不同采收期山里红叶总黄酮及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷含量研究

目的:比较山里红叶不同采收期总黄酮的含量及主成分牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的含量,确定山里红叶最佳采收期。方法:通过正交试验筛选工艺,采用紫外分光光度法(检测波长509nm)测定不同采收期山里红叶中总黄酮类化合物的含量;采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同采收期山里红叶中单体有效成分-牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的含量,色谱柱为Diamonsil C18(150mm×4.6mm,5μm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(97:3),B为1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1mL/min;柱温:室温;对照品:牡荆素-2″-O-鼠李糖苷;进样量:10μL。结果:综合考虑在1～23周期间山里红叶的总黄酮与牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的含量以7～9月含量较高。结论:通过实验确定7～9月为山里红叶最佳采收期,为科学合理采收山里红叶提供了科学依据。

表面活性剂对山楂叶总黄酮中牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的肠道吸收促进作用

目的:考察非离子表面活性剂对山楂叶总黄酮中主要活性成分牡荆素-2″-O-鼠李糖苷在大鼠肠道的吸收促进作用。方法:配制含表面活性剂聚山梨酯-80(吐温-80)、聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40)和泊洛沙姆(F68)的山楂叶总黄酮溶液,分别在大鼠肠道上段(十二指肠和空肠)和下段(回肠和结肠)循环灌流,采用HPLC法测定溶液中牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的浓度,计算吸收率。结果:加入3种表面活性剂后,牡荆素-2″-O-鼠李糖苷在大鼠肠内的吸收均显著增加(P<0.05),比不加表面活性剂时提高50%以上。且随表面活性剂的浓度从0.01%提高到0.1%,牡荆素-2″-O-鼠李糖苷在大鼠肠道上段和下段的吸收均显著增加。在表面活性剂的浓度较低(0.01%)时,吐温-80对药物的吸收促进作用强于RH40和F68。结论:表面活性剂吐温-80,RH40和F68均可促进山楂叶总黄酮中牡荆素-2″-O-鼠李糖在大鼠肠道上段和下段的吸收。

高效液相色谱法测定大鼠血浆中牡荆素-2″-O-鼠李糖苷浓度及药动学研究

目的:建立测定大鼠血浆中牡荆素-2″-O-鼠李糖苷(VOR)浓度的HPLC法,研究体内的药动学过程。方法:血浆样品加内标物橙皮苷,以甲醇沉淀蛋白;采用Diamonsil ODS C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.1%甲酸(20:80)为流动相,流速为1.0mL.min-1;检测波长为270nm。柱温:室温;进样量:20μL。结果:最低检测限为0.04022μg.mL-1,线性范围0.1070～21.41μg.mL-1,平均提取回收率(n=6)为97.9%,日内、日间精密度试验的RSD分别小于7.4%和8.5%;大鼠静脉注射VOR15,30,60mg.kg-13个剂量后,发现VOR的AUC0?90与给药量之比呈线性关系,测得消除半衰期(t1/2β)、系统清除率(CL)及表观分布容积(Vc)无显著性差异。结论:建立的测定大鼠体内VOR含量的HPLC方法简单、专属性强,适用于VOR在大鼠体内的药代动力学研究。

炮制前后王不留行中3种黄酮苷在大鼠体内药动学的变化

目的考察炮制前后王不留行中3种黄酮苷在大鼠体内药动学的变化。方法大鼠分别灌胃给予生品、炮制品提取液(0.01 mL/g),于5、10、20、30、45 min及1、2、4、8、12、24 h采血,UPLC-MS/MS法测定王不留行黄酮苷、肥皂草苷、异牡荆素-2″-O-阿拉伯糖苷血药浓度,计算主要药动学参数。结果炮制后,王不留行黄酮苷MRT_(0~24 h)、t_(1/2)缩短(P<0.05);异牡荆素-2″-O-阿拉伯糖苷C_(max)、AUC_(0~24 h)升高(P<0.05),MRT_(0~24 h)、t_(1/2)缩短(P<0.05);肥皂草苷MRT_(0~24 h)缩短(P<0.05)。结论炮制后,王不留行中异牡荆素-2″-O-阿拉伯糖苷含量增加。在服用相同剂量提取物时,异牡荆素-2″-O-阿拉伯糖苷暴露量增加,并且该成分及王不留行黄酮苷、肥皂草苷的消除加快。

山里红叶化学成分分离

目的:研究山里红叶中(Crataegue pinnatifida Bge.var major)的化学成分。方法:用大孔树脂、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、薄层色谱、葡聚糖柱色谱等技术进行分离纯化,根据紫外吸收,液相色谱和核磁共振进行结构鉴定。结果:得到化合物牡荆素-2″-O-鼠李糖苷及牡荆素-4″-O-葡萄糖苷。结论:牡荆素-2″-O-鼠李糖苷及牡荆素-4″-O-葡萄糖苷纯度经高效液相色谱归一化法达99%。

基于UPLC-QTRAP^(■)/MS^(2)方法评价不同干燥方式对益母草中化学成分的影响

目的通过多种化学成分的含量变化,评价晒干、阴干、红外干燥(50、60、70、80℃)、微波干燥(50、60、70、80、100℃)和热风干燥(50、60、70、80℃)等15种干燥方法对益母草药材品质的影响,并优选出适宜的益母草产地加工方法。方法运用UPLC-QTRAP?/MS2法测定益母草中3个生物碱类成分(盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、葫芦巴碱)、4个酚酸类成分(苯甲酸、对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸)、5个苯丙素类成分(红景天苷、毛蕊花糖苷、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸)、11个黄酮类成分(芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、汉黄芩素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、芫花素、芹菜素、山柰酚、异鼠李素、橙皮素、槲皮素)和1个环烯醚萜苷类成分(益母草苷)的含量变化。结合主成分分析(PCA)和逼近理想值排序法(TOPSIS),综合评价不同干燥方式得到的益母草样品的品质。结果不同干燥方式对益母草中24个化学成分的含量影响显著,基于此进行PCA并将15种干燥方法分为3类;另外采用TOPSIS法对15种干燥方法进行评分,前3位为热风70℃、热风60℃和微波100℃干燥,都在很大程度上保留了益母草中活性成分。结论结合实践,优选热风70℃干燥为益母草产地加工工艺,为益母草的品质提供保障,为全国益母草生产加工提供科学依据。

金莲花中5个黄酮类化合物的大鼠体内代谢研究

目的:研究金莲花中5个黄酮类化合物的体内代谢产物。方法:将荭草素、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、牡荆素、2″-O-(2-甲基丁酰基)牡荆素、异槲皮素分别以静脉注射的方式给予大鼠,给药10 min后取血,利用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)对血浆中的代谢产物进行分析。结果:大鼠体内共检测到20个代谢产物,其中5个来源于荭草素、2个来源于荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、3个来源于牡荆素、5个来源于2″-O-(2-甲基丁酰基)牡荆素、5个来源于异槲皮素。通过准分子离子峰及二级碎片推测20个代谢产物的结构及5个原型化合物的代谢规律。结论:5个黄酮类成分均可以通过氧化、甲基化、硫酸酯结合、葡萄糖醛酸结合等Ⅰ相及Ⅱ相代谢过程代谢为相应的产物。

山楂叶提取物微丸制备及其含量测定方法研究

采用挤出滚圆法制备山楂叶提取物微丸,建立测定微丸提取物中牡荆素-2-O-鼠李糖苷含量的方法,评价微丸的溶出情况。采用固定微丸的制备工艺,以粉体学为评价指标,优化载药量、水溶性载体材料、润湿剂种类及用量等微丸的处方,采用高效液相法测定山楂叶提取物中牡荆素-2-O-鼠李糖苷的含量。微丸处方为山楂叶提取物∶微晶纤维素∶乳糖∶润湿剂(60%乙醇)质量比为10∶12∶3∶8;色谱条件:流动相四氢呋喃-乙酸-水-甲醇-乙腈(38∶4∶152∶3∶3),检测波长:330 mm,流速为1.0 mL/min,在蒸馏水中30 min时牡荆素-2-O-鼠李糖苷的溶出量达95.2%。所得山楂叶提取物微丸质量好,牡荆素-2-O-鼠李糖苷的含量测定方法实用性强。

厚皮菜总黄酮对小鼠高脂血症的预防及作用机制

目的探讨厚皮菜总黄酮对小鼠高脂血症的预防作用及机制。方法采用高效液相色谱法对厚皮菜总黄酮浸膏中的牡荆素-2′′-O-木糖苷(VOX)进行含量测定。选取60只雄性昆明小鼠,其中取10只为空白组(普通饲料喂养),其余50只建立高糖高脂饲料诱导的小鼠高脂血症模型,分为模型组、瑞舒伐他汀组、厚皮莱总黄酮高、中、低剂量组。建模过程以厚皮菜黄酮200、100、50 mg/(kg·d)3个剂量灌胃给药进行干预,给药28 d后检测血清中糖脂代谢、炎症和氧化作用的相关生化指标,包括空腹血糖(FPG)、胰岛素(INS)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6含量;超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量。结果厚皮菜总黄酮浸膏中的VOX含量为30.84%。实验第21及28天,模型组体质量与其他各组相比显著升高(P<0.05)。各组血清中FPG、INS、ALT和AST水平均无显著性差异(P>0.05)。与空白组相比,模型组TC、TG、LDL-C和HDL-C水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,厚皮菜总黄酮高、中剂量组和瑞舒伐他汀组TC、TG和LDL-C水平显著降低(P<0.05,P<0.01),厚皮菜总黄酮低剂量组仅LDL-C水平显著降低(P<0.05)。与空白组相比,厚皮菜总黄酮各剂量组和瑞舒伐他汀组HDL-C水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,厚皮菜总黄酮高、中剂量组的TNF-α、IL-1β、MAD水平显著降低,SOD及GSH-Px水平显著升高(P<0.05,P<0.01);厚皮菜低剂量组IL-1β及MAD水平显著降低(P<0.05)。结论厚皮菜总黄酮具有小鼠高脂血症的作用,VOX可能是其主要有效成分,其作用机制可能与抑制部分炎症因子和抗脂质过氧化损伤相关。

Licraside激活FXR缓解胆汁淤积的药理学研究

目的 研究异甘草素-4′-O-芹糖(1→2)葡萄糖苷(licraside)干预缓解胆汁淤积的分子作用机制。方法 用慢病毒沉默人肝癌HepG2细胞中法尼醇X受体(FXR),记为siFXR-HepG2细胞。将HepG2细胞和siFXR-HepG2细胞均分为正常组、模型组和实验组。模型组和实验组均给予胆红素+丙磺舒诱导高胆酸盐高胆红素模型;然后,正常组和模型组均不进行任何处理,实验组给予80μmol·L^(-1)licraside干预24 h。考察各组细胞的细胞活力及总胆汁酸(TBA)、胆红素等生化指标的含量,用蛋白质印迹法考察各组细胞FXR、胆酸盐输出泵(BSEP)等蛋白的表达水平。结果 HepG2细胞中正常组、模型组和实验组及siFXR-HepG2细胞中正常组、模型组和实验组的细胞活力分别为(100.00±17.15)%、(39.41±2.91)%、(70.79±3.74)%、(81.41±5.12)%、(33.49±2.69)%和(44.08±4.82)%,TBA水平分别为(7.98±5.87)、(46.18±10.93)、(9.25±7.20)、(11.18±3.36)、(38.28±5.12)和(34.79±5.39)μmol·L^(-1),总胆红素水平分别为(5.21±3.27)、(40.29±24.88)、(5.21±2.64)、(12.00±4.64)、(56.36±14.85)和(15.39±5.56)μmol·L^(-1),FXR蛋白相对表达水平分别为1.00±0.10、0.81±0.07、1.11±0.09、0.10±0.02、0.12±0.02和0.10±0.04,BSEP蛋白相对表达水平分别为1.00±0.17、0.81±0.02、0.88±0.03、0.70±0.09、0.49±0.07和0.60±0.10。HepG2细胞中实验组的上述指标和模型组相比,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.01,P<0.05);除TBA外,siFXR-HepG2细胞中实验组的上述指标和模型组相比,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.01)。结论 Licraside可以有效降低高胆酸盐高胆红素细胞的生化指标水平,这种作用是通过激动FXR的蛋白表达后,增加胆酸盐外排,减少胆汁酸的合成,达到缓解胆汁淤积的作用。

银翘解毒软胶囊治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的网络药理学研究

目的基于网络药理学的方法探索银翘解毒软胶囊治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的作用机制。方法将银翘解毒软胶囊所含1418个化合物与48个COVID-19炎症相关靶蛋白进行分子对接,构建药物-靶蛋白网络,阐明银翘解毒软胶囊的关键活性成分和潜在作用靶点。结果通过网络分析获得银翘解毒软胶囊的活性成分有50个,主要为黄酮类和三萜类化合物;潜在作用靶点37个,主要为MTOR、JAK3、ACE、ACE2、PIK3CA、TNF、AKT2和MAP2K1等炎症靶点。分子对接结果显示连翘酯苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷与新型冠状病毒(SARS-CoV-2)3CL水解酶具有较好的亲和力,甘草酸与血管紧张素转化酶II(ACE2)具有较好的亲和力。结论银翘解毒软胶囊通过干扰SARS-CoV-2病毒复制、调节炎症信号通路表达及炎症因子分泌发挥治疗COVID-19作用。

4种青海产龙胆科藏药材中8个活性成分含量的比较分析

目的:建立青海产龙胆科藏药材大花龙胆、蓝玉簪龙胆、线叶龙胆、喉毛花中8个活性成分的UPLC分析方法,比较其在4种藏药材中的差异。方法:超高效液相色谱法,采用InfinityLab Poroshell 120 SB-C8(150 mm×2.1 mm,2.7μm)色谱柱,乙腈(B)-0.05%乙酸水溶液(C)梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1),检测波长254 nm,柱温25℃。结果:马钱苷酸、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草素、异金雀花素-2″-O-吡喃糖苷、异牡荆素及异金雀花素8个成分在线性范围内相关系数为0.9998~1.000,平均回收率(n=6)98.4%~102.1%,RSD为0.77%~2.3%。8个活性成分在4种龙胆科植物中的总含量,喉毛花最高,为85.63 mg·g^(-1),其次是线叶龙胆龙胆66.01 mg·g^(-1)和蓝玉簪龙胆42.11 mg·g^(-1),大花龙胆最低,为19.33 mg·g^(-1)。4种龙胆科藏药都含有马钱苷酸、异牡荆素,但其含量均较低。蓝玉簪龙胆中龙胆苦苷和獐牙菜苷含量较高,均超过10 mg·g^(-1),线叶龙胆中龙胆苦苷含量最高,为(19.26±1.67)mg·g^(-1),均不含异金雀花素-2″-O-吡喃糖苷。大花龙胆中未检出獐芽菜苦苷、龙胆苦苷和獐芽菜苷,但异金雀花素-2″-O-吡喃糖苷和异金雀花素含量较高,达(7.99±0.09)mg·g^(-1)和(6.77±0.03)mg·g^(-1);喉毛花中獐芽菜苦苷含量最高,为(76.79±7.42)mg·g^(-1);但未检出龙胆苦苷和异红草素。结论:所建立的方法简便、准确,可用于4种龙胆科藏药的质量评价并为其资源的深入研究和利用提供参考。

一测多评法测定布渣叶总黄酮部位中8种黄酮苷成分

目的建立一测多评法(QAMS)同时测定布渣叶总黄酮部位中多种化学成分的方法,用于其质量控制。方法采用QAMS,以牡荆苷对照品为参照,计算芹菜素-6,8-二-C-葡萄糖苷、芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷、芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-阿拉伯糖苷、芹菜素-6-C-木糖-8-C-葡萄糖苷、异牡荆苷、紫云英苷和异鼠李素-3-O-芸香糖苷的相对保留时间和相对校正因子;利用该相对较正因子计算其他7种黄酮苷的量。结果 8种黄酮苷的相对保留时间和相对校正因子有较好的重复性,以牡荆苷为参照,相对校正因子分别为1.01、0.60、0.76、2.02、1.05、1.14和2.42。10批布渣叶总黄酮部位中8种黄酮苷量的QAMS计算值与外标法测定值无显著差异。结论以牡荆苷为参照,采用QAMS能同时测定布渣叶总黄酮部位中8种黄酮苷的量,该方法简单、可靠,为其量效关系研究和制剂开发提供了参考。

木菠萝叶降血脂活性成分分析

目的:研究木菠萝叶极性部位的化学成分,阐明木菠萝叶降血脂活性的主要极性非多糖类化合物的化学结构,为木菠萝叶的后续研究和利用提供科学依据。方法:取木菠萝叶药材粗粉10 kg,用60%乙醇回流提取2次,合并提取液,减压浓缩后于4℃静置24 h,过滤,滤液于45℃减压回收溶剂,得到木菠萝叶极性部位浸膏。将木菠萝叶极性部位浸膏用大孔树脂柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和高压制备液相色谱等分离技术进行分离纯化,得到单体化合物。用UV,MS,H-NMR和CNMR等方法对所得的单体化合物进行结构分析,确定其化学结构。结果:从木菠萝叶极性部位中分离、纯化得到3个化合物,经过鉴定,确定化合物1为牡荆素-2″-O-木糖苷(80.5 mg),为含2个糖的黄酮碳苷,分子式为C26H28O14,相对分子质量为564;化合物2为异槲皮苷(4.8 mg),分子式为C21H20O12,相对分子质量为464;化合物3为samsesquinoside(12.6 mg),为含1个糖的木脂素葡萄糖苷,分子式为C37H46O16,相对分子质量为746。结论:化合物1和3都是首次在该植物中发现。本研究小组在前期的研究工作中发现,木菠萝叶的非多糖极性部位具有良好的降血脂活性,而牡荆素-2″-O-木糖苷在其中含量较高,很可能是降血脂的活性成分之一。

肠道菌群介导的酸枣仁总黄酮体内代谢轮廓研究

目的比较正常和抗生素大鼠对酸枣仁总黄酮体内代谢转化反应的差异,及2组大鼠血浆中斯皮诺素的药动学变化特征。方法采用ig联合抗生素建立抗生素干预大鼠模型;正常与抗生素大鼠ig酸枣仁总黄酮(120 mg/kg),收集粪便及不同时间点的血浆样品。采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析粪便中原型成分及代谢产物;以黄芩苷为内标,建立UPLCMS/MS测定大鼠血浆中斯皮诺素含量的方法,并应用于斯皮诺素在正常与抗生素大鼠体内药动学比较研究。结果正常及抗生素大鼠粪便中共鉴定了24个化合物,包括9个原型成分(维采宁II、斯皮诺素、牡荆素、异牡荆素、当药黄素、异当药黄素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、6′′′-p-香豆酰斯皮诺素、6′′′-阿魏酰斯皮诺素)和15个代谢产物。正常大鼠中主要发生氢化、糖基化等4种代谢反应,抗生素干预后发生了脱甲氧基、去羟基化等6种代谢反应。与正常组相比,抗生素组大鼠血浆中斯皮诺素的血药浓度显著降低(P<0.05),达峰时间和半衰期显著升高(P<0.05)。结论抗生素干预会导致酸枣仁黄酮类成分在大鼠体内代谢反应紊乱,并影响斯皮诺素的药动学行为。