外周血APPmRNA、血小板APP异构体比值辅助诊断阿尔茨海默病的临床价值

目的:基于外周血淀粉样前体蛋白(APP)mRNA、血小板APP130KD/APP106KD(APP异构体比值)检测,验证APPmRNA、血小板APP异构体比值作为辅助阿尔茨海默病(AD)早期临床诊断的价值.方法:依据相关诊断标准纳入轻度老年痴呆症病人28例,另选择年龄和文化程度相当、无神经系统疾病、简易智能状态检查(MMSE)≥27分、头颅CT或MRI检查证实无脑萎缩和脑梗死者30名作为健康对照组.分别检测患病组及健康对照组MMSE(简易智能状态检查)、外周血APPmRNA和血小板APP异构体比率.结果:外周血APPmRNA与老年痴呆症病人缺乏相关性;而血小板APP异构体比值与老年痴呆症则具有明显相关性,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:血小板APP异构体比值与老年痴呆症具有相关性,其作为辅助AD早期临床诊断及客观评价AD病情的指标有一定应用价值.

基于KL散度的RNA-Seq数据差异异构体比例检测

近年来,RNA-seq技术被广泛应用于差异表达基因和异构体的检测,但目前大多数方法都是识别单个异构体的差异表达,无法同时检测同一个基因中所包含异构体表达比例的差异,因此提出一个差异异构体比例检测方法。该方法基于先前设计的sLDASeq模型,运用该模型中隐含变量的概率分布,采用KL散度进行差异异构体比例的分析。首先使用最新的SEQC数据集评估sLDASeq模型表达水平的性能,结果表明该方法能准确地估计基因中异构体的比例。接着通过模拟数据集进行差异异构体比例的检测,与其他方法相比,实验结果表明该方法在差异异构体比例检测方面具有较高的准确性。

正常人骨髓不同细胞群中WT1基因表达及其异构体比例研究

本研究探讨WT1基因在正常人骨髓不同分化阶段造血细胞中的表达程度及异构体间比例关系。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测18例正常人骨髓标本中CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+、CD33+CD14+、CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中总WT1、WT1(+17AA)及WT1(+KTS)的表达。结果表明:与K562细胞相比,CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+和CD33+CD14+细胞群中均存在WT1基因的低表达,且依次逐渐降低;在CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中未检测到WT1基因表达。在分化程度较低的CD34+CD38-和CD34+CD38+细胞群中以+17AA,+KTS及WT1(+/+)异构体为主,而较成熟的CD15+CD11b+和CD33+CD14+细胞群中以-17AA、-KTS及WT1(-/-)异构体为主。结论:在正常人骨髓细胞中WT1基因的表达随着细胞分化程度提高而降低,造血细胞可能通过其4种异构体比例的调整而发挥抑制或促进分化的作用。

WT1基因异构体比例转变对白血病细胞株NB4增殖的影响

背景与目的:WT1基因编码一个锌指转录因子,在白血病细胞中高表达并与预后呈负相关。WT1基因mRNA通过2个可变性的剪切位点产生4种不同的拼接异构体,4种异构体在表达WT1的不同组织中各以其相对稳定的比例表达,白血病细胞中WT1不同异构体表达的意义尚不清楚。本研究拟用WT1基因异构体WTA转导急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4,以探讨WT1基因异构体对NB4细胞增殖的影响及其分子机制。方法:用电穿孔的方法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的细胞株并用有限稀释法进行单克隆化。采用台盼蓝拒染法、MTT比色法、甲基纤维素集落形成实验及细胞周期动力学检测,了解WT1基因异构体表达比例改变对NB4细胞生长的影响。用半定量RT-PCR检测NB4细胞中p53、p21、CyclinE、CyclinD1、CyclinA1基因表达的改变。结果:WT1基因异构体能够通过电穿孔方法成功转染NB4细胞,外源基因在NB4细胞中稳定整合及表达,并通过有限稀释法将永久表达细胞株单克隆化。用台盼蓝拒染法绘制细胞生长曲线,提示转染WT1基因异构体的细胞NB4/WTA生长明显慢于对照组NB4/CMV细胞及未转染的NB4细胞,NB4/WTA细胞生长曲线平缓,在第3天达平台期(78.7±18.0)×104/ml,对照组NB4/CMV细胞及NB4细胞在第4天出现生长平台期达(146.0±21.0)×104/ml。MTT法检测细胞增殖活性,结果显示,NB4/WTA细胞在各个时间段的抑制率均高于对照组,P<0.005。甲基纤维素集落形成试验中NB4/WTA克隆形成率明显下降,集落形成抑制率为46.9%。在As2O3(终浓度0.2μmol·L-1)作用后集落形成抑制更加明显。细胞周期动力学检测提示,NB4/WTA组S期细胞比例升高。RT-PCR检查提示,NB4/WTA细胞p21、CyclinA1基因的表达较对照组升高。结论:增加外源性WT1基因异构体WTA的表达将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型,能抑制NB4细胞的增殖,使其克隆形成能力明显下降。这可能与p21、CyclinA1基因表达上调,细胞周期阻滞于S期有关。

WT1异构体比例转变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响

目的:探讨WT1异构体比例改变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响。方法:逆转录获得人WT1(17AA-/KTS-)异构体全长cDNA序列,连接到PCDH1-MCS1-EF1-copGFP慢病毒质粒载体上,酶切和测序证实正确构建重组质粒,建立WT1异构体表达比例改变的单克隆细胞株。MTT法检测细胞增殖活性,形态学观察及Annexin V检测细胞凋亡。结果:成功构建了真核表达载体PCDH1-MCS1-EF1-copGFP-WT1(17AA-/KTS-),转染HL-60细胞后,实时荧光定量RT-PCR和Western blotting显示重组质粒转染细胞中WT1(17AA-/KTS-)mR-NA和蛋白水平明显高于空质粒转染组和正常对照组。重组质粒转染细胞的生长抑制率高于空质粒转染组和正常对照组,差异显著(P<0.05)。加2μmol/L三氧化二砷(As2O3)培养48 h后,形态学观察发现3组细胞都出现了凋亡形态,但重组质粒转染细胞更为明显。流式细胞术结果显示,As2O3作用24 h后,重组质粒转染细胞凋亡率较空质粒转染组和正常对照组细胞升高,差异显著(P<0.05)。结论:增加外源性WT1(17AA-/KTS-)异构体的表达能抑制HL-60细胞增殖,促进As2O3诱导的细胞凋亡。

两种干燥方式对土壤中多环芳烃回收率及同分异构体比值的影响

通过实验室模拟向泥炭土和农田土添加不同量的外源多环芳烃单体标准物质,经冷冻干燥和自然风干处理后,用气相色谱-质谱法(GC-MS)对土壤中16种外源多环芳烃单体进行测定,分析两种干燥方式对土壤外源多环芳烃回收率和同分异构体比值的影响,以反映不同干燥方式下土壤中多环芳烃测定的准确度及自然土壤多环芳烃来源判定的差异.实验结果表明:泥炭土随外源多环芳烃添加量的增加,多环芳烃总量回收率呈先降低后增加的趋势,在相同添加量下,风干处理的多环芳烃总量回收率(56.29%~80.15%)均高于冻干处理的回收率(52.82%~78.31%),泥炭土单体多环芳烃低环组分风干处理高于冻干处理的回收率,高环组分冻干处理高于风干处理的回收率;不同干燥方式处理下农田土中多环芳烃总量回收率差异显著(P<0.05),经冻干处理后的总量回收率为64.40%~73.81%,经风干处理后的总量回收率为40.88%~57.01%,其单体多环芳烃冻干处理均高于风干处理的回收率;两种土壤的有机质质量比和含水率不同可能是导致多环芳烃总量和单体回收率差异的主要因素;在两种干燥方式处理下,泥炭土中不同多环芳烃同分异构体比值无显著差异,农田土中多环芳烃同分异构体比值受干燥方式影响显著.

二硝基甲苯生产过程中异构体比例的控制

说明了用泵的连续硝化由甲苯生产二硝基甲苯的过程 ,讨论了混酸组成、泵转速和反应温度对产品异构体比例的影响 ,试验确定了适宜的Ⅰ、Ⅱ硝化反应温度。

影响甲苯一硝化反应异构体比例因素的探讨

在甲苯硝化生产中,以邻、对位硝化产物为主,而且邻位异构体的生成量往往远比对位多。在一般条件下,邻位异构体的生成率约56～60%,间位约4～5%,而对位36～40%,即o/p比值在1.4～1.66之间。影响异构体的比例因素是多种多样的,现就主要的讨论如下。

5R,6S-Tg立体异构体稳定构型的理论研究

胸腺嘧啶二醇(Thymine glycol,Tg)是最常见的DNA氧化损伤,人体基因组内含有数千个Tg损伤.Tg对DNA聚合酶有强的阻断,可能导致细胞死亡、癌症等严重后果.一旦生成,Tg就以两对顺反立体异构体混合物的形式存在,修复酶对Tg的修复表现出立体选择性.在所有的异构体中,5R,6S-Tg数量最多.NMR实验表明5R,6S-Tg 5-CH_(3)可能存在轴向或赤道两种不同构象,但是5R,6S-Tg最稳定构象依然存在争论.基于碱基水平的理论研究表明5R,6S-Tg 5-CH_(3)取向为轴向时最稳定.然而,本研究在核苷水平的计算表明,5-CH_(3)取向为赤道时最稳定,高精度的簇耦合理论CCSD(T)/6-311++G(d,p)对结果进行了验证.进一步的分析表明,分子内氢键和氧孤电子对之间的π-π共轭协同作用稳定了5R,6S-Tg的赤道构象.

利用全碰撞能二级质谱区分4个三萜酸同分异构体

本研究采用全碰撞能二级质谱(FCER-MS^(2))区分4个三萜酸同分异构体,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(UPLC-QE-Qrbitrap-MS)采集熊果酸、齐墩果酸、α-乳香酸和β-乳香酸的高分辨质谱数据,归属各碎片离子。利用在线能量分辨质谱(online ER-MS)法进一步采集主要碎片离子在不同碰撞能下的丰度变化,通过“S”曲线或高斯曲线拟合,归一化后构建FCER-MS^(2)图谱;计算[M+H]+的半数响应碰撞能(CE_(50))、碎片离子的最佳碰撞能(OCE)、最大相对离子丰度(RⅡ_(max))等参数,并将其应用于同分异构体的区分。通过高分辨数据中特征性碎片离子可将4个化合物初步分为Ⅰ(熊果酸和齐墩果酸)和Ⅱ(α-乳香酸和β-乳香酸)2组同分异构体。FCER-MS^(2)图谱表明,Ⅰ组化合物碎片离子m/z 411的OCE和m/z 439的RⅡ_(max)均有显著差异;Ⅱ组化合物碎片离子m/z 163和121的OCE,m/z 439、219和205的RⅡ_(max)均有显著差异。FCER-MS^(2)图谱还包含了m/z、CE_(50)、OCE和RⅡ_(max)等信息,全面呈现了[M+H]+的质谱裂解行为,可为区分细微结构差异的三萜酸同分异构体提供有效的分析工具。

高效液相色谱法测定左炔诺孕酮中间体乙基锂氨物中异构体含量

目的:建立能测定乙基锂氨物中3种异构体的HPLC法。方法:设置高效液相检测条件以十八烷基键合硅胶为填充剂,以水和乙腈为流动相,流速为1.0 mL/min进行洗脱,柱温为30℃,检测波长为210 nm。结论:主成分和异构体能很好地分离,ISO-1与主成分分离度为3.1,ISO-2与主成分分离度为1.4,ISO-3与主成分分离度为1.5,且空白溶剂没有微小倒峰干扰,溶剂峰不会干扰主成分的测定,线性相关系数r均大于0.999,检出限与定量限均符合要求;各杂质的平均回收率均在94%~103%,RSD(n=9)均未超过4.0%;重复性良好及中间精密度高,微调色谱条件后耐用性良好。因此,能够快速、有效、准确和可靠地分离检测出左炔诺孕酮中间体乙基锂氨物3种异构体含量,有利于提高左炔诺孕酮的产品质量,提高患者用药安全性。

CTAB改性Cu-BTC材料的合成及其吸附分离二甲苯异构体的性能

通过水热法合成Cu-BTC晶体的过程中添加十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),通过调节CTAB的添加量对吸附材料的形貌和孔结构进行改性,改性后的Cu-BTC材料与原Cu-BTC相比,其对对二甲苯(PX)的静态吸附量明显提高,且高于间二甲苯(MX)和邻二甲苯(OX),从而提高了异构体的吸附选择性。研究了二甲苯异构体在Cu-BTC-CTAB材料上的静态吸附性能和吸附动力学性能。在298K、318K和338K温度下进行了一系列二甲苯有机蒸气吸附平衡实验,得到了静态吸附速率曲线和吸附等温线。改性材料中CTAB添加量为0.08%的Cu-BTC-CTAB样品对PX的吸附量和选择性最优。动力学研究表明,二甲苯异构体在Cu-BTC-CTAB上的吸附过程可以用一级动力学模型来描述。

水溶剂环境下Eda酮式异构体消除超氧负离子自由基O^(-)_(2)·的反应机理

该文在M06-2X/SMD/6-311+G(d,p)水平上,研究了在水溶剂环境1 atm压力和310.15 K温度下Eda酮式异构体与超氧负离子自由基O^(-)_(2)·的反应机理.研究发现:Eda酮式异构体与O^(-)_(2)·的反应有抽H、加成以及单电子转移3种方式.反应势能面研究表明:抽H反应的自由能垒为38.0~176.1 kJ·mol^(-1),优势通道是O^(-)_(2)·抽取杂环H,反应能垒为38.0~41.0 kJ·mol^(-1).加成反应的自由能垒为84.2~196.6 kJ·mol^(-1),优势通道是O^(-)_(2)·加成到杂环与甲基相连的C原子上,反应能垒为84.2 kJ·mol^(-1).单电子从Eda酮式异构体向O^(-)_(2)·转移的反应的能垒为409.2 kJ·mol^(-1),该反应不能实现.研究结果表明:在水溶剂环境下Eda酮式异构体可通过提供杂环H以及甲基邻位C与自由基加成2种途径消除O^(-)_(2)·.

二甲苯异构体吸附分离研究进展

二甲苯异构体的分离与纯化是石油化学工业的重要过程之一,但二甲苯异构体的结构和性质极其接近,常规精馏和深冷结晶法分离能耗高、生产效率低。模拟移动床色谱是主流的二甲苯异构体分离技术,但作为吸附剂的分子筛在吸附容量和分离选择性两方面均存在不足。金属有机框架和超分子材料具有组装自由、结构多样和性质可调等优点,可通过构建极性孔环境或精准设计孔道尺寸与形状实现二甲苯异构体的高效辨识与分离。本文综述了金属有机框架和超分子材料在二甲苯异构体吸附分离中的研究进展,从静电作用、尺寸筛分和形状筛分等方面探讨了二甲苯异构体分离的内在机制,总结了金属有机框架在二甲苯分离领域存在的问题和局限,并对未来发展方向进行了展望。

基于邻苯二甲酰亚胺受体热活化延迟荧光发射体的异构体效应

设计合成了3-CzAIAd和3-DPFCzAIAd两种新型热活化延迟荧光(TADF)发射体,并与其异构体4-CzAIAd和4-DPFCzAIAd进行了对比研究。咔唑单元的取代位置显著影响着发射体的光物理性质和发光器件性能。同4号位取代的化合物相比,在3号位取代的相应的发射体表现出较高的三线态能级、较小的Δ_(EST)和荧光量子效率以及相对红移的发光光谱。基于3-DPFCzAIAd的器件展现出20.8%的最大外量子效率、57.1 cd·A^(-1)的最大电流效率和长达260 h的半寿命@500 cd·m^(-2),而4-DPFCzAIAd对应的发光器件虽然表现出28.2%的最大外量子效率,但半寿命@500 cd·m^(-2)缩短为178 h,效率滚降更大,达到77%。

水液相下Eda酮式异构体与超氧化氢自由基反应的DFT理论计算

在M06-2X/SMD/6-311+G(d,p)理论水平下,研究水液相1个大气压、 310.15 K温度下依达拉奉(Eda)酮式异构体与超氧化氢自由基(·HO_(2))的反应机理.结果表明:Eda酮式异构体与·HO_(2)的反应有抽H、加成和单电子转移3个过程;抽H反应主要通过·HO_(2)抽取杂环H和甲基H实现,反应的自由能垒为77.1~78.7 kJ/mol;加成反应可通过·HO_(2)加成不饱和C的过程实现,加成自由能垒为48.2~95.0 kJ/mol;加成到杂环上与甲基相连的C原子的放热反应最具优势,自由能垒为48.2 kJ/mol;单电子转移的自由能垒为141.1 kJ/mol,该过程不能实现.可见,水液相下Eda酮式异构体可通过抽H和加成反应消除·HO_(2).

CD44异构体在HER23+阳性乳腺癌中的表达及其与预后的关系

背景跨膜蛋白CD44与癌细胞侵袭和转移行为有密切关系,其异构体CD44v6和CD44v8-10在HER23+阳性乳腺癌中的作用尚不明确。目的分析CD44异构体CD44v6和CD44v8-10在HER23+阳性乳腺癌中的表达及其与预后的关系。方法收集2019年1月—2022年6月就诊于东莞市妇幼保健院乳腺科经术前粗针穿刺活检确诊HER23+,并接受新辅助治疗后行手术切除的乳腺癌患者。应用免疫组织化学(IHC)对乳腺癌标本进行CD44v6和CD44v8-10染色,分析两者与HER2、雌激素受体、孕激素受体等临床病理特征和病理完全缓解(pathologic complete response,pCR)之间的关系。结果86例HER23+阳性乳腺癌患者年龄(46.99±10.01)岁,均为女性。全部患者均表现出CD44异构体异质性表达,其中55例(64.0%)CD44v6高表达,58例(67.4%)CD44v8-10高表达。CD44v6高表达组的ER阳性率(76.4%vs 48.4%,P=0.017)、PR阳性率(78.2%vs 19.4%,P<0.001)和Ki67阳性指数(81.8%vs 61.3%,P=0.043)均高于CD44v6低表达组,差异有统计学意义。CD44v8-10高表达组的PR阳性率(70.7%vs 28.6%,P<0.001)和淋巴结转移发生率(72.4%vs 14.3%,P<0.001)均高于CD44v8-10低表达组,差异有统计学意义。此外,CD44v6低表达组和CD44v8-10低表达组的pCR率均显著高于CD44v6高表达组(54.8%vs 30.9%,P=0.039)和CD44v8-10高表达组(71.4%vs 24.1%,P<0.001),差异有统计学意义。多因素Logistic回归分析显示HER2弥漫3+和CD44v8-10高表达的患者pCR率更低(OR=5.281,95%CI:1.346~20.718,P=0.017;OR=5.062,95%CI:1.232~20.799,P=0.024)。结论CD44异构体与HER23+阳性乳腺癌的恶性特征相关,CD44v8-10可作为HER2弥漫3+预后不良的标志物。