Cx43/Cx45异型缝隙连接通道参与实验性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的实验研究

目的探讨缝隙连接通道参与脑血管痉挛(CVS)的机制。方法选择健康新西兰大白兔36只,随机分为3组:正常对照组(每组n=12)、SAH-7d组(每组n=12)、SAH-7d+甘珀酸(CBX)组(每组n=12);用二次注血法制成兔SAH模型。应用脑血管造影技术观察造影前后各组基底动脉的血管直径,免疫共沉淀技术观察Cx43与Cx45在各实验组中相互作用的变化。结果脑血管造影显示单纯注血7d组较正常组基底动脉明显痉挛(P<0.01),正常对照组及SAH-7d+CBX组基底动脉无明显痉挛,免疫共沉淀示Cx43与Cx45在体内的相互作用在SAH-7d组较正常组及SAH-7d+CBX组均明显增加(P<0.01)。结论实验结果显示SAH后兔基底动脉较正常组明显痉挛,单纯出血组Cx43与Cx45组成的异型缝隙连接通道较正常组增加,而CBX能缓解SAH后的CVS及抑制Cx43/Cx45缝隙连接蛋白的高表达,即Cx43/Cx45异型通道的增加可能参与SAH后CVS的形成。

异型缝隙连接通道和磷酸化对心脏细胞通讯的调节作用

为了检测缝隙连接蛋白 (Cx) 4 3和Cx4 5组成的多种异型缝隙连接通道和磷酸化对缝隙连接 (GJ)里细胞通讯的调节作用 ,将转染了编码为Cx4 3或Cx4 5的DNA后的Hela细胞放置在一起共同培养组成双侧和单侧异型GJ通道。显微注射荧光素黄 (LY)后 ,利用紫外光检测经 2 0 0nmol/L十四 (烷 )酰佛波醇乙酸酯 (TPA)处理前后由Cx4 3和Cx4 5所组成的多种异型GJ通道对荧光染料的偶联率。结果 :在不同的GJ中 ,同型GJ通道Cx4 3(HoCx4 3)偶联率最高。单侧异型GJ通道Cx4 3(MH4 3)和单侧异型GJ通道Cx4 5 (MH4 5 )的偶联率较之相关的HoCx4 3和同型GJ通道Cx4 5 (HoCx4 5 )低。从Cx4 5侧注入荧光染料的MH4 5偶联率较之从Cx4 3/ 4 5侧注射的MH4 5、双侧异型GJ通道Cx4 3/4 5 (BH4 3/ 4 5 )和HoCx4 5等的偶联率都低。TPA处理后HOCx4 3的偶联率降低 ,而当Cx4 3和Cx4 5组合成异型BH4 3/4 5和MH4 3通道其偶联率下降更显著。结论 :Cx4 3和Cx4 5共同表达可构成BH4 3/ 4 5、MH4 3和MH4 5等通道 ,而这些异型GJ通道可降低细胞间通信和对磷酸化的敏感性。有关MH4 5通道 ,其偶联率大小决定于荧光染料的注射方向 ,此可能与心律失常再折返的解剖学的机制有关。

异型缝隙连接通道选择通透性研究进展

缝隙连接通道（gap junction channels，GJ）由相邻细胞间连接蛋白（connexins，Cx）聚合形成六聚体半通道（连接子）对接组成。缝隙连接蛋白经四次跨膜（M1-M4）．产生两个胞外环（E1-E2）和一个胞内环，胞内环和羧基末端存在调控电导率，pH依赖性，电压依赖性和对小分子物质选择通透性区域Ⅲ。六个亚单位都相同则称之为同聚体连接子．两个或两个以上亚单位不同则称之为异聚体连接子，相同连接子对接形成同型缝隙连接．反之，称为异型缝隙连接。

异型缝隙连接通道和磷酸化对心脏缝隙连接的调变

目的 检测由缝隙连接蛋白 (connexin ,Cx) 4 3和Cx4 5组成的多种异型缝隙连接通道 (het eromultimericgapjunctionchannels ,HGJC)和磷酸化对缝隙连接 (gapjunction ,GJ)的调变作用。方法 将转染了编码为Cx4 3或Cx4 5的DNA后的Hela细胞放置在一起共同培养组成双侧和单侧异型GJ通道。显微注射若丹明 12 3(rhodamine 12 3,Rh)检测经 2 0 0nmol/L十四 (烷 )酰佛波醇乙酸酯 (12 0 tetrade canoylphorbol 13 acetae ,TPA)处理前后 ,在紫外光显示下由Cx4 3和Cx4 5所组成的不同GJ通道对荧光染料的偶联率 (couplingratio)。结果 在不同的GJ中 ,同型GJ通道Cx4 3(homotypicCx4 3,HoCx4 3)偶联率最高。从Cx4 5侧注入荧光染料的单侧异型GJ通道 4 5 (mono heteromericCx4 5 Cx4 3/4 5 ,MH4 5 )偶联率较之从Cx4 3/4 5侧注入荧光染料的MH4 5、双侧异型GJ通道Cx4 3/4 5 (bi heteromericCx4 3/4 5 ,BH4 3/4 5 )及同型GJ通道Cx4 5 (homotypicCx4 5 ,HoCx4 5 )等的偶联率是最低的。根据HoCx4 3或HoCx4 5通道的偶联率对各型通道偶联率进行标准化处理。BH4 3/4 5和MH4 3通道的偶联率均较HoCx4 3降低。对MH4 5通道来说 ,从Cx4 3/4 5侧注射的通道偶联率大于从Cx4 5侧注射的偶联率。TPA处理后HoCx4 3的偶联率降低 。