ITS-RFLP分析进行昆虫病原线虫斯氏属和异小杆属的分类鉴定

本研究通过PCR扩增和六种限制性内切酶 (AluⅠ、HinfⅠ、MboⅠ、RsaⅠ、HaeⅢ和PvuⅡ )酶切 ,对国内害虫防治上常用的几种昆虫病原线虫 ,包括斯氏属S.car pocapsae、S.feltiae和S.glaseri以及异小杆属H .bacteriophora、H .zealandica、H .indicus和H .megidis等 8个品系rDNA -ITS进行分析 ,建立起可以区分各线虫种的标准RFLP图谱。该方法快速简便、稳定可靠 ,需要的样品量少 ,可以用于新鲜的、或冻存的样品 ,甚至分析单条的线虫。不仅可进行昆虫病原线虫的快速分类鉴定 ,而且进一步可以应用于线虫田间释放的辅助监测 ,实际田间感染率的测定和线虫毒力的比较。

昆虫病原线虫(斯氏属与异小杆属)应用概况

在自然界,线虫与昆虫的联系是普遍的。据目前所知,至少有27个科的线虫与16个目近3000种昆虫有联系(Nickole 1984,Poinar 1983),其分布是由寄主昆虫的栖境所决定的。这些线虫对害虫的种群起着自然调节的作用。线虫与昆虫联系的方式各异,使人最感兴趣的是那些能作为害虫生物防治的病原线虫。自从Oldhan(1933)首次提出利用线虫防治害虫以来。

昆虫病原线虫(斯氏属和异小杆属)遗传改良研究近况

昆虫病原线虫中的斯氏属和异小杆屑作为害虫生物防治的因子,正在世界许多国家应用并受到检验,对土壤和钻蛀害虫如葡萄黑象甲、茶藨透翅蛾、桃小食心虫、小木蠹蛾、荔枝拟木蠹蛾、荔枝龟背天牛、象鼻虫等已进行了大面积试验并取得了成功。由于昆虫病原线虫有较高的毒力;有广泛的寄主范围;容易用人工培养基培养且成本低廉;使用安全(已在美国EPA注册);对环境无污染等优点,有些国家已开始商品化生产。它与其他化学农药相比在环境保护和某些作物的害虫的防治上有一定的竞争优势。

昆虫病原线虫异小杆属新种Heterorhabditis beicherriana共生菌的分离及致病性

昆虫病原线虫共生菌在农业及医药领域已成为一种重要的生物活性资源。本研究通过致死的昆虫血腔和侵染期线虫直接分离线虫Heterorhabditis beicherriana的共生细菌,根据形态学特征、生理生化特性及16S rDNA序列初步鉴定为Photorhabdus luminescens,系统发育分析显示为发光杆菌属新亚种菌株。采用共生菌细菌体稀释液注射接种进行致病性测定,结果显示,每头大蜡螟幼虫接种菌量为600 cfu/mL,72 h时死亡率达到100%;24 h时LC_(50)为213.13 cfu/mL,48 h时LC50为46.87 cfu/mL。这为研究该线虫H.beicherriana的致病机制奠定基础,以期发掘新的具有重要价值的活性资源。

卡森斯氏和短尾异小杆单菌线虫的制备方法

本研究旨在建立一种利用昆虫病原线虫共生细菌培养单菌线虫的方法,可为检测线虫致病力和收集侵染期幼虫提供基础。首先分别分离了甘肃省抗低湿胁迫能力较强的卡森斯氏线虫(Steinernema kraussei) 0657L和非耐旱性短尾异小杆线虫(Heterorhabditis brevicaudis) 0641TY两个品系线虫的共生菌,然后在NBTB培养基上对分离到的共生细菌进行纯化和培养,随后将单菌落转移到LB培养基上。最后,从被侵染的大蜡螟(Galleria mellonella)体内收集种子怀卵成虫至培养有共生菌的LB上孵育,培养以收集侵染期线虫。研究结果表明,本研究所述方法简便快速地分离出了两个品系昆虫病原线虫的共生菌,并可通过培养共生菌收集侵染期线虫,筛选到一种直接从大蜡螟体内分离怀卵成虫至纯化的共生菌上孵育线虫,以快速准确获得整齐龄期的单菌线虫的简便方法。

昆虫病原线虫感染寄主行为研究进展

昆虫病原线虫斯氏属Steinernema和异小杆属Heterorhabditids线虫是新型的生物杀虫剂。其感染期幼虫是惟一能够侵染寄主昆虫的虫态。这类线虫感染寄主的行为分为寻找寄主、识别寄主和侵染寄主。文章综述昆虫病原线虫感染寄主昆虫的行为以及在感染寄主过程中的影响因素。

昆虫病原线虫对腰果细蛾的致病力测定

室内测定了Steinernema carpocapsae All、S.carpocapsae Biosys、S.glaseri NC52、S.longicaudum X-7、Heterorhabditis bacteriophora H06和H.indica LN2共6个昆虫病原线虫品系对腰果细蛾Acrocercops syngramma Meyrick幼虫的致病力。结果表明,线虫S.carpocapsae All、Biosys品系与线虫S.glaseri NC52对腰果细蛾幼虫的致死效果显著高于其它线虫,但供试的6个线虫品系均未能在腰果细蛾幼虫体内繁殖下一代,说明供试线虫在腰果细蛾幼虫体内难以繁殖。选择小卷蛾斯氏线虫S.carpocapsae All进一步研究其对腰果细蛾的致病力,结果发现,All线虫对腰果细蛾3龄幼虫处理24 h后的致死中浓度LC50为19.88 IJs/虫。腰果细蛾各龄幼虫和蛹对小卷蛾斯氏线虫S.carpocapsae All均表现出高度的敏感性,但不同幼虫龄期和处理时间敏感程度不同。小卷蛾斯氏线虫S.carpocapsae All对不同龄期腰果细蛾幼虫和蛹均表现出较强的致病力。

新型生防因子——昆虫病原线虫的研究进展

随着生物防治在农业系统发挥着越来重要的作用,昆虫病原线虫(Entomopathogenic nematode, EPN)作为一种新型的生防因子,成为一类防治害虫的生物资源,应用广泛。昆虫病原线虫研究的发展迅速,从分子生物学到应用生态学,使昆虫病原线虫在害虫可持续治理中具有巨大的应用潜力。

昆虫病原线虫和共生细菌定殖关系的研究进展

斯氏属Steinernema与异小杆属Heterorhabditis昆虫病原线虫是国际上新型的生物杀虫剂,分别与肠杆菌科Enterobacteriaceae的致病杆菌属Xenorhabdus和发光杆菌属Photorhabdus细菌互惠共生。这类线虫之所以对昆虫寄主具毒杀能力,定殖其体内的共生细菌发挥了关键性作用。共生细菌定殖于昆虫病原线虫感染期幼虫(infective juveniles,IJs)的肠道是线虫-细菌共生关系中的一个关键时期。通过特异性定殖,细菌由IJs携带进入新的昆虫寄主。本文从定殖过程、定殖位点、定殖相关基因及调控因子、以及定殖研究方法概述昆虫病原线虫和共生细菌定殖关系的研究进展。

昆虫病原线虫共生细菌共生性的分子生物学研究进展

嗜线虫致病杆菌属Xenorhabdus和发光杆菌属Photorhabdus细菌隶属肠杆菌科Enterobacteriaceae,对多种害虫致病能力强,分别与斯氏属Steinernema和异小杆属Heterorhabditis昆虫病原线虫互惠共生。该两属共生细菌既存在对昆虫寄主的病原性,又存在与线虫寄主的共生性。共生细菌与其线虫寄主的共生性主要表现以下4方面:(1)细菌产生食物信号诱导滞育不取食的感染期线虫恢复;(2)细菌为线虫生长与繁殖提供营养;(3)细菌能于感染期线虫的肠道定殖与生长;(4)细菌产生杀线虫毒素杀死非共生线虫。本文综述了共生菌以上4方面的共生性及其相关的分子机制。