高效去除异体组织中脱细胞试剂十二烷基硫酸钠残留的清洗方法

背景:十二烷基硫酸钠是一种常用于同种异体组织脱细胞处理的脱细胞试剂,然而其难以从组织内去除,少量残留即可产生细胞毒性。目的:提出一种高效去除异体组织中脱细胞试剂十二烷基硫酸钠的清洗方法。方法:选择纯水、钾盐溶液和乙醇作为清洗介质,并通过不同介质的排列组合进行清洗,对十二烷基硫酸钠残留量、异体真皮和异体肌腱的组成、结构、力学性能和细胞毒性等方面进行检测,评价清洗效果。结果与结论:总体上,乙醇+氯化钾、体积分数75%乙醇+氯化钾对样品的成分和结构无大影响。首先,十二烷基硫酸钠浸泡处理将异体真皮和异体肌腱的DNA残留控制在50 ng/mg以下之后再进行清洗,异体真皮、异体肌腱中的十二烷基硫酸钠含量分别降低了96.7%和97%;其次,异体真皮、异体肌腱的糖胺聚糖和胶原蛋白含量均无较大变化;此外,异体肌腱在清洗后,其最大拉力、强度和模量高于脱细胞后,与原材料相比无显著性差异;最后,细胞毒性结果显示异体真皮和异体肌腱清洗后的细胞存活率高于80%,细胞毒性分级不大于1级。

T-1型脱细胞异体组织补片生物相容性评价研究

T-1型脱细胞异体组织补片主要用于口腔软组织损伤、疝气等修补的新型生物材料。为了确保产品在临床使用的安全有效性,我们对其进行了细胞毒性、皮肤致敏、口腔粘膜刺激以及动物体内的肌肉植入等一系列生物相容性评价试验。结果表明该补片具有细胞毒性小、无致敏、无口腔粘膜刺激反应,具有良好的生物相容性以及较好的体内组织化作用。

同种异体组织工程复合皮肤移植修复大鼠皮肤缺损

目的 检测组织工程皮肤的生物活性及免疫原性 ,探讨临床可行性 .方法 以新生 SD大鼠皮肤为原材料培养组织工程复合皮肤并将其移植到成年 Wistar大鼠 ,通过大体观察、组织学检测对不同时间自体、异体及组织工程复合皮肤移植进行比较 ,研究了组织工程复合皮肤的存活及免疫排斥情况 .结果 异体皮肤移植组有明显的免疫排斥 ,组织工程皮肤组未见有明显排斥 ,且与自体皮肤结合良好 .结论 组织工程复合皮无明显的免疫排斥 ,是较好的皮肤移植替代品 。

异体组织埋藏治疗视网膜色素变性对视力和眼底荧光造影变化的影响

目的 观察异体组织埋藏法治疗视网膜色素变性 (RP)患者视力、视野和眼底荧光血管造影变化 ,探讨治疗作用机理。方法 异体组织埋藏法治疗 5 2例 (10 1眼 )视网膜色素变性患者 ;术前、术后分别检查视力、视野和眼底荧光血管造影。结果 治疗后 ,患者视力显著提高 (P <0 .0 1) ,视野显著扩大 (P <0 .0 1) ,眼底荧光血管造影表现好转 (P <0 .0 5 )。结论 异体组织埋藏法治疗RP可以改善视网膜 -脉络膜血液循环 ,从而改善视网膜 -脉络膜营养状态。

脱细胞异体组织补片用于无张力疝修补术的对比研究

目的比较脱细胞异体组织补片、聚四氟乙烯补片及聚丙烯补片在开放式无张力疝修补术中的临床疗效。方法分析使用以上三种补片行无张力疝修补术病例（脱细胞异体组织补片组、聚四氟乙烯补片组、聚丙烯补片组）的手术时间、术后并发症及复发率，并进行对比研究。结果三组在手术时间、复发率等方面比较差异无统计学意义（P〉0．05）；脱细胞异体组织补片组的术后不适感发生率低于聚四氟乙烯补片组及聚丙烯补片组（P〈0．05），聚丙烯补片组术后腹股沟区不适感发生率最高。结论各种补片的临床应用效果相近，但聚丙烯补片具有材料价格较低、术式简单、手术时间短等优点，适合在基层医院开展；而脱细胞异体组织补片具有较好的组织相容性，术后无慢性疼痛及局部硬结或不适感，具有可推广性。

衷鸿宾：有多少爱可以重来 解放军骨科研究所副主任衷鸿宾谈同种异体组织移植

“目前我暂不打算进一步向大众推广同种组织移植概念，不是我不希望更多的人受惠于这项先进技术，而是目前组织库的缺口实在是太大了，每年600万例的缺口与不足10万的组织储存，如何协调供需缺口已经成了最大的难题。”

自体与同种异体组织移植重建膝关节前十字韧带

背景:关节镜辅助下重建前十字韧带的移植物主要有自体组织移植物、同种异体组织移植物,各具优势,对于如何选择移植物存在较多争议。目的:评价关节镜辅助下自体与同种异体组织重建膝关节前十字韧带的疗效。方法:回顾性分析2010年6月至2013年6月于阿克苏地区第一人民医院骨科行关节镜辅助下膝关节十字韧带重建52例患者的临床资料,其中自体组织移植组27例,同种异体组织移植组25例。结果与结论:与同种异体组织移植组相比,自体组织移植组重建后住院天数和发热天数均减少(P<0.05)。两组重建后物理学检查、功能试验、国际膝关节文献编制委员会分级评估标准与Lysholm-Tegner膝关节综合功能评定结果比较差异无显著性意义(P>0.05)。结果证实,关节镜辅助下自体与同种异体组织重建膝关节前十字韧带均是安全可行的手术方案;自体组织移植与同种异体组织移植重建前十字韧带重建后膝关节功能恢复疗效相同,但两组间住院天数和发热天数之间的差异将影响人们对移植物的选择。

免疫抑制缓释用于治疗同种异体复合组织移植的研究进展

同种异体复合组织移植(Vascularized composite allotransplantation,VCA)是帮助肢体和颜面部等组织严重毁损的患者重建功能、恢复美观的重要手段之一。VCA患者术后需要接受终身的免疫抑制治疗,抑制免疫排斥反应。长期免疫抑制剂管理易引发各种机体的毒副反应,影响生活质量,甚至威胁生命安全。免疫抑制局部缓释治疗可以提高移植物局部的药物浓度,减轻全身毒副作用,相对于全身用药具有一定优势。本文对目前基于各种生物材料的局部缓释给药系统在VCA中的应用进行综述。

移植物局部引流淋巴结对异体复合组织皮瓣移植后存活时间的影响

目的:探讨移植物局部引流淋巴结在异体复合组织移植中是否参与了早期的排斥反应,干预淋巴结后能否延长皮瓣存活时间。方法:BN大鼠作为供体、Lewis大鼠作为受体,进行腹部游离皮瓣异体移植。将大鼠随机分为三组,A组:正常移植;B组:术中去除受体移植区域引流淋巴结;C组:将皮瓣卷成皮管,利用硅胶管隔离移植物和受体之间的皮肤接触,仅保留血管相通。观察三组皮瓣存活状态,术后不同时间点对各组皮瓣HE染色和血清白细胞介素-2(IL-2)水平检测。结果:B、C组皮瓣存活时间相对于A组均延长(均P<0.05)。A组3 d皮瓣出现水肿和出血点,B、C组在7 d以后才出现不同程度的水肿和出血点。A组相较于其他各组,IL-2表达水平明显升高,在排斥终点(术后第7天)达到最大;B、C组在术后第7天IL-2表达水平分别为(145.15±4.2)ng/L和(96.28±4.62)ng/L,A组与B、C组比较有统计学差异(均P<0.05)。结论:移植物局部引流淋巴结在免疫排斥早期起着关键的作用,移除移植物局部引流淋巴结可以延长皮瓣存活时间。如果早期能够干预引流淋巴结,就有可能减少效应T细胞的产生,从而减轻移植物的排斥反应。

同种异体骨-髌腱-骨组织移植重建前交叉韧带36例临床分析

目的：回顾性研究并评估采用同种异体骨-髌腱-骨组织移植重建前交叉韧带患者的临床疗效。方法：从2004年12月至2006年8月,对36例ACL损伤病例进行了同种异体骨-髌腱-骨组织移植重建。男性16例,女性20例;平均年龄28岁（15~56岁）;急性损伤11例,慢性损伤25例。对所有患者进行了主观评估（包括手术前后Lysholm评分、IKDC评分和症状改善情况）和客观评估（包括Lachman试验、轴移试验、KT-1000测量,以及关节活动范围）,并对比了患者术前以及术后的MR影像和关节镜手术探查影像,还对术后发热情况以及并发症进行了记录。结果：本组病例平均随访23.6个月（12~32个月）。主观评估：术前Lyshrolm评分为63.61±13.4分（46~90分）,术后最终评分为98.03±3.6分（85~100分）,与术前对比差异有统计学意义（P〈0.01）;术后IKDC评分总体优良率达到91.7%。客观评估：KT-1000测量结果：术前两侧胫骨前移的差别为7.05±2.15mm（2-11mm）,术后最终测量值为1.15±1.43mm（0-6mm）,与术前对比差异有统计学意义（P〈0.01）。所有患者均未出现明显的术后并发症以及病毒和细菌感染。1例患者移植物松弛度增加,给予固缩治疗后好转。另1例部分韧带磨损,但主观评估良好,给予清创和髁间窝成形术处理。结论：短期观察显示,采用同种异体骨-髌腱-骨组织移植重建ACL能够获得满意的临床疗效,具备有效性和安全性。

同种异体组织移植在骨科应用的现状和前景

创伤、炎症或肿瘤在治疗过程中出现的骨及组织缺损，需要移植材料进行修复或重建，而自体移植材料受到手术取材以及数量不足的限制，异体移植材料更能够满足要求。骨科中常用的异体组织移植主要有骨移植、肌腱移植；软骨移植、半月板移植和神经移植目前尚处在临床试用阶段，血管移植尚没有应用到临床。为了更好地开展异体组织移植的研究和临床应用，需要建立组织库，储备组织材料并确保组织材料的安全。

5-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯直观检测经交联处理异体组织的交联程度研究

利用荧光技术创建一种新的方法评价经交联处理异体组织的交联程度。以新西兰兔胸主动脉作为研究对象,按与其作用的戊二醛(GA)浓度不同分为空白对照组--未与GA作用(A组),GA浓度0.625%组(B组),GA浓度1.25%组(C组),GA浓度2.5%组(D组),各组与GA交联作用后经5-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(5-FAMSE)处理,然后在荧光显微镜下照相,照片进行荧光强度分析(应用专业图像分析软件--Image-Pro Plus 6.0),结果A组>B组>C组>D组,各组之间差异具有显著统计学意义(P<0.01)。各组同时取一定量血管组织经GA交联后提取其组织蛋白,进行传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PGE)与5-FAMSE法进行对照,结果组织蛋白提取量A组>B组/C组/D组,无法定量比较B、C、D各组间差异。以上可说明5-FAMSE是一种有效的荧光试剂,可以清楚地反映小血管氨基残端的变化,可以更为方便且直观的评价经GA处理的小血管的交联程度。

玉米耐盐愈伤组织变异体的筛选及耐盐性分析

为了筛选玉米耐盐愈伤组织变异体,选用4个适于玉米组织培养基因型的幼胚为外植体,诱导出胚性愈伤组织。继代5次后,分别用200 mmol/L NaCl和5.5 mmol/L Hyp连续筛选3次,获得耐盐愈伤组织变异体,分别称为rn变异体和rh变异体,以普通继代培养基上培养的愈伤组织为对照。经一代回复培养,分别在200,250和300 mmol/L NaCl胁迫下,分别测定了rn变异体r、h变异体和对照愈伤组织存活率,胚性愈伤组织百分率,K+、Na+含量;在300 mmol/L NaCl胁迫下,测定了rn变异体、rh变异体和对照愈伤组织的生长量及脯氨酸含量。结果表明,rh变异体愈伤组织的分化频率高于rn变异体,Hyp的选择频率是NaCl的2倍左右;在不同浓度NaCl胁迫下,rh变异体具有较高的愈伤组织存活率和K+、Na+含量;在300 mmol/L NaCl胁迫下,rh变异体的生长量和脯氨酸含量均最高,表现出了较好的耐盐性。

同种异体肺和复合组织序贯移植大鼠模型研究

目的探讨大鼠同种异体序贯复合组织移植(SCTA)对先前实质器官移植免疫效应的影响。方法取WKY大鼠左肺原位移植到F344大鼠,应用Cuff技术分别吻合左肺动脉、左肺静脉及主支气管。术后对F344大鼠应用环孢素(CsA)5 mg/kg隔日皮下注射,共10 d;以呼吸频率检测移植左肺功能。肺移植后第11天,取Brown Norway大鼠腹部3 cm×3 cm肌皮瓣原位移植至F344大鼠,皮瓣吻合血管为股动脉和股静脉,皮瓣移植后停止应用免疫抑制剂。同种异体复合组织移植(CTA)10 d后,取移植皮瓣和肺组织行组织病理学检查,观察排斥反应。结果大鼠肺移植手术成功率90%,CTA手术成功率100%,SCTA成功率90%。移植肺的呼吸频率从移植10 d后(应用免疫抑制剂10 d)的(61±10)次/min增加到移植20 d后(停用免疫抑制剂10 d)的(75±15)次/min。移植肺显示出典型的急性免疫排斥反应,包括血管周围及肺组织内弥漫的淋巴细胞浸润。自体移植腹壁皮瓣病理组织学检查未发现免疫排斥反应,CTA术后皮瓣显示典型血管周围及皮瓣内弥漫的淋巴细胞浸润。结论 SCTA大鼠模型的建立对于实质器官移植后CTA及二次移植免疫抑制方案的研究具有重要意义。

枸杞抗炭疽病菌毒素愈伤组织变异体的离体筛选及其防御酶活性研究

以枸杞炭疽病菌粗毒素液作为选择剂,将体细胞无性系变异与辐射诱变相结合,对宁夏枸杞主栽品种"宁杞1号"的叶片胚性愈伤组织进行辐射诱变和筛选,以期获得稳定的抗炭疽病细胞变异系。结果表明,以半致死剂量的60Coγ对枸杞叶片诱导出的胚型愈伤组织进行辐照处理,将其恢复增殖后,采用多步正选择法结合加压与去压交替的筛选方法,筛选到了抗性愈伤组织变异体,其在不同粗毒素浓度胁迫下,其鲜重增长均高于对照组,而且在离开选择因子继代培养4代后,仍保持获得的抗性。分析抗性系与抗病相关的防御酶的活性表明,无论有无粗毒素胁迫,抗性愈伤组织变异体的PAL、POD和PPO酶活性均高于对照愈伤组织;在粗毒素胁迫下,随着粗毒素浓度的增大,3种酶活性基本呈先升高后降低的趋势,抗性变异系3种酶活性的上升幅度较对照组要大,而PAL和POD活性的下降速度较对照亲本系小,说明抗性变异系通过增强与抗病性相关酶的活性,来加强同植物防卫有关的物质代谢。

玉米耐盐愈伤组织变异体的筛选及生理特性分析

用9个组合的玉米幼胚为外植体,诱导出胚性愈伤组织。继代5次后,用200 mmol/L NaCl和5.5 mmol/LHyp(羟基脯氨酸)连续筛选3次,获得耐盐愈伤组织变异体。试验结果表明:用Hyp筛选得到的愈伤组织,其分化频率高于用NaCl筛选的,Hyp的选择频率是NaCl的2倍;2种耐盐愈伤组织变异体中的可溶性糖含量和脯氨酸含量都高于对照,3种愈伤组织细胞的渗透势排序为:用Hyp筛选到的变异体<用NaCl筛选到的变异体<对照。

卵巢组织异体移植对去势模型大鼠骨质疏松的治疗作用

目的:研究卵巢组织异体移植对去势模型大鼠骨质疏松的治疗作用及其机制。方法:将40只SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢模型组,雌激素组和卵巢组织块移植组。采用背部定位切除双侧卵巢,建立去势大鼠模型。造模的同时,将同种异体卵巢组织块植入去卵巢大鼠背部肌肉层以建立卵巢移植模型。雌激素组大鼠按雌激素0.06 mg/kg灌胃进行替代治疗3个月,其他各组均给予等量生理盐水。实验结束后,称量体重和子宫湿重,计算子宫重量指数;HE染色光镜观察大鼠阴道上皮细胞和股骨细胞形态;骨密度仪法检测大鼠全身、股骨和胫骨近端的骨密度;放射免疫法检测血清雌激素(E2)水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠子宫重量指数明显下降(P<0.01);血清雌激素水平显著降低(P<0.01);阴道上皮细胞较小,无角质化;股骨中的骨小梁数目显著减少,骨吸收明显,呈典型的"岛屿状",骨髓腔增大,髓腔中基质细胞极少;双能X线显示,模型大鼠全身、股骨和胫骨的骨密度均显著减少(P均<0.01);与模型组相比,雌激素组和移植组大鼠的子宫重量指数增加明显(P<0.01,P<0.01);两组大鼠的血清雌激素水平上升显著(P<0.01,P<0.01);病理切片显示,雌激素组和移植组大鼠的阴道上皮细胞大多呈角质化;雌激素组大鼠皮质骨增厚,骨小梁粗壮,数量多,排列较整齐,骨小梁间距较小,且骨髓腔缩小,骨基质细胞明显增多;移植组大鼠皮质骨面积较大,骨小梁数量和面积增加明显,骨小梁间距小,排列规则,连接增多,骨基质细胞分布均匀。结论:卵巢组织移植可能是通过与靶肌肉组织产生新生血管连接,不断分泌内源性雌激素,后者通过结合子宫、阴道和股骨组织中靶受体-雌激素受体,进而维持子宫和阴道等靶组织的形态与功能,并抑制骨质组织矿物质的丢失,从而达到改善或促进雌性大鼠内分泌功能的目的。