异柠檬酸脱氢酶-1突变对胶质瘤血管生成的影响

目的研究异柠檬酸脱氢酶-1(IDH-1)突变与胶质瘤血管生成的关系。方法收集宁夏医科大学总医院病理科确诊为胶质瘤的病理组织标本,根据免疫组化法(IHC)检测是否表达IDH-1突变,将组织标本分为突变型和野生型;用IHC法检测胶质瘤组织Ki-67、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、CD34的表达情况;CD34、PAS双重染色判断血管生成拟态(VM)现象。培养人胶质瘤U87细胞系,用强力霉素(doxycycline)诱导表达突变IDH-1,实验分为doxycycline诱导表达(dox+)组和非doxycycline诱导表达(dox-)组;Western blot检测细胞内IDH-1、VEGF、VEGFR-2的表达水平;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。结果IHC结果显示,Ki-67增殖指数与性别及病理分级存在关联,与IDH-1突变无相关性;GFAP在突变型及高级别胶质瘤中高表达;VEGF、VEGFR-2、CD34在突变型中表达水平均高于野生型(P均<0.05);VM在突变型和野生型胶质瘤中均有表达。Western blot检测结果显示VEGF、VEGFR-2在U87细胞内dox+组中表达水平均高于dox-组。细胞划痕实验结果显示,dox-组在24 h和48 h细胞划痕愈合率均低于dox+组。结论IDH-1突变与胶质瘤血管生成存在关联。

实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1实验室检测能力验证结果评价

目的通过实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过样品制备,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有10个实验室参加本次能力验证项目,其中满意结果的实验室8个,占总参加机构的80%,不满意的实验室有2个,占20%。结论实验动物质量检测机构在实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1的检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

异柠檬酸脱氢酶-1基因突变与脑胶质瘤关系的研究进展

胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发肿瘤,具有较高的异质性,其发病率约占中枢神经系统肿瘤的27%左右[1]。在脑胶质瘤中,恶性脑胶质瘤在临床上更为常见,有研究数据表明,约占恶性肿瘤的80%[2]。目前,临床上主要通过WHO分级对脑胶质瘤患者的病情严重程度及预后情况进行评估,分级越高表明患者病情越严重,预后越差,故早期诊断并及时对病情变化进行准确判断是改善患者预后的重要手段,故明确脑胶质瘤的发病机理为首要关注内容[3]。

不同因素对苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1标准样品的影响分析

目的分析温度-时间、浓度、冻融、运输条件和不同品系来源对苹果酸酶-1(malic enzyme-1,ME-1)和异柠檬酸脱氢酶-1(isocitrate dehydorgenase-1,IDH-1)标准样品的影响。方法制备C57BL/6、BALB/c和CBA三种近交系小鼠来源的标准样品,经均匀性测定后,随机抽样按照GB/T 14927.1—2008中的检测方法进行测试。温度-时间因素以4℃、室温(RT)和37℃这3个温度为观测纵坐标,1、2、3、7、14和21 d为观测纵坐标。在每个坐标交点,每品系分别随机抽取两管。浓度因素按照每品系一管进行原倍、1/2、1/4和1/8倍进行梯度测试。冻融因素,每品系3管,-20℃冻存2 h至室温融化3次为条件测试。所有实验均为相同的运输条件、干冰冷链及北京往返沈阳、西安、成都三地测试。结果不同品系来源标准样品在温度-时间、浓度、冻融和运输条件下无显著差异。各标准样品21 d内在4℃及室温(RT)条件下,均能稳定存在,但37℃仅能稳定存在2 d。原倍稀释至1/8浓度、3次冻融和干冰运输三地往返后,样品检测结果显示稳定。结论制备的ME-1和IDH-1标准样品具备均一性、稳定性和可比性,满足能力验证计划需求。

异柠檬酸脱氢酶-2在白血病细胞诱导细胞分化中的靶向抑制

许多人体所患的癌症,尤其是神经胶质瘤和急性髓细胞性靶细胞(AML)都会出现异柠檬酸脱氢酶-1和异柠檬酸脱氢酶-2(IDH1和IDH2)基因突变,这是两种能编码代谢酶。近期的研究发现通过设计能抑制这两种代谢酶基因变异的小分子(AGI-6780),可分别减缓白血病和脑肿瘤细胞的生长。以IDH1和IDH2的变异作为标靶并诱使癌性细胞分化可能是一种有希望的治疗途径。

脑胶质瘤异柠檬酸脱氢酶1基因突变与基质金属蛋白酶2表达的研究

目的探讨异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）基因突变和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在脑胶质瘤中的表达特性和相关性。方法用反转录．聚合酶链反应（RT—PCR）法测序IDH1基因在胶质瘤中的序列变化；链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法分析50例原发性脑胶质瘤和10例对照组中MMP-2蛋白的表达。结果（1）经基因直接测序IDH1基因在M及M1组共50例脑胶质细胞瘤组织中突变率较10例正常脑组织明显上升（总体上升率为56．35％，P〈0．05），序列变化位点多为R132，IDH1基因片段变异性与其恶性分级无明显相关（P〉0．05）；（2）M及M1组共50例脑胶质细胞瘤组织中MMP-2表达比10例正常脑组织显著增强（总体增强率为57．95％，P〈0．05），MMP-2表达率与胶质瘤恶性分级呈正相关（r=0．712，P〈0．01）；（3）所有10例脑室造瘘患者即对照组标本中均未见明显IDH1基因突变及MMP-2过表达。结论（1）IDH1基因突变与胶质瘤进展关系密切，对于评判预后有积极意义；（2）MMP-2蛋白的表达与胶质瘤的恶性分级关系密切，呈正相关；（3）IDH1基因、MMP-2蛋白联合检测有助于分析胶质瘤恶性程度及预后。

影像组学联合表观弥散系数评估低级别脑胶质瘤IDH-1基因突变状态

目的探讨影像组学联合表观弥散系数(ADC)评估低级别脑胶质瘤异柠檬酸脱氢酶-1(IDH-1)基因突变状态。方法回顾性纳入荆门市第一人民医院2015-05—2020-12入院且术后经病理证实为低级别脑胶质瘤患者。基于患者术前磁共振弥散加权成像转为表观弥散系数图,分别计算患者病灶的表观弥散系数以及影像组学参数。将IDH-1野生型患者与突变型患者按照7∶3比例分为训练组和测试组,基于训练组患者按照IDH-1是否突变为研究目的,对影像组学参数进行特征降维,构建影像组学标签(Rad_score),最后联合病灶ADC值构建影像联合模型评估IDH-1是否突变,并采用Hosmer-Lemeshow以及临床决策线分析联合模型的临床价值。结果基于训练组中所有患者的影像组学特征以IDH-1是否突变为分类标签采用LASSO进行影像组学特征降维,取最小惩罚系数Logλ=0.0052对应的特征集合,共15个影像组学特征构建影像组学标签Rad_score。训练组中以及测试组中IDH-1野生型患者Rad_score低于IDH-1突变型患者,且差异有统计学意义(P=0.0000025 vs 0.0018)。联合训练组患者病灶ADC和Rad_score以IDH-1是否突变为研究目的构建多元逻辑回归模型Imagemodel,训练组中Imagemodel的AUC值>ADC>Rad_score(0.98 vs 0.95 vs 0.83),测试组中Imagemodel的AUC值>ADC>Rad_score(0.99 vs 0.97 vs 0.83)。结论ADC联合影像组学构建影像联合模型可协助临床术前评估低级别脑胶质瘤患者IDH-1的突变状态。

基于不同扩散模型的扩散加权成像在脑胶质瘤分级和预测IDH-1突变的对比分析

【目的】对比分析基于不同扩散模型的扩散加权成像(扩散张量成像:DTI,扩散峰度成像:DKI,和神经突起方向离散度与密度成像:NODDI)在脑胶质瘤术前预测脑胶质瘤级别和异柠檬酸脱氢酶-1(IDH-1)突变的诊断效能。【方法】回顾性分析中山大学附属第一医院2014年5月至2019年12月经手术病理证实的胶质瘤患者66例(WHOⅡ级28例,Ⅲ级10例,Ⅳ级28例),其中IDH-1基因表型明确的患者64例(IDH-1突变型34例,野生型30例)。采用德国西门子Magnetom Verio 3.0T MRI机器进行数据采集,扫描序列包括常规MRI平扫,增强和扩散加权成像。后处理获取DTI(平均扩散系数:MD,部分各向异性分数:FA),DKI(平均峰度:MK,轴向峰度:Ka,径向峰度:Kr)和NODDI(神经突内体积分数:icvf,神经突方向离散度:odi)的各参数图。用Image J勾画肿瘤实质相邻最大的三个层面作为ROI,取得各个参数的均值。采用独立样本t检验或Mann-Whitney秩和检验分别比较高、低级别组和不同IDH-1状态各扩散参数值的差异。进一步,对有统计学意义差异的参数进行Logistic回归分析,评价其鉴别脑胶质瘤高低级别和IDH-1基因突变状态的诊断效能,并获得受试者工作特征(ROC)曲线。【结果】基于不同的扩散加权模型,其扩散参数均可以用于区分脑胶质瘤级别(P<0.01),其中ROC分析发现MK在鉴别高低级别脑胶质瘤具有最大的诊断效能,ROC曲线下面积为0.84。进一步Logistic回归分析发现仅年龄和MK参数可以用来鉴别高低级别脑胶质瘤,诊断价值[AUC=0.88,AUC 95%CI(0.79,0.96)]优于单一的MK参数。对IDH-1基因突变状态预测,NODDI两个参数均无鉴别意义,DKI和DTI的各参数可有效鉴别(P<0.05)。其中,DKI的Ka参数具有最高的诊断价值,ROC曲线下面积为0.73,灵敏度也最高(0.83)。进一步Logistic回归发现,仅Kr可以预测IDH-1突变,回归模型ROC曲线下面积[AUC=0.72,AUC 95%CI(0.59,0.85)]。【结论】基于不同扩散模型的扩散加权成像均可以用于预测脑胶质瘤级别,DKI诊断价值最优;对于IDH-1突变状态的预测,DKI优于DTI,而NODDI价值有限。推荐DKI用于临床脑胶质瘤术前评估。

MRI征象鉴别IDH-1突变型与野生型较低级别胶质瘤

目的:对比分析较低级别胶质瘤WHOⅡⅢ级异柠檬酸脱氢酶-1(IDH-1)突变型与野生型MRI征象。方法:回顾性分析手术及病理证实的69例较低级别胶质瘤患者的临床、MRI征象及分子病理资料,所有病例均行T1WI、T2WI、FLAIR及T1WI增强序列扫描。对肿瘤的发病性别、年龄、位置、病变数目、肿瘤直径、囊变坏死、肿瘤边界、出血、瘤周水肿、是否跨越中线、强化程度等征象及指标进行统计学分析。结果:较低级别胶质瘤IDH-1突变型与野生型在肿瘤位置方面差异具有统计学意义(P<0.05),IDH-1突变型比野生型更好发于额叶;IDH-1突变型强化程度为轻度强化、中度强化、重度强化分别占比83%、14%、3%,野生型分别占比41%、44%、15%,差异具有统计学意义(P<0.05);IDH-1突变型坏死最大径大于野生型,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组间患者发病年龄及性别、病变个数、肿瘤边界、是否跨越中线、有无出血、水肿最大径、囊变最大径、坏死最大径等差异无统计学意义(P>0.05)。结论:较低级别胶质瘤的位置、强化程度、坏死最大直径对于术前评估IDH-1的突变状态具有重要价值。

染色体1p/19q缺失与P53、IDH1突变蛋白在少突胶质细胞肿瘤中的表达及相关性

目的研究少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19q杂合性缺失与人异柠檬酸脱氢酶1-R132H(isocitrate dehydrogenas 1-R132H,IDH1-R132H)、P53突变蛋白表达的相关性。方法选取病理学诊断为少突胶质细胞肿瘤标本,用荧光原位杂交方法检测染色体1p/19q杂合性缺失情况,用免疫组织化学法检测IDH1-R132H、P53突变蛋白表达情况,分析染色体1p/19q缺失与IDH1、P53突变蛋白表达之间的相关性。结果 76例少突胶质细胞肿瘤1p/19q杂合性缺失率为73.7%,均为联合缺失。少突胶质细胞瘤1p/19q杂合性缺失率比间变型少突胶质细胞瘤高,但差异无统计学意义。56例1p/19q杂合性缺失的少突胶质细胞肿瘤均为IDH1-R132H突变蛋白表达阳性,其中54例均为P53突变蛋白表达阴性。IDH1、P53突变蛋白表达水平与染色体1p/19q杂合性缺失具有相关性(P<0.05)。结论少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19q杂合性缺失与人IDH1-R132H突变蛋白表达、P53突变蛋白阴性表达呈正相关。

基于MRI增强T_(1)WI影像组学预测模型鉴别高级别胶质瘤IDH 1突变型与野生型的价值

目的:探讨基于术前增强T_(1)WI构建的影像组学模型预测高级别胶质瘤患者异柠檬酸脱氢酶-1(IDH 1)突变型与野生型的价值。方法:回顾性分析2012年6月至2020年12月在温州医科大学附属第五医院行颅脑增强T_(1)WI图像的高级别胶质瘤患者89例,IDH 1突变型32例(WHO Ⅲ级15例,WHO Ⅳ级17例),IDH 1野生型57例(WHO Ⅲ级12例,WHO Ⅳ级45例),按7:3随机分为训练组和验证组。使用A.K软件对原始增强T_(1)WI图像进行影像特征提取,Kruskal-Wallis非参数检验、Spearman相关性分析、LASSO回归及10倍交叉验证进行特征降维,筛选出最具特征的参数。采用受试者操作特征(ROC)曲线评价模型对高级别胶质瘤IDH 1突变型和IDH 1野生型识别的预测效能。决策曲线分析(DCA)评价模型的获益情况。结果:每位患者增强T_(1)WI图像共提取396个不同的纹理参数,通过LASSO降维及10倍交叉验证筛选,最终得到5个最具特征性纹理参数,并计算得到相应放射值,构建训练组和验证组的预测模型,训练组模型的ROC曲线下面积为0.902(95%CI:0.826~0.978),灵敏度和特异度分别为84.6%和81.8%,验证组模型的ROC曲线下面积为0.844(95%CI:0.676~1.000),敏感度为77.8%,特异度为80.1%。DCA显示影像组学模型在风险阈值0.1~1.0间较大范围内的净收益优于不作处理模型和全部处理模型。结论:基于MRI增强T_(1)WI构建的影像组学模型可有效识别高级别胶质瘤的IDH 1突变型和野生型。

MGMT启动子甲基化状态与IDH1及1p/19q对脑胶质瘤患者假性进展的诊断价值

脑胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤,起源于神经上皮细胞。术后联合放化疗已成为其标准治疗的组成部分,而MRI检查是随访颅内病变的常规手段。随访中出现的影像学变化,需进行真假进展的鉴别,由于二者的临床决策不同,因此真假进展的识别极为重要,但目前尚缺乏有效的鉴别手段。MGMT启动子、异柠檬酸脱氢酶-1(IDH1)及1p/19q分子标记物与假性进展相关,分子状态与影像学结合用于真假进展的鉴别,可能成为新的探索方向。本研究将对研究现状进行梳理,分析MGMT启动子、IDH1及1p/19q分子标记物在区分真假进展中的作用,为临床鉴别及精准医疗提供新参考。

脑胶质瘤表观扩散系数与肿瘤分级及IDH1突变的关系

目的探讨MR扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)的表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)在脑胶质瘤分级及分型中的意义,进一步探讨ADC与异柠檬酸脱氢酶-1(isocitrate dehydrogenase-1,IDH1)突变分型的相关性。方法收集首都医科大学宣武医院经病理证实的82例脑胶质瘤患者的影像资料,测量肿瘤实质区、对侧正常白质ADC值,并计算最小ADC值(minimum ADC,ADC min)、平均ADC值(mean ADC,ADC mean)、相对最小ADC值(relative minimum ADC,rADC min)、相对平均ADC值(relative mean ADC,rADC mean)值,探讨所有ADC值在各级别胶质瘤及亚型间的差异以及其与IDH1突变的关系。结果82例脑胶质瘤患者中2016世界卫生组织(World Health Organization,WHO)分级Ⅱ级27例、Ⅲ级22例、Ⅳ级33例,其中低级别27例、高级别55例;Ⅱ~Ⅲ级胶质瘤病理分型为星形细胞瘤(astrocytoma,AC)26例及少突胶质细胞瘤(oligodendroglioma,OD)23例。Ⅱ~Ⅲ级胶质瘤IDH1突变型(IDH1 mutant,IDH1 mut)28例、IDH1野生型(IDH1 wild-type,IDH1 wi ld)21例。肿瘤实质ADC min、ADC mean、rADC min、rADC mean在胶质瘤Ⅱ级与Ⅳ级、Ⅲ级与Ⅳ级之间差异均有统计学意义(P均<0.05),而在Ⅱ级与Ⅲ级之间差异无统计学意义(P>0.05);ADC min、ADC mean、rADC min、rADC mean在高低级别胶质瘤之间差异有统计学意义(P=0.023、0.029、0.024、0.035);ADC min、rADC min、rADC mean在AC及OD之间差异有统计学意义(P=0.044、0.025、0.040);ADC min、ADC mean、rADC min、rADC mean在IDH1 mut及IDH1 wi ld之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论术前ADC值有助于胶质瘤的分级及分型,但不能预估IDH1突变状态。

63例高级别胶质瘤中IDH1和TERT突变状态的预后价值

目的:探讨异柠檬酸脱氢酶-1(IDH1)和端粒酶逆转录酶(TERT)启动子突变对高级别胶质瘤患者的预后价值。方法:选取2014年9月至2017年6月于我院行手术切除且术后病理提示为高级别胶质瘤的患者63例(WHOⅢ级27例,Ⅳ级36例),完善临床资料、随访资料、分子检测结果。应用Sanger测序法检测样本中IDH1和TERT启动子突变情况,根据结果将患者分为不同亚组,通过比较其生存期的差异,分析基因突变与患者预后的关系。结果:63例高级别胶质瘤中,IDH1突变型和野生型患者的中位生存期分别为24和10个月,差异有统计学意义(P<0.01);TERT突变型和野生型的中位生存期无明显差异(P>0.05)。IDH1突变为高级别胶质瘤患者预后良好的因素,TERT突变不能单独提示预后,二者联合分析提示:IDH1突变/TERT突变组预后最好,IDH1野生/TERT突变组预后最差,IDH1突变/TERT野生组预后稍好于IDH1野生/TERT野生组,四组间预后有明显差异。结论:IDH1突变的高级别胶质瘤患者有较好的临床预后,在此基础上,TERT启动子突变检测有助于进一步划分其预后分层。

基于IDH1基因检测联合体外药敏试验的恶性脑胶质瘤个体化综合治疗的疗效评价

目的:研究恶性脑胶质瘤患者异柠檬酸脱氢酶-1(isocitrate dehydrogenase-1,IDH1)突变状态与体外药敏试验结果相关性,以及基于二者的恶性脑胶质瘤患者个体化综合治疗的疗效评价。方法:选择术后病理确诊为恶性脑胶质瘤的患者67例,用Sanger测序法检测IDH1基因突变状态,并取其新鲜标本采用胶滴肿瘤药敏检测技术(CD-DST法)进行体外药敏试验,分析二者之间关联性。根据是否按照体外药敏实验结果进行规范疗程的化疗,将患者分为个体化治疗组和非个体化治疗组,比较两组患者临床疗效。结果:67例患者中,IDH1基因突变者14例,未突变者53例,IDH1基因突变患者卡莫司汀(BCUN)、依托泊苷(VP-16)、替莫唑胺(TMZ)体外药敏试验敏感性高于IDH1野生型患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。IDH1基因突变患者中位生存期为30个月,IDH1野生型患者为14个月,差异具有统计学意义(P<0.05)。个体化治疗组患者中位生存时间为22个月,非个体化治疗组患者中位生存时间为14个月,差异具有统计学意义(P<0.05)。IDH1基因突变并行个体化治疗亚组中位生存时间为32个月,明显长于其他亚组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:IDH1基因检测联合体外药敏试验指导恶性脑胶质瘤患者的个体化综合治疗能获得较好的临床疗效。

IDH1突变应用于肝内胆管癌治疗的研究进展

胆管癌(CCA)是一种相对罕见的恶性肿瘤,全球死亡率正在上升。较少患者能够根治性手术切除,对于不能切除的患者,5年生存率很低,预后较差。近年来,在CCA中也发现了胆道肿瘤潜在的分子改变,可作为治疗靶点。异柠檬酸脱氢酶-1(IDH1)突变在表观遗传和代谢重塑中有重要作用。目前,10%~20%的肝内胆管癌(ICC)患者中发现了IDH1突变,因此,近年来IDH1抑制剂作为一种创新靶向药物,受到了大家的广泛关注。本文综述了在ICC患者中靶向IDH1突变的新型药物的分子基础和临床研究结果。

免疫组化染色检测脑胶质瘤IDH1的优化及染色特点

目的比较胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶-1（IDH1）不同检测方法的优缺点，优化免疫组化染色的检测条件。方法收集南方医科大学南方医院外科自2013年1月至12月手术切除且经病理确诊的胶质瘤标本138例，其中WHO分级Ⅰ级18例、Ⅱ级49例、Ⅲ级24例、Ⅳ级47例。采用手工免疫组化染色和全自动免疫组化染色检测胶质瘤IDH1蛋白的表达：应用聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线分析法（PCR-HRM）对结果进行验证。结果手工免疫组化染色显示IDH1表达阴性97例，阳性41例，阳性病例中有65．9％的病例阳性细胞百分比大于75％，70．7％的病例IDH1染色强度为强着色。手工免疫组化染色背景干净、清晰，容易判读，不存在判读困难和假阳性的病例；全自动免疫组化仪染色结果背景偏深，易出现判读困难和假阳性现象。手工免疫组化和全自动免疫组化仪的检测结果不同，全自动免疫组化仪的阳性检测率较高，差异有统计学意义（x2=22．042，P=0．000）。手工免疫组化染色和PCR-HRM法检测结果一致，阳性检测率的差异无统计学意义（x2=0．800，P=0．371）。结论在IDH1免疫组化检测中，手工免疫组化染色结果较全自动免疫组化仪染色结果准确。经PCR-HRM法验证，IDHI基因突变与阳性肿瘤细胞数有关，而与染色强度无关。定位准确、肯定的阳性肿瘤细胞数量〉5％即可判定该病例IDH1基因发生突变。