Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路调控缺血性卒中的研究进展

Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)是一种小的鸟苷三磷酸酶蛋白,在缺血性卒中发生发展过程中可激活Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)。RhoA/ROCK信号通路是缺血性卒中病理过程中的重要调节因子,调控该信号通路已成为促进缺血性卒中后神经细胞恢复和改善脑缺血-再灌注损伤的研究热点,然而目前RhoA/ROCK抑制剂仅有法舒地尔上市,其余仍处于研发或临床试验阶段。作者对RhoA/ROCK信号通路对缺血性卒中发挥的调控作用及机制进行总结,并对抑制剂及调控药物的应用进行阐述,旨在为缺血性卒中防治提供新的思路。

甲状腺肿瘤G蛋白α亚基mRNA表达的初步研究

为研究G蛋白α亚基 (Ga)mRNA在甲状腺肿瘤组织中的表达 ,收集手术切除 5例甲状腺乳头状癌(TPC)及 6例无功能甲状腺腺瘤 (NFTA)组织 ,利用RT PCR技术观察Gs和Giα亚基的表达。结果发现 ,GsamRNA在TPC的表达较正常甲状腺 (NT)和NFTA明显增高 (P <0 0 5 ) ,NFTAGsamRNA表达水平的增高与NT无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;Gia 3mRNA在NFTA的表达明显高于NT(P <0 0 5 ) ,两种甲状腺肿瘤组织中 3种Gia的表达水平无显著性差异 (P >0 0 5 )。研究表明Gsa和Gia

藁本内酯调节RhoA/ROCK信号通路对食管癌细胞生物学行为的影响

目的探讨藁本内酯(LIG)对食管癌细胞增殖、凋亡、血管生成拟态及Ras同源基因家族蛋白A(Rho A)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法用浓度为0、12.5、25、50、100、200μmol/L LIG处理食管癌细胞EC-109,检测细胞活性,筛选适宜浓度进行后续实验。将EC-109细胞分为对照组(Control组),LIG低、中、高浓度组(LIG-L、LIG-M、LIG-H组),LIG高浓度+RhoA激活剂Naciclasine组(LIG-H+Naciclasine组)。Edu检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;观察血管生成拟态;Western blot检测细胞增殖、凋亡相关蛋白及RhoA、ROCK蛋白表达,裸鼠移植瘤实验验证LIG对食管癌肿瘤生长的影响,免疫组化检测移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)、RhoA、ROCK表达水平。结果与Control组相比,LIG-L、LIG-M、LIG-H组EC-109细胞血管拟态管状结构依次减少,Edu阳性率、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞增殖核抗原(Ki67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、RhoA、ROCK表达依次降低,P21、细胞凋亡率、Bcl-2相关蛋白(Bax)、胱天蛋白酶(Caspase)-3表达依次升高(P<0.05)。RhoA激活剂Naciclasine可部分逆转LIG对食管癌细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的改善作用。裸鼠移植瘤实验显示,与Control组相比,LIG组裸鼠移植瘤生长减缓,肿瘤体积减小,RhoA、ROCK、VEGF表达水平降低(P<0.05)。结论LIG通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制食管癌细胞的增殖及血管生成拟态,促进食管癌细胞凋亡。

G蛋白在快速老化痴呆小鼠SAMP8脑组织中的表达

目的:观察在不同月龄小鼠SAMP8皮质和海马中G蛋白的表达情况。方法:利用Western-blot方法检测Gαq/11、Gαi和GαS蛋白在8月龄和18月龄快速老化痴呆小鼠SAMP8的表达,并以正常老化小鼠SAMR1作为对照研究。结果:与同月龄SAMR1相比,Gαq/11、Gαi和Gαs蛋白在8月龄小鼠SAMP8皮质和海马组织中的表达无明显异常(P>0.05),而到18月龄时,SAMP8皮质部位Gαq/11表达量低于SAMR1(P<0.05),海马部位Gαq/11和Gαi的表达量低于SAMR1(P<0.05)。结论:18月龄SAMP8脑组织中Gαq/11和Gαi的异常表达参与了阿尔茨海默病(AD)的病理进展,并有望作为AD治疗的一个靶点。

G蛋白β_3亚单位基因C825T多态性影响缬沙坦的降压疗效

目的探讨G蛋白β3亚单位基因C825T多态性与缬沙坦的降压疗效的关系。方法采用聚合酶链反应限制片段长度多态性方法检测147例健康人(对照组)和321例高血压病患者(高血压组)的G蛋白β3亚单位C825T多态性,其中102例高血压病患者口服缬沙坦4周。结果高血压组G蛋白β3亚单位C825T多态性中基因型频率(CC28.7%、CT 52.0%、TT 19.3%)、等位基因频率(C 54.7%、T 45.3%)与对照组基因型频率(CC 27.2%、CT 46.9%、TT25.9%)、等位基因频率(C 50.7%、T 49.3%)比较无显著性差异;缬沙坦对CT[(18.29±11.17)mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa]、TT[(25.63±22.68)mm Hg]、CT+TT[(19.25±13.20)mm Hg]基因型患者降低收缩压的作用强于CC基因型[(11.33±9.15)mm Hg,P<0.05];对CT[(15.03±9.35)mm Hg]、CT+TT[(14.50±9.23)mm Hg]基因型患者降低舒张压的作用强于CC基因型[(8.81±5.60)mm Hg,P<0.05]。结论G蛋白β3亚单位基因C825T多态性与缬沙坦的降压疗效相关,而与原发性高血压无关。

小分子G蛋白Rap1介导的细胞信号转导通路

Rap1属于小分子G蛋白Ras超家族成员之一,具有逆转原癌基因Ras激活突变体(K-ras)引起的细胞形态改变的功能和传递致癌信号两种相反的作用。Rap1和其他G蛋白一样,表现为无活性的GDP结合形式和有活性的GTP结合形式两种构象。通过两种构象之间的转换,起到分子开关的作用,调节细胞对外界刺激作出相应的反应。现对Rap1活性的调节及近年来有关Rap1介导的细胞信号转导通路及其对细胞行为影响的研究进行综述。

乙醇性脂肪肝模型大鼠肝脏G蛋白表达水平的变化

目的探讨乙醇联合高脂饮食诱导大鼠肝脏早期脂肪变性的可能机制。方法高脂饮食配合乙醇灌胃,连续6周,制备大鼠脂肪肝模型。6周末取血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);制备石蜡及冰冻切片,进行肝脏病理学检查。Westernblot分析各组大鼠肝脏组织中抑制型G蛋白α1(Gαi1)、抑制型G蛋白α2(Gαi2)、抑制型G蛋白α3(Gαi3)、刺激型G蛋白(Gαs)表达水平的改变。结果乙醇联合高脂饮食条件下大鼠血清ALT、AST、TG、TC明显升高且伴有HDL-C的显著下降;OilRedO(油红O)染色结果显示乙醇联合高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变明显;模型组大鼠肝组织中的Gαi1、Gαi2、Gαs表达明显下降,Gαi3的表达水平在模型组中呈增高趋势。结论乙醇联合高脂饮食能够进一步诱导大鼠肝脏的脂肪变性,病变程度与乙醇剂量呈正相关,其发病机制可能和G蛋白介导的信号传导通路的改变密切相关。

ARHI基因mRNA和蛋白表达水平与胶质瘤恶性度相关性探讨

目的探讨ARHI基因表达水平与人脑胶质瘤恶性度的相关性。方法采用RT-PCR和Western blot法检测10例正常脑组织、59例胶质瘤组织、4种胶质瘤细胞系(U251,SHG44,BT325,U87)中ARHI基因mRNA和蛋白的表达强度,结合临床病理资料统计分析。结果胶质瘤组织、细胞系中ARHI基因的表达水平显著低于正常脑组织,胶质瘤组织中ARHI的表达水平随肿瘤恶性程度增加而明显降低(P<0.01)。结论 ARHI基因mRNA和蛋白在胶质瘤中低表达,且表达水平与胶质瘤恶性程度负相关,提示ARHI基因低表达对胶质瘤的形成和恶性演变具有重要作用。

MAPK通路在G蛋白偶联受体40介导的小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在G蛋白偶联受体40(GPR40)介导的小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用.方法:利用小RNA干扰(siRNA)技术抑制GPR40在NIT-1细胞表达,观察对细胞脂性凋亡(棕榈酸、油酸干预)的影响.采用Hoechst33342染色、TUNNEL及流式细胞仪检测细胞凋亡.Western Blot检测棕榈酸、油酸孵育NIT-1细胞各时间点及GPR40 siRNA转染NIT-1细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路激酶磷酸化水平.并予相应激酶阻断剂预处理后观察细胞脂性凋亡变化.结果:棕榈酸孵育后空转组,对照siRNA转染和GPR40 siRNA转染细胞凋亡率差异无统计学意义.予棕榈酸和油酸共孵育,GPR40 siRNA转染细胞凋亡率明显高于空转组细胞;油酸孵育使ERK1/2呈时间依赖性地激活(磷酸化),ERK的特异性抑制剂预处理NIT-1细胞后,继予棕榈酸和油酸共孵育,NIT-1细胞凋亡率较对照组明显升高.油酸刺激GPR40 siRNA转染细胞的ERK磷酸化水平较空转组明显下降.结论:棕榈酸诱导NIT-1细胞脂性凋亡不依赖GPR40,而不饱和脂肪酸油酸对NIT-1细胞脂性凋亡的保护作用至少部分通过GPR40介导.其可能的假设机制为不饱和脂肪酸通过受体GPR40,激活ERK-MAPK通路,导致抗凋亡效应产生.

心肌缺血再灌注时Gsα和Giα蛋白含量mRNA水平变化及意义

目的:研究新生豚鼠心肌缺血再灌注时Gsα和Giα蛋白含量及其mRNA水平的变化以及与心功能变化的关系.方法:30只新生豚鼠随机分为3组(每组n=10),建立离体心脏左心做功模型.组Ⅰ:离体心脏缺血90min;组Ⅱ:缺血时予ThomasⅡ号液;组Ⅲ:缺血时予冷血心停搏液.各组均再灌注60min.检测心功能指标,Gsα和Giα蛋白含量及其mRNA水平的变化.结果:组Ⅰ和组Ⅱ在再灌注时的心功能明显受损(P<0.01),组Ⅲ在再灌注结束时无明显变化(P>0.05).组Ⅰ和组Ⅱ在缺血后和再灌注后Gsα蛋白含量分别为缺血前的37.5%,40.3%,36.6%和39.5%,GsαmRNA水平分别为缺血前的38.6%,41.4%,35.7%和40.1%,明显降低(P<0.01);Giα蛋白含量分别为缺血前的198.1%,175.4%,201.3%,181.4%,Gi2αmRNA水平分别为缺血前的215.4%,180.2%,210.3%和176.2%,显著升高(P<0.01).组Ⅲ在再灌注后Gsα和Giα蛋白含量及其mRNA恢复至缺血前的水平(P>0.05).结论:Gsα和Giα蛋白的平衡遭受破坏可能是未成熟心肌缺血再灌注损伤发生的机制之一.

极性蛋白Par3在小鼠胚胎着床子宫内膜中的表达

目的：探讨极性蛋白Par3在不同小鼠模型子宫内膜中的表达水平及其在小鼠胚胎着床过程中的作用。方法：建造妊娠1-8 d（早孕组）、假孕1-5 d（假孕组）、卵巢切除后类固醇激素注射（类固醇激素处理组）小鼠模型,应用免疫组织化学方法检测各种模型中小鼠子宫内膜腔上皮中Par3的表达情况,并使用Image-Pro Plus（IPP）图像分析系统进行半定量分析。结果：早孕组妊娠1-4 d小鼠内膜腔上皮中持续表达Par3并于妊娠4 d达高峰,于妊娠5 d明显减弱,妊娠6-8 d围绕胚胎初级蜕膜区域阴性表达并于次级蜕膜区域阳性表达;假孕组Par3表达趋势与早孕组类似,趋势变化幅度较早孕组小;类固醇激素处理组中,注射雌二醇（E_2）组、孕酮（P_4）组以及同时注射E_2＋P_4组的Par3表达水平均明显低于注射芝麻油对照组。结论：雌、孕激素可下调Par3表达,Par3表达水平下降引起子宫内膜腔上皮极性短暂下调有利于胚胎着床。

NADH对化学损伤PC12细胞转谷酰胺酶Ⅱ、Cyclin和G蛋白表达的调控

为探讨NADH对PC12细胞化学药物损伤后的修复作用 ,采用细胞实验检测NADH对顺铂、阿霉素、鱼藤酮对肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞系细胞毒性作用的影响 ,并运用流式细胞仪对细胞周期蛋白、G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ含量进行分析。结果发现 ,NADH能够明显抑制化学药物顺铂、阿霉素、鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用 ,上调细胞损伤后周期蛋白A和B1表达及下调周期蛋白D1表达 ;上调G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ表达。提示NADH抑制和修复化学药物对PC12细胞的损伤与细胞周期蛋白。

G蛋白耦联受体激酶相关蛋白1在氯化锂-匹罗卡品致模型大鼠海马组织的表达及意义

目的观察G蛋白耦联受体激酶相关蛋白1(GIT1)在氯化锂-匹罗卡品致模型大鼠海马组织中的表达变化,以探讨GIT1在癫发生发展过程中的作用机制。方法共42只无特定病原体级成年雄性Wistar大鼠,制备氯化锂-匹罗卡品致模型,随机分为对照组和癫组(癫发作后1、3、7、14、30、60 d),荧光定量聚合酶链反应、Western blotting法和免疫组织化学染色检测各观察时间点大鼠海马组织GIT1表达变化。结果癫组大鼠GIT1 m RNA自癫持续状态后急性期第1和3天即升高(P=0.012,0.002),至潜伏期第7和14天持续升高(P=0.003,0.001),至慢性期第30和60天达峰值水平(均P=0.000);GIT1蛋白自急性期即升高,慢性期持续升高,但与对照组相比,差异未达统计学意义(均P>0.05),至慢性期达峰值水平(均P=0.000)。至慢性期第30天时,癫组大鼠海马CA1区、齿状回和海马旁皮质GIT1蛋白表达水平均高于对照组(P=0.000)。结论癫大鼠海马组织GIT1表达上调,可能通过调节细胞骨架动态重组而影响兴奋性神经网络,从而参与癫的发生。

NADH对Aβ蛋白损伤PC12细胞转谷酰胺酶Ⅱ、Cyclin和G蛋白表达的调控

目的 探讨NADH对PC1 2细胞Aβ2 5 - 35 损伤后的修复作用。方法 采用细胞实验检测NADH对Aβ2 5 - 35 对鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC1 2细胞系细胞毒性作用的影响,并运用流式细胞仪对细胞周期蛋白、G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ含量进行分析。结果 NADH能够明显抑制Aβ2 5 - 35 对PC1 2细胞的毒性作用,上调细胞损伤后周期蛋白A和B1的表达及下调周期蛋白D1表达;上调G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ表达。结论 NADH抑制和修复Aβ2 5 - 35 对PC1 2的损伤与细胞周期蛋白、G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ调节有关。

Rho-GTPases参与肾小球足细胞骨架调节的研究进展

肾小球足细胞是肾脏固有细胞之一,在多种肾小球疾病的发生和发展过程中起着关键作用,其结构和功能的维持主要依赖于以肌动蛋白为主的细胞骨架及其调节系统。Rho-GTPases在肌动蛋白细胞骨架调节中发挥着核心作用。RhoA、Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是Rho-GTPases的重要成员。本文就近年来RhoA、Rac1和Cdc42在肾小球足细胞骨架调节方面的研究进展作一综述。

Rho蛋白家族与乳腺癌关系的研究进展

乳腺癌是导致妇女死亡的主要原因之一,其发病率具有逐年上升的趋势。Rho GTP酶及其调节蛋白和效应物均在促进乳腺癌的发生以及远处转移的过程中发挥着重要作用。本文分别从Rho GTP酶及其调节蛋白和效应物对乳腺癌发生及发展的调控作用和如何针对Rho GTP酶通路进行乳腺癌的靶向治疗等方面进行综述。

他汀类药物对EAE小鼠RhoA表达的影响

目的探讨他汀类药物能否抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型RhoA蛋白表达及其对小鼠发病情况的影响。方法随机将雌性C57BL/6小鼠分为EAE组、他汀治疗组和佐剂组3组。EAE组和他汀治疗组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG_(35-55))免疫小鼠建立EAE模型,佐剂组以生理盐水替代MOG_(35-55)同样方法注射;他汀治疗组自免疫后第3天始按体质量10 nag/(kg·d)予阿托伐他汀灌胃。观察3组小鼠发病情况及病理变化并测定脑组织中RhoA蛋白表达。结果与佐剂组相比,EAE组小鼠脑组织中RhoA蛋白表达明显增多(P<0.01)。他汀治疗组脑组织RhoA蛋白表达及临床神经功能评分均较EAE组下降(P<0.01)。结论 EAE小鼠RhoA蛋白表达上调。他汀类药物可能通过抑制RhoA蛋白表达治疗EAE。

RhoA蛋白及驱动蛋白KIF2A与卵巢癌临床病理特征的相关性研究

目的探讨RhoA蛋白和驱动蛋白KIF2A在卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测正常卵巢组织20例、卵巢上皮良性肿瘤25例以及卵巢癌45例中的KIF2A、RhoA蛋白表达,观察RhoA、KIF2A在3组中的表达情况,分析其表达与临床病理特征的关系及两者间的相关性。结果与卵巢上皮良性肿瘤、正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中KIF2A、RhoA蛋白的阳性表达率更高(P <0.05);正常卵巢组织与卵巢上皮良性肿瘤间的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌分期、淋巴结转移与KIF2A蛋白的表达密切相关(P <0.05);与组织学分级、病理类型以及年龄无关(P>0.05)。淋巴结转移、组织学分级与RhoA蛋白表达密切相关(P<0.05);与病理类型、临床分期以及年龄无关(P>0.05)。KIF2A、RhoA在卵巢癌中的表达呈正相关(r=0.801,P <0.05)。结论 KIF2A、RhoA蛋白在卵巢癌组织中高表达;两者可能共同参与卵巢癌的发生、发展过程,为临床靶向治疗卵巢癌提供新思路。

小G蛋白基因重组腺病毒转染乳鼠心肌细胞实验研究

目的研究含有小G蛋白基因Rad重组腺病毒在体外转染乳鼠心肌细胞后的转染效率及表达。方法构建Rad腺病毒载体,分别以感染复数5、10、15和20转染体外培养的乳鼠心肌细胞,48h后,采用荧光显微镜观察转染后荧光强度,流式细胞仪检测转染率。以感染复数为20转染后分3组:空白对照组,阴性对照组和Rad过表达组,3d后,采用RT-PCR、Western blot检测Rad基因表达情况。结果感染复数5、10、15和20对应转染率分别为29.84%、69.69%、77.20%和84.81%。腺病毒转染3d后,Rad过表达组心肌细胞Rad基因mRNA和蛋白表达水平较空白对照组和阴性对照组显著增加(P<0.05)。结论外源性Rad基因可在乳鼠心肌细胞中稳定表达。

小G蛋白Rad基因对心肌肥大的影响

目的研究Rad基因对心肌细胞肥大的影响,为心肌肥大早期干预提供理论基础。方法针对Rad基因序列构建Rad过表达和低表达腺病毒载体,体外培养乳鼠心肌细胞,分为8组:空白对照组,Ad-GFP组,Ad-RNA干扰(RNAi)组,Ad-Rad组,肥大模型组(心肌营养素1诱导),肥大+Ad-GFP组,肥大+Ad-RNAi组,肥大+Ad-Rad组,48h后检测Rad、心房利钠因子(ANF)mRNA和蛋白表达水平。结果肥大模型组ANF蛋白表达较空白对照组明显升高;肥大+Ad-Rad组ANF蛋白表达较肥大+Ad-GFP组明显降低,肥大+Ad-RNAi组ANF蛋白表达较肥大+Ad-GFP组明显升高(P<0.05)。肥大模型组Rad mRNA和蛋白表达较空白对照组明显降低;Ad-Rad组Rad mRNA和蛋白表达较Ad-GFP组明显增加,Ad-RNAi组Rad mRNA和蛋白表达较Ad-GFP组明显降低(P<0.05)。结论 Rad基因可抑制在细胞水平心肌营养素1诱导的心肌细胞肥大反应。