未成熟树突状细胞诱导异基因嵌合体的形成

目的：证实供体来源的未成熟树突状细胞（ｉｍＤＣｓ）主动免疫受体小鼠后可诱导形成异基因嵌合体。方法：应用供体（Ｃ５７ＢＬ／６）来源的骨髓细胞在体外培养出ｉｍＤＣｓ，灭活后静脉输注受体小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ），并于输注后不同时间输注供体来源的骨髓细胞，检测异基因嵌合体的形成。同时比较ｉｍＤＣｓ一次免疫与多次免疫对诱导嵌合体形成的影响。结果：在ｉｍＤＣｓ免疫后３ｄ输注骨髓细胞可诱导异基因嵌合体的形成，并持续１００ｄ以上；在免疫后５ｄ注射骨髓细胞只能形成短暂的（＜２１ｄ）、低水平（＜１％）的嵌合状态；７ｄ后则完全不能形成嵌合。应用一次和多次ｉｍＤＣｓ免疫均能诱导形成异基因嵌合体，且维持时间均大于１００ ｄ，但其嵌合程度有显著性统计学差异（Ｐ＜０．０５）。结论：应用供体来源的ｉｍＤＣｓ主动免疫受体可诱导形成异基因嵌合体。

未成熟树突状细胞诱导建立异基因嵌合体及延长移植物存活的可能机制

目的 :研究应用供体来源的未成熟树突状细胞 (imDCs)注射受体小鼠后 ,诱导形成异基因嵌合体及延长移植物存活的机制。方法 :(1)应用供体 (C5 7BL 6 )来源的骨髓细胞 ,在体外培养出imDCs ,灭活后体内输注或体外直接刺激受体小鼠(Balb C)的脾细胞 ,观察脾细胞对供体细胞的应答反应 ;(2 )取已建立异基因嵌合体并有效延长移植物存活的受体小鼠的脾细胞 ,观察其对供体细胞刺激的应答反应 ;(3)通过半定量RT PCR检测不同免疫状态下Th1 Th2型细胞因子的表达情况。结果 :应用imDCs体外预刺激脾细胞或体内注射imDCs受鼠的脾细胞 ,均呈现对供鼠脾细胞刺激的特异性低应答 ,这种低应答主要出现在受鼠脾细胞在供鼠脾细胞刺激后的 72小时内 ;建立异基因嵌合体并延长移植物存活的受鼠对来自供鼠脾细胞的刺激也表现为低应答 ,而对于无关第三者脾细胞的刺激仍保持较高水平 ,二者比较 ,统计学处理有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;在诱导形成异基因嵌合体及延长移植物存活的过程中 ,一定程度上显示出Th1 Th2模式的偏移。结论 :应用供体来源的imDCs注射给受体 ,诱导形成异基因嵌合体和延长移植物存活的机制可能与imDCs诱导受体T细胞无能有关 ,而且此过程中在一定程度上表现为Th1向Th2方向的免疫偏移。

B7反义肽预处理脾细胞诱导异基因嵌合体形成及延长移植物存活

目的 尝试以B7 CD2 8/CTLA4为靶点 ,用B7反义肽 (B7AP)预处理供者的脾细胞 ,免疫受者后结合输注供者骨髓细胞 ,诱导受体形成异基因嵌合体。方法 每只用 5× 10 6/ 10 0 μlB7AP预处理的供者小鼠 (C5 7BL/ 6 )脾细胞免疫受者小鼠 (BALB/c) ,诱导特异性同种低免疫应答反应 ;在此基础上每只受者小鼠输注供者骨髓细胞 2× 10 7/ 10 0 μl,诱导受者形成异基因嵌合体 ,以流式细胞术 (FACS)连续动态监测嵌合状态的维持情况并用小鼠心肌移植模型研究移植物存活的影响因素。结果 在受者体内成功诱导出了特异性同种低免疫应答反应 ,应答水平只有正常未免疫组的 4 3%(n =6 ,P <0 0 0 1) ;嵌合状态可以维持到 10 0d以上 (n =6 ) ,15 0d时嵌合率仍有 3.4 5 % ;嵌合小鼠进行同种异体小鼠心肌移植存活超过 10 0d(n =6 ) ,而对照组阿霉素组只能延长至 16d(n =6 )。结论 B7AP预处理小鼠脾细胞可诱导形成异基因嵌合体 ,并显著延长同种小鼠心肌移植存活的时间 ,为移植免疫的研究提供了一个简单易行的嵌合体平台技术 ,也为用B7AP在移植免疫中的应用进行了有益的尝试。

异基因嵌合体与移植耐受关系的研究Ⅱ成年小鼠联体共生诱导耐受的机制

将ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ－２＾ｄ）小鼠及Ｃ５７ＢＬ／Ｈ（Ｈ－２＾ｄ，Ｂ６）小鼠的脾细胞分别经尾静脉注射给对方，２ｄ后再分别腹腔注射环磷胺（ＣＹ）１５０ｍｇ／ｋｇ，ＣＹ注射后１ｄ对ＢＡＬＢ／ｃ及Ｂ６小鼠进行联体（ｐａｒａｂｉｏｓｉｓ），１周后分开并进行相互间的植皮。发现ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对Ｂ６小鼠的皮肤耐受期明显延长（ＭＳＴ＝２５．７ｄ）。

单核苷酸多态性及其在异基因造血干细胞移植中的应用

单核苷酸多态性是继限制性片段长度多态性 ,短串连重复序列多态性之后的第三代遗传标记 ,是基因组中变异最多的一种 ,被广泛应用于基因定位、克隆和遗传多样性研究以及法医学亲子鉴定等方面。作为一种稳定的遗传多态性 ,单核苷酸多态性成为异基因造血干细胞移植中嵌合体检测的新方法。本文就单核苷酸多态性的遗传特性 ,分析技术 ,在造血干细胞移植和其它方面的应用进行了综述。

骨髓非清除性异基因造血干细胞移植——造血干细胞移植的新观点

骨髓非清除性异基因造血干细胞移植是近年来出现的一种移植新技术。该技术方案对恶性疾病的治疗主要是通过移植后嵌合体的形成而产生移植物抗肿瘤效应 ,与标准异基因造血干细胞移植技术上的不同点主要在于预处理方案方面的差异。骨髓非清除性异基因造血干细胞移植的提出扩大了异基因造血干细胞移植的患者范围。本文对骨髓非清除性异基因造血干细胞移植技术的提出背景、动物实验研究及临床研究情况。

成年大鼠联体共生诱导肾移植耐受及其机制研究

目的 建立异基因大鼠联体共生的动物模型 ,探讨其诱导肾移植耐受机理。 方法 对DA和LEW大鼠实施联体手术并诱导耐受 ,然后进行DA→LEW的肾移植。FACS检测术后脾脏、胸腺中嵌合状态 ;检测体内、外过继转移耐受大鼠脾细胞对正常大鼠单向混合淋巴细胞反应 (MLR)和迟发性过敏反应 (DTH)的抑制作用 ,以及T细胞克隆不应答在耐受中的作用。 结果 联体共生诱导耐受可使DA→LEW的肾移植存活明显延长。耐受组脾脏、胸腺中供体细胞的嵌合比例明显高于排斥组。耐受可通过体内、外过继转移给正常大鼠。外源性IL 2可部分逆转耐受状态。 结论 嵌合状态与肾移植耐受存在明显相关性 ,克隆不应答。