白藜芦醇对于异抗原刺激下大鼠T淋巴细胞活化增殖的影响

目的研究白藜芦醇(RSV)对于异抗原刺激下大鼠T淋巴细胞活化增殖的影响。方法建立SD-Wistar大鼠腹腔异位心脏移植模型急性排斥反应模型,分离受体脾脏淋巴细胞与成年供体系SD大鼠心肌细胞体外混合培养,分别给予不同剂量RSV与CSA干预,观察RSV与CSA对体外混合培养下T淋巴细胞增殖的影响;通过ELISA法检测两者对细胞因子IL-2的影响。结果 RSV可以抑制共培养细胞中T淋巴细胞增殖,减低培养上清中IL-2活性,作用强弱表现出明显的剂量依赖性,与CSA有协同性。结论 RSV在体外淋巴细胞培养中表现免疫抑制作用。

白藜芦醇对异抗原刺激下大鼠T淋巴细胞NFκB表达的影响

目的研究白藜芦醇(RES)对异抗原刺激下大鼠T淋巴细胞NFκB表达的影响。方法建立SD-Wistar大鼠腹腔异位心脏移植模型急性排斥反应模型,分离受体脾脏淋巴细胞与成年供体系SD大鼠心肌细胞体外混合培养,分别给予不同剂量RES与CsA干预,通过免疫组化方法测定RES与CsA对体外混合培养下T淋巴细胞NFκB表达。结果不同剂量RES对T淋巴细胞NFκB表达影响具有统计学意义。结论

牛、猪红细胞表面异种抗原改造的比较

把动物红细胞输用给人,即异种输血,可以缓解目前血源紧张的矛盾,但牛和猪的红细胞与人的血浆发生强烈的凝集反应,不能直接输用。本研究首次对牛和猪红细胞表面抗原进行修饰改造,并对改造后的猪、牛红细胞进行比较,从而为开拓丰富来源、安全有效的人血代用品奠定基础。使用基因重组的咖啡豆α半乳糖苷酶清除牛和猪红细胞表面的主要异种抗原αGal抗原,结合使用化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰遮蔽牛和猪红细胞表面的非主要异种抗原nonαGal抗原,以实现对牛和猪红细胞表面异种抗原的改造。结果:改造后的牛、猪红细胞与人混合血浆的盐水凝集反应消失,具有和人红细胞相似的血清学特征;牛红细胞比猪红细胞脆性低,异种抗原的表达量低,及其他的一些特征说明牛红细胞比猪红细胞更适合作为人红细胞代用品。结论:改造后的牛红细胞与人血浆相匹配,有可能成为人红细胞代用品。

康肠灵对异种抗原诱导的大鼠实验性溃疡性结肠炎的治疗作用及机制探讨

目的:观察康肠灵对异种抗原诱导的大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。方法:兔结肠粘膜加完全弗氏佐剂经皮下多点注射大鼠造成溃疡性结肠炎模型。给药治疗2周,观察大鼠精神饮食活动、食量、体重的变化;免疫组化法检测CD4、CD8;放免法检测结肠组织TNF-α含量;肉眼观察结肠组织形态学改变,并取结肠粘膜作病理检查。结果:模型组动物可见软便,个别拉稀便,活动、饮食减少,毛发欠光泽。结肠肉眼可见溃疡形成,粘膜纹理粗糙,甚者纹理消失,肠壁变薄,个别大鼠粘膜层坏死脱落。镜下炎性细胞(以淋巴细胞为主)浸润明显,炎症至粘膜下层,杯状细胞重度减少,可见肉芽肿,甚至可见重度纤维化。外周血CD4、CD8显著下降,组织TNF-α显著升高。康肠灵治疗后大鼠稀便渐停,饮食、活动逐渐恢复正常。结肠肉眼未见溃疡,镜下炎性细胞浸润减少,炎症多局限于粘膜层,杯状细胞轻度减少,未见肉芽组织,尚有一定程度纤维化。外周血CD4、CD8显著升高,结肠组织TNF-α显著下降。结论:康肠灵对异种抗原引发的大鼠溃疡性结肠炎模型有治疗作用,其机制可能与影响免疫,抑制炎症反应有关。

中国版纳近交系小型猪心脏异种抗原表位α1,3-Gal的分布

目的 研究中国版纳小型猪心脏的异种抗原α1,3 Gal的分布和半定量分析 ,为小型猪心脏的转基因和异种移植提供资料。方法 通过亲和免疫组织化学法和图像分析对 10头版纳小型猪心脏进行α1,3 Gal的分布和半定量研究。结果 α1,3 Gal主要分布于细胞膜 ,细胞浆也有少量表达 ,胞核无表达。在小型猪心内膜、心肌间质、心外膜、神经束膜等处有α1,3 Gal分布 ,心肌细胞未发现α1,3 Gal分布。半定量分析发现α1,3 Gal表达量心房内膜最多 ,心肌间质最少。结论 异种抗原α1,3 Gal在心脏中的表达存在较大差异 。

大鼠睾丸异种抗原的血清学筛选

目的 通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法 将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果 通过两轮筛选获得 10个阳性克隆。通过生物信息学分析认为这 10个阳性单克隆 c DNA序列编码 7种不同的蛋白 ,其中 OV- 2、OV- 4为肿瘤相关序列 ,OV- 6、OV- 7为编码未知蛋白的序列。结论 用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了 SEREX技术的应用范围 ,是一种行之有效的方法。

版纳微型猪近交系椎间盘异种抗原α-半乳糖基的分布

目的 探讨中国版纳微型猪近交系 (BMI)椎间盘组织中异种抗原的分布 ,为临床猪 -人异种椎间盘移植提供依据。方法 采用 BMI 6头 ,雄性 ,8～ 11月龄的 L1～ 5椎间盘组织 ,常规福尔马林固定 ,石蜡包埋切片。以植物凝集素 (BSI- B4 )作为亲和物质 ,采用免疫组织化学 SABC方法、DAB显色 ,观察猪椎间盘组织中异种抗原 (α-半乳糖基 )的分布情况。结果 椎间盘纤维环软骨细胞及髓核软骨样细胞核膜有阳性染色的黄色颗粒沉着 ,而基质、弹力及胶原纤维无着色。结论 BMI椎间盘组织中有异种抗原存在 ,但抗原表达较弱 。

去抗原异种松质骨复合骨髓基质干细胞修复骨缺损

目的研制理想的能够修复骨缺损的骨材料,为其在骨缺损修复领域中的临床应用提供实验依据。方法体外扩增诱导兔骨髓基质干细胞,将其与去抗原异种松质骨复合培养。造成兔桡骨中段10mm骨缺损模型,分复合细胞组、单纯材料组、空白对照组。通过大体观察、放射学检查、组织学检查观察骨缺损的修复情况。结果去抗原异种松质骨复合骨髓基质干细胞修复兔桡骨缺损,12周时缺损区完全被新骨代替,骨髓腔完全通畅,优于单纯材料组的修复效果,单纯材料组优于空白对照组。结论去抗原异种松质骨具有良好的成骨能力,有可能成为理想的骨支架材料。

从健康人外周血中建立异种抗原特异性的T细胞系初探

目的 :为了探讨异种器官移植中T细胞参与的免疫排斥机理 ,从健康人外周血中试行建立识别猪淋巴细胞抗原特异性的T细胞系方法研究。方法 :通过照光致弱的猪外周血单个核细胞反复刺激人的T淋巴细胞 ,3H TdR掺入法筛选特异性增殖的T细胞。结果 :获得 2株为TCRαβ+CD3+CD8+细胞 ,另 1株为TCRαβ+CD3+CD4+细胞。结论 :健康人外周血中有识别异种抗原特异性的T细胞系 。

去抗原异种松质骨材料的生物相容性研究

目的研究去抗原异种松质骨支架材料的生物相容性,为其在骨缺损修复领域中的临床应用提供实验依据。方法对去抗原异种松质骨支架材料进行急性毒性实验、热源实验、溶血实验、凝血实验、兔肌肉内种植实验和兔桡骨骨缺损修复实验研究。结果去抗原异种松质骨支架材料无毒性、无热源性、不引起溶血和凝血反应,植入兔肌肉后逐渐发生生物降解并被纤维组织取代,兔骨缺损区植入后可被骨组织取代。结论去抗原异种松质骨支架材料具有良好的生物相容性,是理想的骨支架材料。

异种去抗原松质骨成骨效能的实验研究

目的:研究异种去抗原松质骨与基因重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)复合后的生物相容性和成骨效能。方法:28只新西兰大白兔28处颌骨缺损完全随机分为3组:异种去抗原松质骨/rhBMP-2组(A组)、异种去抗原松质骨组(B组)和空白对照组(C组)。A组和B组每组12处骨缺损,于4、8和12周分别进行大体观察、X线检查、HE染色和新生骨量测定;C组共4处骨缺损于12周时进行大体观察、X线检查和HE染色。结果:X线显示,随着时间的增长,2组的植入骨逐渐降解吸收,由自体骨替代,A组较B组显著;C组12周时无法完成愈合。骨密度测量显示,随着时间的增长,A和B组的骨密度值增加,2组之间存在显著差异(P<0.05)。HE染色可见A组的新生血管、纤维组织和新生骨均较B组多;植入骨降解速度快于B组;A组新生骨面积大于B组(P<0.05)。结论:异种去抗原松质骨是rhBMP-2的良好载体;异种去抗原松质骨/rhBMP-2复合材料能持续成骨,可加速骨缺损修复的速度,是一种较好的骨修复材料。

异种抗原免疫序贯瘤内注射对肿瘤浸润淋巴细胞的影响

目的研究异种抗原免疫序贯瘤内注射对瘤荷小鼠的治疗作用,以及该方法对肿瘤浸润淋巴细胞的影响。方法使用异种抗原免疫序贯瘤内注射的方法处理小鼠,观察肿瘤的大小,分离肿瘤浸润淋巴细胞,并利用流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及各细胞亚群的比例。结果各组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞的CD3+T细胞数量差异无显著性。免疫后治疗组中的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞以及CD3+CD4+CD25+T细胞所占比例分别为54%、22%和2.91%,其中CD4+与CD8+的比值为2.49,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论异种抗原序贯瘤内注射方法可以增加肿瘤微环境中效应细胞的数量,减少CD3+CD4+CD25+T调节细胞的表达,具有显著的抗肿瘤效应。

CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中的机制研究

目的:通过靶向CTLA4 siRNA探讨CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法:体外扩增培养利用磁珠分选出的T调节细胞,AO/PI染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线,流式细胞仪检测扩增后细胞表型;采用Alex488染料标记siRNA,通过流式细胞仪检测siRNA的转染效率;实时定量PCR检测靶向CTLA4 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测CTLA4在蛋白水平的变化;混合淋巴实验检测CTLA4表达下调后,T调节细胞的功能变化。结果:经过4周体外扩增,T调节细胞能够增长约1 200倍,并具有高活率和高纯度;siRNA的转染效率为61.8%±4.5%;Realtime PCR和流式细胞术检测CTLA4在mRNA水平和蛋白水平均有不同程度下降,其结果与对照组相比差异显著(P<0.05);混合淋巴实验结果显示T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖,Treg细胞能够抑制这种增殖,但是CTLA4表达下调后明显减弱了T调节细胞的抑制能力。进一步,在DC细胞参与的混合淋巴实验中发现Treg能够通过DC抑制T效应细胞对异种抗原的应答,而si CTLA4-Treg不能通过DC抑制T效应细胞增殖。结论:CTLA4在Treg介导的异种免疫应答中发挥着重要作用,这种作用方式可能是通过直接作用于T效应细胞或者间接通过DC细胞作用于T效应细胞发挥作用。靶向CTLA4 siRNA能够下调Treg细胞CTLA4的表达,影响Treg细胞抑制异种抗原引起T效应细胞应答的能力。

异种抗原治疗肿瘤对荷瘤小鼠调节性T细胞的影响

目的研究异种抗原免疫续贯瘤内注射的方法对荷瘤小鼠肿瘤局部调节性T细胞数量的影响,及其对肿瘤的治疗作用。方法利用异种抗原免疫续贯瘤内注射的方法处理试验小鼠,测量瘤块大小,计算抑瘤率,使用流式细胞术检测肿瘤主要组织相备性合体Ⅰ类(MHC-Ⅰ)类型表达及调节性T细胞的数量,使用ELISA方法检测瘤内白细胞介素2(IL-2)浓度。结果实验组小鼠的MHC-Ⅰantigen、CD3+CD8+T细胞以及CD3+CD4+CD25+T细胞的表达率分别为42.45%、22.58%和2.91%,IL-2的浓度为100.6pg/ml,与免疫对照组和空白对照组之间存在显著性差异(P<0.01)。结论异种抗原免疫续贯瘤内注射的治疗方法可以上调肿瘤MHC-Ⅰ类抗原,减少肿瘤局部调节性T细胞的数量,有良好的抗肿瘤作用。

中国内江猪胰腺组织异种抗原的研究

为获取临床猪→人异种胰腺移植的基础资料 ,分别采用植物凝集素 BSIB4、健康人血清、人类血型抗原 A、B、H物质单克隆抗体免疫组化法检测 1 0头内江猪胰腺组织中异种移植抗原的表达。结果显示 :内江猪胰腺组织中血管内皮、导管上皮细胞表达α- Gal;部分胰岛细胞、胰腺外分泌细胞和所有导管上皮细胞均表达人类血型 A抗原。结论 :人体内存在抗内江猪胰腺组织部分细胞的天然抗体 ;

以异种抗原ⅡFA检测间日疟抗体的观察

在以间接免疫荧光抗体试验(IIFA)对间日疟病人进行检测时,因间日疟原虫的培养尚未得到完全成功,只能采用以间日疟原虫人工感染的夜猴或黑猩猩血或病人血来制备抗原片。但是这些来源的代价很高,我国尚难加以采用。为了观察几种来源比较容易的异种抗原的检测效果,我们以猴的食蟹猴疟原虫。

五指山小型猪单个核细胞表面α Gal抗原表达差异的分析

利用猪的器官为挽救脏器终末衰竭病人而进行的异种移植是有效救治病人的途径之一.由于猪细胞表面存在的α1,3半乳糖会引起超急性免疫排斥反应,导致移植器官最终被移植受体排斥.除人类和旧大陆猴外,所有哺乳动物细胞表面都有αGal半乳糖表达,但个体间表达量存在显著差异.为研究近交系五指山小型猪细胞表面α1,3半乳糖表达的个体差异,本实验利用FITC-isolectin进行荧光标记,通过流式细胞术以及激光共聚焦分析,对14例5月龄猪样本外周血单个核细胞表面的α1,3半乳糖水平进行检测.利用猪肾上皮PK15细胞确定FITC-isolectin标记的最适浓度为25ng/μl(细胞标记效率大于85%).结果显示,14头猪外周血单个核细胞表面α1,3半乳糖的表达差异范围在1.25～2.09倍之间,远低于普通非近交系猪的个体差异.本研究为利用近交系五指山小型猪作为异种器官移植的研究材料提供了基础数据.

异种移植抗原α-gal介导人血清杀伤A549细胞的实验研究

背景与目的人体α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3Galactosy ltransferase,α-1,3GT)基因功能失活而不表达α-半乳糖基(α-galactosyl,α-gal)表位,但天然存在着大量抗α-gal抗体,异种器官移植研究结果提示,在人肿瘤细胞上重新表达异种移植抗原α-gal,可能诱发类似于宿主抗移植物超急性排斥反应的抗肿瘤效应。本研究通过基因导入手段,建立稳定表达异种移植抗原α-gal的转基因人肺癌细胞系,探讨α-gal介导的人血清抗肿瘤的可能性及其机制。方法将前期成功构建的α-1,3GT基因真核表达质粒pEGFP-N1-GT瞬时转染人肺腺癌细胞A549,筛选并建立稳定的转基因细胞系A549-GT。MTT增殖实验和显微镜观察转基因细胞生物学特性变化;RT-PCR检测A549-GT中α-1,3GT基因mRNA表达;荧光素标记的凝集素(FITC-BS-IB4lectin)染色检测α-1,3GT在肿瘤细胞表面合成α-gal的能力;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人细胞共培养,检验α-1,3GT基因的稳定性和酶活性的稳定性;人血清结合实验检测A549-GT与IgM和补体C3结合情况。结果RT-PCR检测到转基因细胞系A549-GT中有α-1,3GTmRNA表达。荧光显微镜和流式细胞术检测结果显示:A549-GT能够长期稳定表达异种移植抗原α-gal表位;A549-GT与其亲本细胞在生长形态及增殖速度上无明显差异;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人胚肺成纤维细胞MRC-5共培养均不能使MRC-5获得α-gal合成能力;经人血清处理后,荧光免疫实验观察到转基因细胞系A549-GT能与血清抗体IgM结合并诱导补体C3结合。结论异种移植抗原α-gal在肿瘤细胞上的重新表达,可能通过补体依赖的细胞毒机制,介导类似于异种器官移植排斥反应的抗肿瘤效应。

异种抗原免疫序贯瘤内注射对瘤荷小鼠的免疫治疗作用

目的研究异种抗原免疫序贯瘤内注射对瘤荷小鼠免疫功能的影响及其对肿瘤的抑制作用。方法使用异种抗原免疫序贯瘤内注射的方法处理小鼠,观察肿瘤大小,利用流式细胞术检测各细胞亚群的比例。用ELISA方法检测肿瘤组织内细胞因子的浓度。结果各组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞的CD3+T细胞数量没有统计学差异。免疫后治疗组中的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞以及CD3+CD4+CD25+T细胞所占比例分别为54%、22%和2.91%,其中CD4+与CD8+的比值为2.49,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。治疗组IL-2浓度为100.61pg/ml,TNF-α浓度是54.11pg/ml,与各对照组之间均存在显著性差异(P<0.05)。结论异种抗原序贯瘤内注射方法可以增加肿瘤微环境中效应细胞的数量及细胞因子的浓度,减少CD3+CD4+CD25+T调节细胞的表达,具有显著的抗肿瘤作用。

异基因抗原嵌合小鼠的皮片移植实验观察

目的 :观察异基因抗原嵌合小鼠的移植物抗宿主反应 (GVHD) ,以诱导骨髓移植物的免疫抑制。方法 :经尾静脉给单抗诱导供体鼠 (ICR)系小鼠注入抗CD4、CD8单抗 ,10天后输注昆明系小鼠的骨髓。输注 1周后 ,将正常昆明系小鼠皮片移植至嵌合后的ICR小鼠及未嵌合的ICR小鼠背部。结果 :经Wilcoxon检验 ,试验组和对照组皮片的存活率分别为 6 6 .6 %和 33.3% ,P <0 .0 5。结论 :异基因抗原嵌合小鼠的皮片移植成功率高。