HPLC法测定钩藤不同部位中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱含量

目的考察钩藤药材净钩、藤枝、带钩茎枝三种不同入药部位中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量,寻找钩藤新药源。方法采用HPLC法,以钩藤中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量为指标,测定钩藤药材净钩、藤枝、带钩茎枝中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量。色谱条件:C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水=63∶37(v/v,含0.002 mmol/L三乙胺,冰乙酸调pH 7.5)为流动相;流速1.1 mL/min;检测波长:254 nm。结果藤枝中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量略高于净钩、带钩茎枝。结论钩藤的藤枝具有潜在药用开发价值。

建立2D-HPLC同时检测钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的方法

目的建立二维高效液相色谱法(2D-HPLC)同时检测钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱四种钩藤生物碱含量的方法。方法采用Aston SC2(3.5 mm×25 mm,5μm)一维色谱柱,Aston SH C_(18)(3.5 mm×10 mm,5μm)中间色谱柱,Aston SCB(4.6 mm×125 mm,5μm)分析色谱柱,一维流动相为CAA-1,分析流动相为BPI-1∶MPI-1∶OPI=45∶14∶41,流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长254 nm,进样量500μL,分析时间9.5 min。结果钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱线性范围分别为9.77~10000.00 ng/mL(r=0.9996)、10.74~11000.00 ng/mL(r=0.9997)、10.74~11000.00 ng/mL(r=0.9997)、10.74~11000.00 ng/mL(r=0.9996),精密度、稳定性和重复性相对标准偏差(RSD)<5.00%,准确度为95.20%~104.01%,方法回收率为93.63%~101.38%。结论建立的2D-HPLC同时检测钩藤中四种生物碱含量的方法简单准确,可作为钩藤药材质量控制的新方法。

异去氢钩藤碱在人和大鼠肠道菌群中代谢产物的鉴定

目的研究异去氢钩藤碱在人和大鼠肠道菌群中代谢产物的异同,阐明肠道菌群对异去氢钩藤碱在体内吸收和代谢的影响。方法采用UHPLC/Q-TOF MS技术,鉴定异去氢钩藤碱在人和大鼠肠道菌群培养液中的代谢产物。采用色谱柱为HSS C18(100 mm×2.1 mm,1.8μm)柱,流动相为乙腈-体积分数0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速为0.5 m L·min-1,采用ESI离子源,正离子模式检测。结果通过与标准品比对保留时间和质谱信息,鉴定了异去氢钩藤碱在人和大鼠肠道菌群培养液中9个代谢产物。其中异构化和还原为异去氢钩藤碱在肠道菌群中的主要代谢途径,水解、羟基化和氮氧化为微量代谢途径。结论建立采用UHPLC/Q-TOF MS方法鉴定异去氢钩藤碱肠道菌群代谢产物,为四环氧化吲哚类生物碱在体内吸收和代谢机制研究提供科学依据。

去氢钩藤碱与异去氢钩藤碱在大鼠体内的生物转化

目的探讨去氢钩藤碱与异去氢钩藤碱在大鼠体内的生物转化.方法去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱对大鼠经口投药30 min内收集到的胆汁样品进行高效液相色谱串联质谱仪(LC-MS)测定.结果发现去氢钩藤碱的底物和2个I相代谢物、2个II相代谢物可以检出,而异去氢钩藤碱的I相代谢物没有检出,但II相代谢物检出4个.结论分析结果显示这2个四环氧化吲哚生物碱的代谢与钩藤碱、异钩藤碱的肝脏代谢非常相似,并且都存在经口投药之后的肝首过效应.体外实验验证了以上代谢过程的结论,并显示是肝微粒体酶CYP450对去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱在肝脏的生物转化起催化作用.

异去氢钩藤碱在大鼠体内药动学及组织分布研究

目的:研究异去氢钩藤碱(Isocorynoxeine)在大鼠体内的药代动力学及组织分布特征。方法:大鼠灌胃分别给予40、80mg/kg的钩藤总碱后,采用HPLC法检测血浆和组织器官中各时间点的药物浓度,并用DAS2.0软件非房室模型参数估算法计算药动学参数。结果:分别给予40、80mg/kg钩藤总碱后主要药动学参数如下:T_(max)分别为0.5、0.25h,C_(max)分别为0.07、0.29mg/L,T_(1/2)分别为1.01、1.09h,AUC_(0-t)分别为0.08、0.31mg/(L·h),CL分别为499.33、235.27L/(h·kg),MRT_(0-∞)分别为1.43、1.59h,Vd分别为732.82、369.20L/kg。按80mg/kg单剂量单次给药后,异去氢钩藤碱在各组织中均有分布,在胃肠道中的质量分数最高,脑中最低。结论:所建立的方法快速、准确、简便,能够满足异去氢钩藤碱的药动学研究要求。

UPLC法同时测定钩藤提取物中4种生物碱类成分的含量

目的：建立UPLC法同时测定钩藤提取物中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量。方法：采用BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）;以5 mmol/L醋酸铵缓冲液（0.01%氨水调p H=9）（A）-甲醇（B）-乙腈（C）三元体系为流动相进行梯度洗脱;流速：0.44 m L/min;柱温：30℃;检测波长：245 nm。结果：钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的质量浓度在2.97~296.67μg/m L、1.31~450.00μg/m L、1.58~433.33μg/m L、1.28~438.33μg/m L的范围内线性关系良好,r为0.9993~0.9995;各成分平均加样回收率在97.34%~101.85%,RSD≤2.65%。钩藤提取物中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量分别为23.48、6.19、6.73、9.22μg/g。结论：该方法准确可靠,便于操作,可用于同时测定钩藤提取物中4种生物碱的含量。

高效液相色谱法同时测定钩藤中4种生物碱的含量

为了建立一种同时测定钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱含量的高效液相色谱法,在色谱柱Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-0.1%三乙胺水(68∶32∶0.1)为流动相,检测波长为254nm,流速为1mL/min的条件下进行钩藤中4种生物碱含量的测定。结果表明:4种生物碱分离良好,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱分别在0.017 8～0.142 4μg、0.017 2～0.172μg、0.016 6～0.132 8μg和0.023 4～0.234μg的线性良好,4种生物碱的平均加样回收率分别为96.40%、99.24%、97.56%和98.60%,RSD均小于3%(n=6),该方法操作简便,分离度好,适合于测定钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量。

采用HPLC-MS-AIS法测定钩藤中四种生物碱含量

目的采用高效液相-质谱联用-自体内标法(HPLC-MS-AIS)测定钩藤中四种主要的吲哚类生物碱(钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱)含量。方法采用C_(18)色谱柱(3.0 mm×50 mm,3.3μm);0.1%甲酸水溶液∶乙腈=82∶18为流动相;流速0.5 mL/min;柱温30℃。质谱条件:电喷雾离子源;正离子多反应监测模式;毛细管电压为4000 v;选择质子数/电荷数(m/z):385.25/160.10(钩藤碱)、385.30/160.10(异钩藤碱)、383.25/160.15(去氢钩藤碱)、383.25/160.15(异去氢钩藤碱)作为检测离子对;进样量2μL。结果钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱线性范围分别为2.30~600.00 ng/mL(r=0.9993)、2.30~600.00 ng/mL(r=0.9992)、2.47~650.00 ng/mL(r=0.9994)、2.47~650.00 ng/mL(r=0.9992),精密度和稳定性的相对标准偏差(RSD)均<5.00%,准确度为92.40%~104.10%,加样回收率为95.90%~104.60%。结论采用HPLC-MS-AIS法测定钩藤中四种生物碱含量简便准确,可作为钩藤药材质量控制的新方法。

一测多评法同时测定钩藤饮片中4种生物碱类化学成分

目的:建立超高效液相色谱法(UPLC)一测多评(QAMS)同时测定钩藤饮片中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱4种化学成分含量的方法,并验证该方法的可行性和准确性。方法:以钩藤饮片的4种成分为指标成分,以异钩藤碱为内标,分别计算得到钩藤碱、异去氢钩藤碱与去氢钩藤碱的相对较正因子,实现QAMS同时测定钩藤饮片中4种生物碱类成分含量。结果:在线性范围内,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的相对校正因子(RCF)分别为1.02、0.97、1.00、1.01,在不同实验条件下RCF的系统耐用性良好。结论:建立的以异钩藤碱为内标,同时测定4种钩藤生物碱的一测多评方法稳定、准确度高、适应性好,可用于钩藤饮片中4种生物碱类化学成分的含量测定。

一测多评法同时测定钩藤中4种生物碱的含量

目的建立一测多评法测定钩藤中4种生物碱的含量。方法采用Gemini-NX C18色谱柱(250cm×4.6 mm,5μm),以1%乙酸铵(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长245 nm,柱温25℃,进样量10μL。结果以异钩藤碱为对照品,钩藤碱、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱分别用校正因子进行含量测定,并进行了方法学验证。一测多评法计算值与外标法实测值间无明显差异(RSD <1%)。结论所建立的一测多评法简便快捷,准确度高,适合钩藤中生物碱的含量测定。

钩藤不同部位生物碱类成分的含量测定及其质量评价

采用反相高效液相色谱法,对钩藤不同部位异钩藤碱、钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱4种生物碱类成分进行含量测定。采用Gemini NX C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以1%醋酸铵(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1);检测波长为245 nm;柱温25℃;进样量10μL。本方法简便可靠,专属性强,重现性好,适用于钩藤中生物碱的含量测定;钩藤不同部位生物碱类成分含量差异显著。

钩藤生物碱提取工艺研究

目的:优选钩藤生物碱的最佳提取工艺。方法:以钩藤总碱的含量,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量总和及浸膏得率为评价指标,对比了水煮、渗漉、索式回流和回流四种方法的提取效果,优选出回流的提取方法,并采用正交设计的方法考察溶剂浓度、溶剂倍量、提取时间及提取次数对钩藤生物碱的提取率和含量的影响。结果:钩藤生物碱的最佳提取工艺为:10倍量90%乙醇,回流提取2次,每次1h。结论:优选确定的工艺简便、稳定可行。

钩藤叶化学成分的研究

目的研究茜草科植物钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jacks.叶的化学成分。方法用多种色谱方法和重结晶法进行分离和纯化,经理化、光谱和色谱分析等方法鉴定结构。结果从钩藤叶中分离得到5个化合物,鉴定为喜果苷(vincoside lactam,Ⅰ)、异去氢钩藤碱(isocorynoxeine,Ⅱ)、异钩藤碱(isorhynchophylline,Ⅲ)、去氢钩藤碱(corynoxeine,Ⅵ)、钩藤碱(rhynchophylline,Ⅴ)。结论化合物Ⅲ为首次从钩藤叶中分离得到,通过2D-NMR技术完善了化合物Ⅲ的核磁数据。

不同采收期毛钩藤药材中钩藤碱等3种成分的含量变化研究

目的测定不同采收期毛钩藤中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量变化,为毛钩藤的合理采收及品质评价提供依据。方法采用高效液相色谱法,色谱条件：Wonda Sil C18（4.6 mm×200 mm,5μm）色谱柱,以乙腈-0.2%氨水梯度洗脱,流速为1ml·min^-1,检测波长为254nm,柱温为25℃。结果 1-12月采收的毛钩藤中的钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量得到准确测定。结论当年秋季至次年初夏采收的毛钩藤药材质量相对较好。

HPLC-MS/MS同时测定心脑静片中5个生物碱类成分的含量

目的:建立HPLC-MS/MS同时测定心脑静片中黄柏碱、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、异钩藤碱和钩藤碱5个生物碱类成分含量的方法。方法:采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(–1);质谱采用正离子扫描,多反应监测(MRM)模式进行定量分析。结果:5个成分在一定浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,线性相关系数r均>0.999 5;平均回收率(n=6)在93.4%~104.0%,RSD在1.2%~3.2%。2个厂家14批样品中黄柏碱、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、异钩藤碱和钩藤碱的含量分别为218.08~716.22、3.24~64.47、6.65~207.74、1.47~39.68、3.87~98.89μg·g^(-1)。不同厂家样品中黄柏碱的测定结果较为接近,而异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、异钩藤碱、钩藤碱的含量测定结果差异较大。结论:本方法灵敏、准确,可用于心脑静片相关药味的质量控制。

超高效液相色谱质谱联用技术快速检测中药钩藤中6种钩藤碱含量

目的建立UPLC-MS/MS方法测定中药钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱含量。方法以地西泮为内标,采用UPLC BEH(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm)柱,柱温为40℃。流动相由乙腈和水(含0. 1%甲酸)组成,梯度洗脱流速为0. 4 ml/min,洗脱时间为5. 5 min。MRM模式对钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱进行定量分析。蒸馏水煮法对中药钩藤进行提取。结果在0. 005μg/ml～5μg/ml浓度时,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱线性良好(r> 0. 995),最低定量下限为0. 005μg/ml。日内精密度RSD≤8%,日间精密度RSD≤10%。准确度在93. 4%～108. 7%。结论该分析方法灵敏、快速、选择性好,并成功应用于中药钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱含量测定。

基于UHPLC-MS/MS的钩藤生物碱在大鼠体内的组织分布研究

目的建立超高效液相串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLCMS/MS)法测定大鼠不同组织中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱与缝籽嗪甲醚的含量,并用于钩藤的组织分布研究。方法大鼠ig钩藤水煎液后,分别于0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、8、12 h取心、肝、脾、肺、肾、脑组织。以长春胺为内标,采用液液萃取法提取后进行样本检测。结果建立的UHPLC-MS/MS方法中,7个生物碱在不同的组织中最低定量限范围为0.05~1.00 ng,响应与浓度的相关性R≥0.991。方法学考察中的专属性、基质效应、回收率、精密度与准确度以及稳定性等方法学考察均满足要求。各个组织中均为异钩藤碱含量最高,其次为去氢钩藤碱;异钩藤碱与去氢钩藤碱含量均远高于其对应的异构体钩藤碱与异去氢钩藤碱;而3个四环单萜吲哚生物碱(毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱、缝籽嗪甲醚)在各组织中均含量最低。比较不同组织中生物碱成分含量可以发现,7个生物碱均在肝脏中含量最高,其次为肾脏与肺部,推测钩藤生物碱在肝脏与肾脏的蓄积是因为两者分别是生物碱成分的主要代谢部位与排泄部位。结论建立的方法灵敏度高、准确性好、专属性好,适用于大鼠不同组织中钩藤生物碱的组织分布研究。

HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别法评价黔钩藤质量

目的基于HPLC指纹图谱、多成分定量结合化学模式识别法评价黔钩藤质量。方法从贵州中药材市场随机购买了18批钩藤饮片,采用HPLC法建立了18批钩藤饮片的指纹图谱;通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)进行相似度评价,对其中5种生物碱进行了指认,并采用外标法和一测多评法进行了含量测定;采用SPSS 26.0统计软件进行聚类分析和主成分分析。结果在钩藤饮片指纹图谱中,确定了共有峰28个,采用对照品指认了5个生物碱成分,分别为异去氢钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、钩藤碱和去氢毛钩藤碱,18批钩藤的相似度评价表明市场上钩藤的质量差异较大;聚类分析将18批钩藤饮片样品聚为3大类;主成分分析用5个主成分进行综合评价,其中8批钩藤饮片的综合得分大于1;采用一测多评法和外标法计算18批钩藤饮片中5种生物碱的含量,经GraphPad差异性分析表明,2种方法无显著性差异。结论市场上钩藤质量差异较大,建立了检测5个生物碱成分的一测多评法和外标法,为完善钩藤质量评价提供参考。

九味熄风颗粒生物碱类成分指纹图谱建立及其多指标成分定量分析

目的:建立九味熄风颗粒的指纹图谱,并同时测定其中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱。方法:采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇-0.1%三乙胺为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),柱温35℃,检测波长246nm。对10批九味熄风颗粒进行了指纹图谱及含量测定研究,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价软件"(2004A)进行分析。结果:得到分离度、重复性均较好的九味熄风颗粒指纹图谱,共标示出13个共有峰,各批次样品相似度>0.96;通过对照品比对,确定了4个成分,分别为钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱,并对其进行定量分析。结论:该方法快速、简便、准确,可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一。