低亚氨基在胶原异源三聚体中倾向性的测定

为解析不同类型氨基酸残基对天然胶原热稳定性的影响,以更贴近天然胶原序列中低亚氨基的异源三聚体abc为研究主体,设计不同的突变胶原序列,以圆二色谱法测定不同氨基酸对胶原热稳定性的影响,即倾向性。同时统计了天然胶原序列中各氨基酸的出现频率,并基于氨基酸倾向性计算预测了天然Ⅰ型胶原蛋白的局部热稳定性值。结果显示:X位的Ala、Leu和Glu、以及Y位的Gln、Thr、Ala和Arg既具有较高的倾向性,又具有较高的出现频率;天然Ⅰ型胶原蛋白序列可分为2种类型的区域:一种是可促进二级结构形成的高稳定性区域:另一种是对某些生命过程起到关键作用的低稳定性区域;同时具备高热稳定性和高出现频率的氨基酸,对天然胶原蛋白的稳定性起到关键作用。

异源三聚体胶原多肽:设计、表征和应用

胶原蛋白是人体内含量最丰富的蛋白质,其中异源三聚体胶原蛋白含量超过90%.异源三聚体胶原蛋白任意一条肽链的甘氨酸发生突变都会引发遗传疾病.胶原蛋白分子量大且结构复杂,在分子层面研究胶原蛋白存在挑战.胶原多肽的分子量小且结构易于控制,被广泛应用于仿生胶原蛋白.此外异源三聚体胶原多肽可以精确模拟Ⅰ型和Ⅳ型等异源三聚体胶原蛋白的组成、结构和功能.本综述介绍了异源三聚体胶原多肽的设计方法、表征手段以及应用.首先总结了共价键连接和非共价相互作用这两种构建异源三聚体胶原多肽的策略;其次概述了异源三聚体胶原多肽的肽链组成、三螺旋结构以及热稳定性的表征方法;接着介绍了异源三聚体胶原多肽在模拟胶原蛋白肽链排列、仿生胶原蛋白纤维结构以及研究成骨不全症机制等方面的应用;最后展望了功能化的异源三聚体胶原多肽的开发及其在生物医学领域内的应用前景.

甲状腺肿瘤G蛋白α亚基mRNA表达的初步研究

为研究G蛋白α亚基 (Ga)mRNA在甲状腺肿瘤组织中的表达 ,收集手术切除 5例甲状腺乳头状癌(TPC)及 6例无功能甲状腺腺瘤 (NFTA)组织 ,利用RT PCR技术观察Gs和Giα亚基的表达。结果发现 ,GsamRNA在TPC的表达较正常甲状腺 (NT)和NFTA明显增高 (P <0 0 5 ) ,NFTAGsamRNA表达水平的增高与NT无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;Gia 3mRNA在NFTA的表达明显高于NT(P <0 0 5 ) ,两种甲状腺肿瘤组织中 3种Gia的表达水平无显著性差异 (P >0 0 5 )。研究表明Gsa和Gia

5-羟色胺1A受体、G蛋白β3亚基基因多态性与卒中后抑郁的相关性

目的观察5-羟色胺1A受体（5-HTR1A）C（-1019）G基因与G蛋白β3亚基（GNβ3）基因C825T多态性在中国广州地区卒中后抑郁患者的分布情况及特点，探讨卒中后抑郁的遗传机制。方法选取159例首发脑卒中患者并根据汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评分分为卒中后抑郁组（53例）和卒中对照组（106例），采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术分析2组患者的5-HTR1AC（-1019）G和GN133C825T基因多态性。结果5-HTR1AC（-1019）G和GN[33C825T基因多态性在2组人群中的分布差异均有统计学意义，卒中后抑郁组5-HTR1A（-1019）GG基因型（8／53，15．1％）及G等位基因频率（44／106，41．5％）和GN[33825T等位基因频率（68／106，64．2％）均高于对照组（5／106，4．7％；35／212，16．5％；113／212，53．3％；x^2=23．204、23．655、3．392，均P〈0．05）。同时携带5-HTR1A（-1019）G和GN33825T等位基因者罹患卒中后抑郁的相对危险度（OR=4．980，95％CI2．429～10．210，P=0．00（3）比单独具有5-HTRIA（-1019）G等位基因者（OR=3．589，95％C12．113—6．096，P=0．000）或GN33825T等位基因者高（OR=0．638，95％C10．395～1．031，P=0．042）。结论5-HTR1AC（-1019）G和GN33C825T基因均可能是卒中后抑郁的易患基因，而且两者在卒中后抑郁的发病中存在微效协同作用。

GNB3C825T基因多态性与儿童血管迷走性晕厥相关性的初步探讨

目的 初步探讨GNB3C825T基因多态性与小儿血管迷走性晕厥（vasovagal syncope,VVS）的相关性.方法 晕厥组为不明原因晕厥患儿54例,其中男18例,女36例,平均11.8岁 对照组为同期健康体检儿童54名,其中男20名,女34名,平均11.2岁 入选病例均行直立倾斜试验（head-up tilt test,HUTT）,根据HUTT试验结果 ,分HUTT阳性组即VVS组和HUTT阴性组,各组病例均抽取外周血,应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）和基因测序的方法 检测GNB3C825T基因多态性.结果 晕厥组54例患儿,HUTT阳性者30例,其中血管抑制型15例（50.0%）、混合型9例（30.0%）和心脏抑制型6例（20.0%）,对照组皆为阴性 GNB3C825T等位基因T在对照组的频率低于晕厥组（18.5%vs 34.3%）,两组比较差异有统计学意义（x2=6.888,P＜0.05） GNB3C825T等位基因T在VVS组的频率高于HUTT阴性组（38.3%vs 18.7%）,两组比较差异有统计学意义（x2=4.905,P＜0.05） VVS组各临床分型间的等位基因频率的比较差异无统计学意义（x2=0.658,P＞0.05）.结论 GNB3C825T等位基因频率与VVS有相关性,可考虑作为小儿VVS的候选易感基因,提供临床早期筛查.

丹酚酸B对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏的保护作用

目的探讨丹酚酸B通过调控丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成的异源三聚体依赖的蛋白激酶α1(AMPKα1)激活沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)减轻酒精性肝损伤(ALD)的作用机制。方法用酒精液体饲料喂养建立ALD大鼠模型;另选大鼠普通饲料喂养作为空白组和对照组,将造模成功大鼠随机分为3组:模型组、低、高剂量实验组;每组均为8只。对照组、低、高剂量实验组灌胃给予丹酚酸B溶液30,15,30 mg·kg-1;空白组和模型组灌胃给予等量的0.9%NaCl,连续给药8周。用试剂盒检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠肝脏组织SIRT1、AMPKα1及p-AMPKα1的蛋白表达情况。结果空白组、对照组、模型组、低、高剂量实验组的血清ALT水平分别为(24.37±2.08),(23.09±1.02),(59.97±3.68),(43.39±2.91)和(39.08±2.17)U·L-1;SIRT1蛋白表达相对水平分别为0.60±0.02,0.75±0.03,0.13±0.02,0.20±0.01,0.27±0.01;p-AMPKα1蛋白表达相对水平分别为1.01±0.01,1.52±0.10,0.45±0.02,0.62±0.04,0.71±0.05。模型组与空白组比较,低、高剂量组与模型组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论丹酚酸B通过调控AMPKα1磷酸化水平激活SIRT1蛋白表达,进而发挥其抗慢性酒精性肝病的保护作用。

丹酚酸B对乙醇诱导的HepG2细胞损伤的保护作用

目的通过HepG2细胞体外实验探讨丹酚酸B通过调控AMPKα1/SIRT1通路减轻乙醇损伤的分子机制。方法实验1:HepG2细胞分为空白组、模型组、模型给药组、模型转染组、模型转染给药组。模型转染组和模型转染给药组转染AMPKα1 siRNA,模型给药组和转染后的模型转染给药组加入8μmol·L^-1丹酚酸B,其他组加入等体积0.9%NaCl,3 h后,除空白组,其余4组加入100 mmol·L^-1乙醇诱导48 h造模。实验2:HepG2细胞分为空白组、空白给药组、模型组、模型给药组。给药组加入8μmol·L^-1丹酚酸B,空白组和模型组加入等体积0.9%NaCl,3 h后模型组和模型给药组加入100 mmol·L^-1乙醇后孵育48h造模。实验3:HepG2细胞分为空白组、空白给药组、转染组和转染给药组。转染组和转染给药组转染AMPKα1 siRNA,空白给药组和转染给药组加入8μmol·L^-1丹酚酸B,空白组和转染组加等体积0.9%NaCl。以MTT实验测定细胞存活率,以蛋白质印迹法检测AMPKα1、p-AMPKα1、SIRT1蛋白表达水平。结果实验1:空白组、模型组、模型给药组、模型转染组、模型转染给药组的细胞存活率分别为(100.00±1.58)%,(62.21±2.25)%,(81.65±4.16)%,(58.34±3.11)%,(61.64±3.24)%。模型组和空白组相比,模型给药组和模型组相比,模型转染组和模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。实验2:空白组、空白给药组、模型组、模型给药组细胞中p-AMPKα1/AMPKα1的蛋白表达相对量分别为1.00±0.02,1.35±0.13,0.26±0.08,0.71±0.01,空白给药组与空白组相比,模型组与空白组相比,模型给药组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。实验3:空白组、空白给药组、转染组、转染给药组细胞中p-AMPKα1/AMPKα1的蛋白表达相对量分别为1.00±0.01,2.31±0.15,0.56±0.05,0.60±0.04,SIRT1的蛋白表达相对量分别为1.00±0.02,2.14±0.20,0.43±0.06,0.46±0.04。空白给药组和空白组相比,转染组和空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论丹酚酸B通过调控AMPKα1/SIRT1通路发挥抗慢性酒精性肝病的保护作用。

微小RNA-31在乳腺癌细胞中低表达对乳腺癌细胞侵袭的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-31在乳腺癌细胞中的表达以及对乳腺癌细胞的作用。 方法分子克隆构建重组pMSC-异源三聚体G蛋白13（GNA13） wt质粒，分别转染不同类型的乳腺癌细胞，研究miR-31对GNA13在蛋白水平和mRNA表达水平的影响以及GNA13蛋白相对表达量与细胞侵袭能力的相关性。结果在MCF-10A细胞中，pMSC-GNA13wt载体转染组GNA13 mRNA相对表达量（7.26±1.80）显著高于空载体转染组（1.05±0.02，P＝0.001）。pMSC-GNA13wt载体转染组细胞侵袭的相对数目[（13.35±0.47）个]显著高于空载体转染组[（1.38±0.12）个]细胞数目（P＝0.000），GNA13 mRNA表达水平与miR-31表达水平呈负相关性。结论通过减少GNA13表达可抑制miR-31对乳腺癌细胞侵袭。