异戊烯基腺苷组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法的建立

从样品制备，ＥＬＩＳＡ类型及免疫反应时间三方面着手建立了异戊烯基腺苷（ｉＰＡ）组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法。用ＮａＩＯ４氧化合成免疫原ｉＰＡ－Ｎ９－ＢＳＡ（ＢＳＡ：牛血清白蛋白）。由此获得的免抗血清效价达１：３４５００。交叉反应试验表明该抗血清只识别ｉＰＡ组细胞分裂素。因此本研究中采用直接型（即固相抗体型）ＥＬＩＳＡ，并将最佳免疫反应平衡时间缩短至３０ｍｉｎ（４℃）。所建立的ｉＰＡ组ＥＬＩＳＡ检测极限为４．７ｆｍｏｌｉＰＡ／孔，线性检测范围０．０１～５０ｐｍｏｌｉＰＡ／孔，板内、板间的变异系数分别为３．７％和５．３％。样品的稀释曲线与标准曲线平行，回收率为８７．１％，表明本研究中采用的８０％甲醇提取、Ｓｅｐ－ｐａｋＣ１８柱初纯化的快速制样程序适合于该ＥＬＩＳＡ。对大豆植株不同部位ｉＰＡｓ含量测定结果表明，根瘤与根尖内ｉＰＡｓ含量显著高于幼叶与顶芽内的ｉＰＡｓ含量。

6－苄基腺嘌呤对大麦耐盐性的调节机理

外施１０－９ｍｏｌ／Ｌ６－苄基腺嘌呤（６－ＢＡ）可促进大麦种子的出苗并缓解盐胁迫对大麦生长的抑制。在２００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ胁迫下，耐盐性较强的鉴４根尖内源异戊烯基腺苷组（ｉＰＡｓ）含量较高，维持高含量的时间较长；而科品７号根尖ｉＰＡｓ含量则迅速下降。外源６－ＢＡ使两者ｉＰＡｓ含量增高。盐胁迫下鉴４叶片中腐胺（Ｐｕｔ）含量比较稳定，而科品７号叶片中Ｐｕｔ含量却明显上升。外源６－ＢＡ、ＡＢＡ和Ｃａ（ＮＯ３）２使科品７号中Ｐｕｔ含量明显下降，使鉴４中精胺（Ｓｐｍ）含量上升。

苹果腺苷-异戊烯基转移酶基因的组织表达分析

为深入研究MdIPTs基因在苹果细胞分裂素合成途径中的作用和利用转基因技术改良苹果树型,分析苹果(Malus×Domestica Borkh.)A-IPTs基因的时空表达,本研究以‘富士’苹果(M.Domestica Borkh.cv.Fuji)及其组培苗为试材,利用半定量RT-PCR方法分析7个A-IPTs基因在梢尖、幼叶、茎段节间、皮部组织、叶芽、花芽、花蕾、花、幼果和根部的表达水平。结果表明:MdIPT3a总体表达水平最高、MdIPT1b次之,在所检测的器官组织中均有表达;MdIPT5a在花蕾和花中表达量高,MdIPT5b在梢尖和幼叶中表达量高;MdIPT1a在根、皮部组织和叶芽中检测到微弱表达,MdIPT3b仅在组培苗的茎段中节间微弱表达;所检测的组织器官中未检测到MdIPT7a表达。苹果7个A-IPTs基因具有组织表达特异性,高度同源的成对基因的组织表达模式不同。

基因组信息指导的星海链霉菌中2-甲硫基-N^6-(4-羟基异戊烯基)-腺苷的分离鉴定

【目的】研究海洋链霉菌新种星海链霉菌Streptomyces xinghaiensis NRRL B24674~T次级代谢物中是否存在2-甲硫基-N^6-异戊烯基修饰的腺苷。【方法】通过生物信息学分析星海链霉菌S.xinghaiensis NRRL B24674~T基因组序列,寻找这类化合物的生物合成相关基因;采用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和高效液相色谱等分离技术对该菌株的发酵粗提物进行分离纯化;利用质谱与核磁共振等波谱技术鉴定化合物的结构。【结果】在星海链霉菌基因组中找到含有2-甲硫基-N^6-异戊烯基修饰的化合物生物合成途径中的2个同源蛋白;从该菌的发酵液中分离鉴定了2-甲硫基-N^6-(4-羟基异戊烯基)-腺苷(ms2io6A)。【结论】星海链霉菌S.xinghaiensis NRRL B24674~T存在此类腺苷修饰反应,并且是首次在链霉菌中发现此类腺苷修饰。生物信息学分析预示着链霉菌中可能普遍存在此类核酸或者核苷修饰。

甾类激素炔雌醇、炔诺酮和左炔诺孕酮对拟南芥根生长的影响

采用不同浓度的人工合成甾类激素炔雌醇、炔诺酮和左炔诺孕酮处理拟南芥幼苗,研究3种激素对其根生长和根中内源激素含量的影响.结果表明:(1)30μg?L-1炔雌醇处理显著促进主根的伸长、侧根数及侧根总长的增加,促进主根根毛数和地下部鲜重的增加,增大内源IAA和iPAs含量,以及IAA/iPAs比值;3 000μg?L-1炔雌醇处理则增加主根的弯曲度;(2)炔诺酮活性相对较弱,浓度为300μg?L-1时对主根长、侧根数、侧根总长的促进效果最大,IAA含量增加而iPAs含量降低,IAA/iPAs比值最大;3 000μg?L-1炔诺酮则引起主根弯曲,抑制根毛的生长,但促进侧根数和的地下部鲜重的增加;(3)左炔诺孕酮的活性较高,3μg?L-1时对拟南芥主根长、主根根毛数增加最为显著;300μg?L-1时对侧根数、根毛密度的增幅最大,IAA含量增加,IAA/iPAs比值最大;3 000μg?L-1时显著抑制主根的生长和侧根的生成.

LC-MS同时测定大型海藻中9个植物激素

目的:利用高效液相色谱-三重四极杆质谱(HPLC-QqQ MS)联用分析系统建立几种大型海藻中植物激素的分析方法。方法:冷冻干燥后的藻样用甲醇-水-甲酸(15∶4∶1,v/v/v)提取。9个中、酸性植物激素分别在Hypersil Gold C18色谱柱上实现分离,流动相为水(A)-甲醇(B),梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温30℃。在电喷雾电离源正离子模式下,分别取m/z 130.0,204.1,136.1,220.0作为吲哚乙酸、异戊烯腺苷、异戊烯腺嘌呤和反式玉米素核苷的定量目标离子;在负离子模式下分别取153.3,91.3,93.2,143.2,59.5作为脱落酸、苯乙酸、水杨酸、赤霉素和茉莉酸的定量目标离子进行检测。结果:植物激素浓度在5～500μg·L-1范围内线性良好,检测限为0.0041～0.8622μg·L-1,回收率在61.33%～90.39%之间,RSD<11%(n=3)。结论:本法操作简单,准确可靠,适用于藻类植物激素的含量检测。