞亚群,C组高于A、B、D组(P<0.01)。术后2周A、D组光镜下见神经移植段有逐渐增多的新生毛细血管和再生神经纤维,单位面积髓鞘数、平均灰度值和单位面积髓鞘密度值均高于B、C组(P<0.01)。术后12周,A、D组动作电位潜伏期短,波幅高,传导速度快,神经修复明显优于B、C组(P<0.01)。结论超低温冷冻保存能降低异体血管神经的抗原性,在未使用免疫抑制剂情况下,吻合血管的异体神经移植是可行的;对于较粗大的神经,其神经修复明显优于不吻合血管的异体神经移植。

脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用。 方法 用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损 ,并对再生神经进行电生理学功能测试 ,光镜、电镜观察移植物内的再生神经 ,并进行统计分析。 结果 术后 13周内 ,动物未见炎症及排斥反应。用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损 ,再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异。 结论 脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性 ,它对缺损的坐骨神经再生有促进作用。

紫外线B照射低温冷冻同种异体神经移植的实验研究

目的:观察低温冷冻加紫外线B照射的大白鼠的异体神经与新鲜自体神经移植的差异,探讨神经移植的再生机制。方法:以30只健康雄性大白鼠为实验对象,随机分成A,B,C3组,每组后肢一侧移植冷冻加紫外线B照射的同种异体坐骨神经,另一侧移植新鲜自体坐骨神经。于术后2,4,6个月,进行肉眼观察、电生理学检查、腓肠肌和比目鱼肌湿质量测定、组织学观察。结果:在术后2个月时,实验侧、对照侧功能均逐渐恢复,肌肉的颜色、体积两侧差异无显著性意义。诱发肌电图在2个月时呈多相性、低振幅波形,4～6个月时多相性波形减少,振幅增大,肌肉收缩力增强,诱发动作电位峰值,实验侧与对照侧差异无显著性意义;运动神经的神经肌肉传导速度、腓肠肌和比鱼肌湿质量测定实验侧与对照侧也差异无显著性意义(P>0.05);组织学观察两侧神经再生状态基本相似。结论:低温冷冻加紫外线B照射可以充分降低异体神经的免疫原性,与新鲜自体神经移植的效果相似,是具有应用前景的神经移植材料。

复合FK506／NGF／RGD缓释膜应用于同种异体神经移植的实验研究

目的:探讨复合FK506/NGF/RGD缓释膜对冷冻处理下的同种异体神经的移植效果。方法:选择SD大鼠作为动物模型,在建立动物模型3周前取8只SD大鼠作为供体,切取双侧坐骨神经,冷藏于-196℃液氮中。另取40只SD大鼠随机分为:A单纯冷冻异体神经移植组;B冷冻异体神经联合应用FK506/RGD缓释膜移植组;C自体神经移植组;D冷冻异体神经联合应用FK506/NGF/RGD缓释膜移植组。术后12周进行大体观察、电生理、小腿三头肌恢复率、组织学、超微结构等测定。结果:术后12周内,4组大鼠均未发生急性移植排斥反应。D组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率明显优于A、B、C组(P<0.05)。组织学测定发现D组移植段神经纤维形态最为饱满,神经纤维直径大,髓鞘厚,成熟度高。结论:复合FK506/NGF/RGD缓释膜能更有效地促进神经生长。

同种异体神经移植中环孢素A的最短有效时间

目的 :研究同种异体神经移植中环孢素A(cyclosporinA ,CSA)的最短有效时间。方法 :72只SD鼠分为A组 ,自体原位移植 ;B组 ,异体移植应用CSA免疫抑制 3周 ;C组 ,异体移植应用CSA免疫抑制 4周 ;D组 ,异体移植应用CSA免疫抑制 5周 ;E组 ,异体移植应用CSA免疫抑制 6周 ;F组 ,异体移植无免疫抑制。各组分别于术后 6周和 12周对实验动物的功能学指标 (步态分析 )、电生理学指标 (潜伏期、运动神经传导速度 )、形态学指标 (腓肠肌湿重 ,坐骨神经光镜、电镜观察 )进行检测。结果 :6周时各组实验动物神经再生不完全 ,功能未恢复。 12周时A ,D ,E组动物在功能学指标、电生理指标及光镜、电镜指标上均优于其它各组。而A ,D ,E组间在上述各指标上无显著性差异。结论 1.0cm缺损的异体神经移植动物实验中 ,应用CSA 5mg/ (kg·d)

雷公藤多甙对异体神经移植后免疫反应及骨骼肌萎缩的影响

目的探讨雷公藤多甙对异体神经移植后免疫反应和骨骼肌萎缩的影响。方法用Wistar大鼠坐骨神经桥接SD大鼠10mm坐骨神经缺损。60只成年雄性SD大鼠(体重200～250g)随机分为4组(n=15):A、B组为新鲜异体移植,C、D组为供者神经雷公藤多甙预处理后移植。术后第2天予A、C组生理盐水,B、D组分别予雷公藤多甙5mg/(kg.d)和2.5mg/(kg.d),时间5周。术后定期观察移植神经和患侧骨骼肌大体及组织学变化,并分析肌纤维直径,透射电镜观察骨骼肌超微结构,免疫组化检测移植神经MHC-Ⅰ、Ⅱ分子表达和CD4+、CD8+T细胞入侵。结果移植神经炎症细胞浸润和骨骼肌萎缩,B、C、D组均明显轻于A组;骨骼肌湿重和肌纤维直径,A组明显低于B、C、D组(P<0.05),C组低于B、D组(均P<0.05),而B、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。术后6周,A组肌小节结构消失,肌丝溶解严重和残存"Z"线片段,余组肌原纤维均排列整齐,明带、暗带和肌小节结构清晰。MHC-Ⅰ、Ⅱ表达和CD4+、CD8+T细胞入侵在术后第1周出现高峰;同一时相,B、C、D组显著低于A组(均P<0.01),B、D组低于C组(均P<0.05),而B、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论雷公藤多甙能减轻失神经支配骨骼肌萎缩;雷公藤多甙预处理能降低供者神经抗原性,减轻异体神经移植后排斥反应和受者免疫抑制剂用量。

BDNF在脱细胞同种异体神经移植物修复神经缺损后不同组织中的表达

目的探讨脱细胞同种异体神经移植物(ANA)修复大鼠坐骨神经缺损后促神经再生的分子作用机制。方法将36只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组,自体移植组,桥接2,4,8,12周组,每组6只,分别观测患侧L4脊髓及胫前肌内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA表达。结果ANA桥接大鼠坐骨神经缺损后2周患侧脊髓内BDNF表达增高,4周时达高峰,持续到8周,然后逐渐降低,12周时仍显著高于正常对照组,与自体移植组相比无差异。而患侧胫前肌最初4周内逐渐降低,然后逐渐升高,12周时达到正常水平,与自体移植组相比无差异。BDNF mRNA的表达基本与蛋白表达一致。结论ANA具有良好的组织相容性,也许可替代自体神经修复大鼠坐骨神经长距离缺损,此作用可能与上调脊髓BDNF蛋白及mRNA表达有关。

化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究

目的 :探索犬去细胞神经的最佳储存方法。方法 :采用真空封装辐照灭菌法深低温储存犬去细胞坐骨神经12个月 ,进行细菌学检查、一般组织学观察、免疫组化染色、透射电镜观察。结果 :储存过程中不会发生细菌污染 ,储存去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性保持良好 ;其基本结构、神经基底膜及许旺细胞基底板层被保留 ;仍然保持为没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论 :真空封装辐照灭菌法可有效储存去细胞神经 1年。

神经生长因子对超低温冷冻异体神经移植的效果评价

目的研究神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对超低温冷冻处理后的同种异体神经移植后神经再生的作用。方法选择Wistar大鼠作为动物模型,于建立动物模型三周前取5只大鼠作为供体,切取双侧坐骨神经,冷藏于-196℃液氮中。另取30只大鼠分为:A组,单纯冷冻异体神经移植组;B组,冷冻异体神经局部应用NGF缓释膜组;C组,自体神经移植组。术后12周进行大体观察、组织学、超微结构等测定。结果术后12周内,三组大鼠均未发生急性移植排斥反应。组织学、超微结构测定发现B、C组神经生长情况明显优于A组。结论超低温冷冻异体神经移植局部应用神经生长因子能更有效促进神经再生。

脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损的形态学观察

目的: 研究脱细胞处理的同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后, 再生神经的形态学变化。方法: 光镜、电镜观察移植物内再生神经的超微结构变化, 免疫组织化学技术观察再生神经中S-100蛋白表达,并对再生神经的纤维数量、髓鞘厚度等进行统计学分析。结果: 实验组和自体神经移植对照组的移植段内见有由束膜和外膜包被的大量再生神经纤维, 两组比较再生神经的纤维数量、髓鞘厚度、有髓纤维占有的面积均无显著性差异; 两组移植段神经中的S-100阳性施万细胞数、形态和排列等方面也无明显差异。结论: 脱细胞同种异体神经同自体神经一样,对缺损的坐骨神经再生具有促进作用。

脱细胞同种异体神经移植物的制备及成分分析

目的 探讨脱细胞同种异体神经移植的制备方法及其含有的成分。方法 采用组织工程化低渗脱细胞方法制备神经异体移植物 ,光电镜观察其结构特征 ;用免疫组织化学法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析神经异体移植物的成分。结果 正常的 (天然的 )周围神经经脱细胞处理后 ,清除了雪旺细胞、神经外膜和束膜的细胞 ,以及神经纤维的髓鞘和轴突 ,保存了由雪旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。成分分析结果显示 ,含有LN、FN以及生长相关蛋白GAP 4 3和 6 5kDa蛋白等促进和诱导受体损伤神经再生的重要成分。结论 脱细胞异体神经移植物含有诱导和促进神经再生的相关蛋白 ,有利于受损神经的再生。

脱细胞异体神经移植在周围神经缺损修复中的应用研究进展

目的介绍脱细胞异体神经移植在周围神经缺损修复中的应用研究进展。方法广泛查阅国内外相关文献,进行回顾,综合分析脱细胞方法的进展及脱细胞处理后的异体神经移植效果。结果相对于物理方法,化学脱细胞方法可有效降低移植神经的免疫原性,经过脱细胞处理后的异体神经移植后,效果良好。结论目前随着脱细胞异体神经移植长度的增加,神经再生效果逐渐降低,宿主雪旺细胞可能存在迁移极限,对长段脱细胞异体神经再细胞化或使用辅助手段提高雪旺细胞迁移能力,可望解决这一问题。

血浆冷存的异体神经移植对神经再生影响的实验研究

目的 用经动物血浆处理后冷存的异体神经移植体,缝接神经缺损,提高神经再生。方法 用15只兔左、右肢正中神经30条,分别切除2.5 cm为实验材料,动物分两组:A组15条神经用经受体动物血浆浸泡冷冻处理的异体神经移植为实验组,B组15条神经只经冷冻处理的异体神经缝接,术后不同时间,采用光、电镜组织学,图像分析仪测定,神经外周粘连定量测定和电生理指标等观察。结果(1)A组再生神经纤维在数量上和直径上均明显较B组的多而粗(p<0.03);(2)A组神经缝合段的结缔组织增生和与其外周组织粘连程度均较B组轻(p<0.01)。结论 经受体血浆处理后冷存的异体神经移植体,有提高神经再生的作用。

电生理检测在同种异体神经移植处植入bFGF复合降解膜研究中的应用

周围神经损伤造成神经缺损是临床常见的外伤,自体神经移植已成为一种主要的解决方法,但是由于神经再生不全影响功能恢复,特别是移植的自体神经来源有限,供区局部会引起神经疼痛、麻木、瘢痕等并发症.