异甘草素通过激活自噬抑制巨噬细胞中结核杆菌生存的实验研究

目的探究异甘草素对H37Ra感染的巨噬细胞中结核杆菌的抑制作用及其涉及的机制。方法以5、10、25、50、75、100μmol/L异甘草素处理RAW264.7细胞24、48、72 h,MTT检测细胞活力。细胞被H37Ra感染6 h后:(1)利用10、25或50μM异甘草素处理细胞24 h;(2)利用50μg/mL雷帕霉素处理细胞2 h;(3)利用50μmol/L异甘草素和30 pg/mL EGF[epidermal growth factor,一种PI3K(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase)/AKT激活剂]或5mM 3MA(一种自噬抑制剂)共处理细胞24 h。利用计数法测量细菌菌落总数;利用Western blotting检测PI3K/AKT/mTOR通路蛋白和自噬标志蛋白表达;利用免疫荧光检测LC3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3)蛋白表达。结果不同浓度异甘草素处理不影响细胞活力。异甘草素或雷帕霉素处理感染后细胞显著减少细菌菌落总数,激活PI3K/AKT/mTOR通路,促进LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白相对表达量,增强LC3荧光强度,并抑制P62蛋白相对表达量。EGF处理逆转异甘草素诱导的自噬激活。3MA处理逆转异甘草素诱导的细菌菌落数下降。结论异甘草素通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路,激活自噬,抑制感染H37Ra的巨噬细胞中结核杆菌生长。

异甘草素对七氟烷致老年大鼠骨折术后认知障碍的影响

目的观察异甘草素对七氟烷致老年大鼠骨折术后认知障碍的改善作用及对细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)/环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(cyclic-AMP response element binding protein,CREB)/脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)通路的影响。方法将40只骨折大鼠随机分为对照组、模型组、异甘草素组、联合组,每组10只。联合组大鼠灌胃异甘草素(15 mg·kg^(−1)),腹腔注射PD98059(1 mg·kg^(−1));异甘草素组灌胃异甘草素(15 mg·kg^(−1)),腹腔注射等量二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO);对照组、模型组分别灌胃、腹腔注射等量DMSO。每日1次,持续5 d。用水迷宫实验检测大鼠认知功能;检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β);Tunel染色法观察海马神经元凋亡情况;免疫印迹法检测海马组织ERK1/2、磷酸化ERK1/2(phospho-ERK1/2,p-ERK1/2)、CREB、p-CREB、BDNF蛋白的表达。结果与模型组[(36.26±3.95)s、(23.91±2.91)s、(5.17±0.68)次、(494.42±45.62)ng·mL^(−1)、(600.98±60.01)ng·mL^(−1)、(34.26%±3.96%)、(0.23±0.03)、(0.14±0.02)、(0.16±0.02)]比较,异甘草素组建模后逃避潜伏期缩短,第三象限停留时间延长,穿越原平台次数增加,血清TNF-α水平、IL-1β水平、海马神经元凋亡率降低,p-ERK1/2/ERK1/2、p-CREB/CREB及BDNF蛋白表达水平升高[(14.87±1.43)s、(45.08±4.54)s、(12.31±1.77)次、(253.41±27.61)ng·mL^(−1)、(229.04±23.55)ng·mL^(−1)、(8.53%±1.06%)、(0.66±0.11)、(0.51±0.05)、(0.60±0.07)],P<0.05;与异甘草素组比较,联合组建模后逃避潜伏期延长,第三象限停留时间缩短,穿越原平台次数减少,血清TNF-α水平、IL-1β水平、海马神经元凋亡率升高,p-ERK1/2/ERK1/2、p-CREB/CREB及BDNF蛋白的表达水平降低[(21.06±2.72)s、(37.17±3.10)s、(7.72±0.96)次、(346.91±44.67)ng·mL^(−1)、(391.38±34.75)ng·mL^(−1)、(16.11%±1.84%)、(0.42±0.05)、(0.29±0.03)、(0.24±0.03)],P<0.05。结论异甘草素可改善术后认知功能障碍、抑制炎症反应、保护海马组织神经元,激活ERK1/2/CREB/BDNF信号通路可能是其作用机制之一。

异甘草素对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用

目的探讨异甘草素对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用。方法将大鼠随机分为假手术组,模型组,异甘草素低、高剂量组(7.5、30 mg/kg),每组15只。采用血管内穿刺法建立蛛网膜下腔出血大鼠模型,术后立即腹腔注射相应药物干预,每天1次,连续3 d。术后3 d采用改良Garcia评分法对各组大鼠进行神经功能评分,干湿质量法检测脑组织含水量,Nissl染色法观察海马神经元形态及数量变化,TUNEL染色检测海马组织细胞凋亡情况,激光扫描共聚焦显微镜检测神经元细胞内Ca^(2+)水平,Western blot法检测海马组织凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2表达和内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78、cleaved-caspase-12表达。结果与模型组比较,异甘草素高剂量组大鼠神经功能评分、神经元数量、Bcl-2表达升高(P<0.01),脑组织含水量、神经元细胞内Ca^(2+)水平、海马组织细胞凋亡率及cleaved-caspase-3、Bax、CHOP、GRP78、cleaved-caspase-12蛋白表达降低(P<0.01),异甘草素低剂量组大鼠以上各指标均无显著差异(P>0.05)。结论异甘草素通过抑制海马神经元内钙离子超载而降低内质网应激诱导的神经元凋亡,从而改善蛛网膜下腔出血后早期脑损伤。

异甘草素抑制RANKL/RANK/TRAF6信号通路对骨质疏松大鼠成骨细胞分化的影响

目的探究异甘草素对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞分化的影响是否与调控核因子-κB受体活化体配体(RANKL)/核因子-κB受体活化体(RANK)/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)信号通路有关。方法采用去势法建立绝经后OP大鼠模型,造模2周后将大鼠随机分为模型组、阳性组(戊酸雌二醇0.09 mg/kg)、异甘草素低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组,每组10只,另取10只大鼠作为假手术组。给药结束后采用ELISA法检测大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)、雌二醇(E_(2))水平;Micro-CT扫描观察骨微结构指标;HE染色观察股骨组织病理学;免疫组化法检测大鼠股骨Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达;Western Blot法检测大鼠股骨RANKL、RANK、TRAF6蛋白表达。结果与模型组比,阳性组与异甘草素各剂量组大鼠骨组织病变明显减轻,可见新生骨小梁;ALP[(107.94±9.83)U/L、(75.27±7.51)U/L、(89.35±9.14)U/L、(106.33±10.02)U/L比(53.79±5.62)U/L]、E_(2)[(27.71±2.67)pg/mL、(18.36±1.82)pg/mL、(23.65±2.28)pg/mL、(27.46±2.71)pg/mL比(14.64±1.59)pg/mL]水平,Tb.Th[(0.36±0.04)mm、(0.23±0.02)mm、(0.28±0.03)mm、(0.36±0.03)mm比(0.12±0.01)mm]、Tb.N[(4.45±0.44)1/mm、(2.67±0.27)1/mm、(3.36±0.34)1/mm、(4.41±0.44)1/mm比(1.51±0.12)1/mm]、BMD[(0.37±0.04)g/cm^(2)、(0.22±0.02)g/cm^(2)、(0.29±0.03)g/cm^(2)、(0.38±0.03)g/cm^(2)比(0.14±0.01)g/cm^(2)]、BV/TV[(11.94±1.23)%、(7.12±0.70)%、(8.49±0.85)%、(11.77±1.16)%比(5.75±0.61)%]以及Runx2表达[(0.84±0.08)、(0.41±0.04)、(0.59±0.06)、(0.82±0.08)比(0.27±0.03)]升高(P<0.05),Tb.Sp[(0.25±0.02)mm、(0.43±0.04)mm、(0.34±0.03)mm、(0.23±0.02)mm比(0.56±0.06)mm]以及RANKL[(0.42±0.04)、(0.86±0.08)、(0.64±0.06)、(0.45±0.04)比(1.09±0.11)]、RANK[(0.39±0.04)、(0.81±0.08)、(0.67±0.06)、(0.41±0.04)比(1.03±0.10)]、TRAF6[(0.47±0.05)、(0.77±0.08)、(0.61±0.06)、(0.49±0.05)比(0.96±0.09)]蛋白表达降低(P<0.05),且异甘草素呈剂量依赖性。结论异甘草素可能通过抑制RANKL/RANK/TRAF6信号通路,促进成骨细胞分化,改善股骨病变,有效发挥对OP的治疗作用。

异甘草素对实验性自身免疫性神经炎大鼠模型的影响及机制研究

目的:观察异甘草素(ISL)对大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)的影响并探讨机制。方法:足底注射P257-81多肽建立EAN大鼠模型,免疫后1 h,每天腹腔注射ISL(60 mg/kg)溶液,共14 d。观测大鼠发病情况,运用HE染色及透射电镜观察坐骨神经结构,ELISA法检测血清中炎症因子水平,Western blot检测脾脏单核巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)包括t⁃STAT3和p⁃STAT3的蛋白表达。结果:与EAN组比较,EAN+ISL组大鼠行为评分显著降低,体重明显增加,坐骨神经中炎症细胞浸润数明显减少,坐骨神经的脱髓鞘现象明显减少,血清中白介素⁃1β(IL⁃1β)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃6(IL⁃6)和干扰素⁃γ(IFN⁃γ)水平明显降低,脾脏单核巨噬细胞中iNOS蛋白表达显著下调,Arg1表达显著上调,p⁃STAT3蛋白表达及p⁃STAT3/t⁃STAT3比值均明显降低(P<0.05)。结论:ISL对EAN具有抑制作用,其机制可能与调控STAT3⁃巨噬细胞极化途径有关。

异甘草素通过激活PPAR⁃γ信号通路调控ox⁃LDL稳定动脉粥样硬化斑块

目的:探讨异甘草素通过激活PPAR⁃γ信号通路调控ox⁃LDL代谢稳定动脉粥样硬化(AS)斑块的分子机制。方法:采用高脂喂养+右侧颈总动脉外置套管术(PCCP)制备ApoE⁃/⁃小鼠AS颈动脉斑块模型。ApoE⁃/⁃小鼠经PCCP术后随机分为模型组和异甘草素组,正常组采用C57BL/6J小鼠。术后高脂饲料继续喂养8周,建立AS模型。全自动生化仪检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL⁃C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL⁃C)含量。ELISA检测血清中氧化低密度脂蛋白(ox⁃LDL)含量。HE染色观察颈动脉病理形态,并测定颈动脉参数。油红O染色用于脂质测定,Masson染色用于胶原含量测定,MOMA⁃2和α⁃SMA免疫组织化学染色用于巨噬细胞和平滑肌细胞测定,并计算易损指数。Western blot检测小鼠动脉中PPAR⁃γ、LXR⁃α、FABP⁃4、MMP⁃2及MMP⁃9蛋白表达。结果:与正常组相比,模型组TC、TG、LDL⁃C、HDL⁃C和ox⁃LDL升高。与模型组相比,异甘草素组TC、TG、LDL⁃C和ox⁃LDL降低,HDL⁃C无明显变化。与正常组相比,模型组小鼠颈动脉的内膜厚度(IT)、内膜/中膜厚度(IT/MT)、斑块面积(PA)、斑块面积/血管管腔面积(PA/LA)均增加,斑块内脂质和MOMA⁃2含量增加,胶原和α⁃SMA含量减少,易损指数较高,PPAR⁃γ、LXR⁃α表达减少,FABP⁃4、MMP⁃2、MMP⁃9表达增加。与模型组比较,异甘草素组小鼠颈动脉IT、IT/MT、PA、PA/LA均减少,斑块内脂质和MOMA⁃2含量减少,胶原和α⁃SMA含量增加,易损指数降低,PPAR⁃γ、LXR⁃α表达增加,FABP⁃4、MMP⁃2、MMP⁃9表达减少。结论:异甘草素能够通过激活PPAR⁃γ、上调LXR⁃α,减少FABP⁃4表达,降低ox⁃LDL水平,减少MMP⁃2和MMP⁃9的蛋白表达,降低斑块易损指数,增加斑块稳定性,发挥抗AS的作用。

异甘草素通过HDAC3抑制血管内皮细胞的炎症反应

目的研究异甘草素对血管内皮细胞炎症反应的保护作用,以及异甘草素是否通过组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)调控血管内皮细胞的炎症反应。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,分别给予脂多糖(LPS)刺激、不同浓度异甘草素联合LPS处理细胞、HDAC3特异性抑制剂和异甘草素联合LPS处理细胞,Real-time PCR和Western blotting检测细胞炎症因子和HDAC3的mRNA和蛋白表达。雄性C57BL/6J小鼠随机分为溶剂对照组和异甘草素组,颈动脉结扎手术建立小鼠急性血管炎症模型,Real-time PCR检测小鼠颈动脉炎症因子和HDAC3的mRNA表达。利用分子对接模型,从分子结构上揭示异甘草素和HDAC3之间的结合程度。结果与溶剂对照组相比,异甘草素组中LPS刺激所升高的血管内皮细胞炎症因子NLRP3、IL-1β、IL-18、MCP-1和ICAM-1的mRNA表达降低,细胞HDAC3的mRNA和蛋白表达降低。此外,颈动脉结扎的手术组小鼠中,异甘草素组的血管炎症因子NLRP3、IL-1β和HDAC3的mRNA表达降低。分子对接结果显示异甘草素与HDAC3之间具有结构上的契合性,而且HDAC3特异性抑制剂RGFP966能够进一步促进异甘草素对血管内皮细胞炎症因子表达的抑制作用。结论异甘草素可能通过HDAC3抑制血管内皮细胞的炎症反应。

异甘草素通过调节自噬作用减轻动脉粥样硬化大鼠斑块形成

目的 探讨异甘草素(ISL)通过调节自噬作用减轻动脉粥样硬化(AS)大鼠斑块形成。方法 维生素D3联合高脂饮食法建立AS模型,按随机数字法分为模型组、ISL组、ISL+自噬抑制剂组、自噬激活剂组各10只。ISL组灌胃50 mg/kg ISL,ISL+自噬抑制剂组在ISL基础上腹腔注射100 mg/kg自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(MA),自噬激活剂组腹腔注射1 mg/kg自噬激活剂西罗莫司。正常组喂基础饲料相同天数。连续4 w。超声仪检测各组动脉管腔动脉后壁内膜-中层厚度(IMT)、斑块面积(S)情况;全自动生化分析仪检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;苏木素-伊红(HE)染色检测颈动脉病理情况;透射电镜观察颈动脉超微结构;Western印迹检测颈动脉中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型(LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白(Beclin1)蛋白情况。结果 模型组出现动脉管壁明显增厚现象,管腔中可见明显的粥样或纤维斑块,内膜中可见白色条纹或黄白色斑块,斑块中自噬体、脂滴有所增多;ISL组和自噬激活剂组动脉壁弹性明显恢复,管腔内脂斑沉淀明显减少,斑块内可见明显的自噬体,可见大量自噬溶酶体;ISL+自噬抑制剂组出现明显的粥样或纤维斑块,自噬小体数量减少、出现大量脂滴。与正常组相比,模型组颈动脉IMT、斑块S水平,血清中TC、TG、LDL-C含量,颈动脉中LC3Ⅱ蛋白水平均明显升高(均P<0.05);与模型组相比,ISL组、自噬激活剂组颈动脉IMT、斑块S水平,血清中TC、TG、LDL-C含量均明显降低(均P<0.05),颈动脉中LC3Ⅱ、Beclin1蛋白水平均明显升高(均P<0.05);与ISL组相比,ISL+自噬抑制剂组颈动脉IMT、斑块S水平,血清中TC、TG、LDL-C含量均明显升高(均P<0.05),颈动脉中LC3Ⅱ、Beclin1蛋白水平均明显降低(均P<0.05)。结论 ISL能够激活自噬从而减轻AS大鼠斑块形成过程。

异甘草素治疗糖尿病脑病的网络药理学分析和实验验证

目的 基于网络药理学分析和体外实验探讨异甘草素(Isoliquiritigenin,ILG)治疗糖尿病脑病(Diabetic encephalopathy,DE)的作用机制。方法 利用HERB数据库和SwissTargetPrediction数据库预测ILG的作用靶点,再通过GeneCards、OMIM和PharmGkb获取DE相关疾病靶点,并通过Venny软件获得ILG作用靶点与DE相关疾病靶点的交集靶点;借助STRING数据库绘制PPI网络,使用Cytoscape 3.9.1软件筛选出核心靶点;利用R 4.0.3软件进行GO功能和KEGG信号通路富集分析;最后使用分子对接技术和体外实验进行验证。结果 共筛选出65个ILG-DE交集靶点;通过拓扑分析,得到8个核心靶点为EGFR、ESR1、PTGS2、PPARG、GSK3β、CDK2、PIK3R1和F3。GO功能和KEGG通路富集分析显示LIG抗DE涉及多个生物学过程,影响多种细胞组分和分子功能,如对脂多糖的反应、蛋白磷酸化、蛋白激酶活性、蛋白丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶活性等。涉及的信号通路包括PI3K-Akt信号通路、癌症中的蛋白多糖信号通路、内分泌抵抗通路等。分子对接结果显示8个核心靶点与ILG均有较好的结合,其中GSK3β与ILG的结合能为-7.22 kcal·mol~(-1)。体外实验表明ILG可以改善SH-SY5Y细胞高糖损伤,并激活P13K/AKT/GSK3β信号通路。结论 ILG可能通过作用于GSK3β调控P13K/AKT/GSK3β信号通路,进而改善DE。

壳聚糖包覆异甘草素脂质体的构建及体外抗肿瘤效果

目的 构建壳聚糖(CS)包覆异甘草素脂质体(ISL-Lip),对其性质进行表征,并对其对肝癌细胞HepG2的体外抗肿瘤效果和细胞摄取情况进行研究。方法 采用乙醇注入法制备ISL-Lip,并利用CS与脂质体(Lip)间的静电吸附和氢键作用制备壳聚糖包覆异甘草素脂质体(CS-ISL-Lip)。利用透射电镜观察ISL-Lip和CS-ISL-Lip的形貌,利用纳米粒度仪测定ISL-Lip和CS-ISL-Lip的粒径分布和表面电位。采用紫外分光光度法建立ISP的标准曲线,结合超滤法检测ISL-Lip和CS-ISL-Lip的包封率,透析法研究ISL-Lip和CS-ISL-Lip的体外药物释放情况。对CS-ISL-Lip进行荧光标记,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪研究肝癌细胞HepG2对CS-ISL-Lip的体外细胞摄取情况。利用MTT法研究CS-ISL-Lip对HepG2细胞的细胞毒性,考察其体外抗肿瘤效果。结果 ISL-Lip和CS-ISL-Lip均呈球形,分散性良好。CS对ISL-Lip进行表面包覆后其平均粒径由(138.4±0.4)nm增加为(147.8±1.6)nm,表面电位由(-12.0±2.0)mV变为(6.9±0.6)mV。CS-ISL-Lip具有良好的储存稳定性和较高药物包封率,并表现出较ISL-Lip更好的体外药物缓释效果。CS-ISL-Lip可被HepG2细胞快速摄取,且摄取量随作用时间的延长而增加,可以有效促进药物的胞内转运。CS-ISL-Lip较游离ISL和ISL-Lip对HepG2细胞表现出更强的体外增殖抑制效果。结论 CS-ISL-Lip可实现对ISL的有效包载和胞内转运,从而改善ISL的生物利用度和体外抗肿瘤效果,作为抗肿瘤药物递送系统具有良好的研究和应用潜力。

异甘草素对大鼠肝纤维化的治疗作用及其机制

目的 探讨异甘草素(ISL)对肝纤维化(HF)的治疗作用及其机制。方法 将45只SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(阳性对照,0.1 mg/kg)、ISL高、低剂量组(ISL 40、10 mg/kg)。除正常组外,其余各组采用50%四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液(1.5 ml/kg)腹腔注射建立HF模型,每周2次,持续8周。造模结束后各组大鼠按照每天10 ml/kg灌胃相应药物,共4周。末次给药后,测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;计算肝脏指数;HE及Masson染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量PCR检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达水平;免疫组化、Western blot检测肝组织中HIF-1α、VEGF蛋白的表达情况。结果 与正常组相比:模型组大鼠血清中ALT、AST含量上升(P<0.01),肝脏指数升高(P<0.01),大鼠纤维组织增生,胶原容积分数增加(P<0.01),肝组织内HIF-1α、VEGF mRNA表达水平上升(P<0.01);免疫组化及Western blot检测均表明模型组HIF-1α、VEGF蛋白表达水平上升(P<0.01)。与模型组相比:ISL高、低剂量组血清中ALT、AST水平降低(P<0.01),肝脏指数下降(P<0.01),纤维化组织增生减轻,胶原容积分数下降(P<0.05),HIF-1α、VEGF基因表达水平下调(P<0.01);免疫组化检测表明ISL高、低剂量组HIF-1α蛋白水平降低(P<0.01,P<0.05),VEGF蛋白表达水平降低(P<0.01);Western blot检测表明ISL高剂量组HIF-1α、VEGF蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 ISL对CCl4诱导HF模型大鼠有显著的治疗效果,其作用机制可能与调节HIF-1α、VEGF蛋白表达水平有关。

用于干预溃疡性结肠炎的异甘草素纳米颗粒研究

为提高异甘草素干预溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用,以玉米醇溶蛋白(zein)和果胶为包覆材料,使用反溶剂沉淀法制备异甘草素(isoliquiritigenin,ISO)纳米颗粒zein-ISO。通过单因素试验,优化了异甘草素纳米颗粒的制备条件,并进行理化性质表征。通过体外模拟消化实验比较包埋前后ISO在胃肠中的释放行为,通过动物实验评价zein-ISO针对UC的干预效果。结果表明,zein溶液质量浓度20 g/L、乙醇溶液体积分数80%、ISO添加量6 mg、zein与果胶质量比2∶1时制备的zein-ISO纳米颗粒平均粒径102.3 nm,稳定性高,包埋率达到91.66%。体外模拟消化实验表明,zein-ISO在肠液中的释放率(53.15%)明显高于胃液(18.85%)。动物实验表明,与游离ISO相比,zein-ISO更显著地改善了结肠炎小鼠结肠长度缩短的疾病状态(P<0.001),降低了结肠组织中炎性因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素1β和白细胞介素6的水平(P<0.001)。研究结果为ISO等水溶性差的活性膳食功能因子开发利用及UC的干预提供了新的思路。

异甘草素调控肠道菌群和肠屏障功能改善小鼠非酒精性脂肪性肝病的作用机制

目的研究异甘草素对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型小鼠肠道菌群和肠屏障功能的调控作用,阐明其改善NAFLD的机制。方法将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组(超纯水)、模型组(超纯水)和异甘草素组(100mg/kg),每组10只。模型组和异甘草素组喂食高脂饲料19周建立NAFLD模型;造模同时,各组小鼠灌胃相应药物/超纯水。记录各组小鼠体重变化,计算小鼠肝指数、白色脂肪指数和棕色脂肪指数;观察小鼠肝脏组织和结肠组织的病理变化以及肝脏脂质堆积情况;检测小鼠血清或肝脏中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平;检测小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和肝脏组织中IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平;取小鼠粪便进行16S rRNA测序,考察异甘草素对模型小鼠肠道菌群结构的影响;检测小鼠结肠组织中肠黏膜屏障功能相关蛋白[闭合蛋白4(Claudin-4)、闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白1(ZO-1)]的表达水平。结果与模型组比较,异甘草素组小鼠体重、肝指数,肝脏和血清中TC水平以及血清中AST、ALT水平,血清中IL-6、IL-1β和TNF-α水平,肝脏组织中TNF-αmRNA表达水平均显著降低;棕色脂肪指数显著升高;肝脏组织炎症与损伤显著改善,NAFLD活动评分和脂质染色面积占比均显著减少(P<0.05)。异甘草素可显著上调小鼠肠道益生菌(norank_f_Muribaculaceae、Odoribacter、Ruminiclostridium等)的相对丰度以及肠黏膜屏障功能相关蛋白表达水平,显著下调有害菌(Desulfovibrio、norank_f_Lachnospiraceae、unclassified_p_Firmicutes等)的相对丰度,修复肠黏膜屏障。结论异甘草素可显著延缓NAFLD的进展,其作用机制可能与调节肠道菌群、改善肠屏障功能有关。

异甘草素在体内外抑制喉癌细胞生长的作用及其机制

目的探究异甘草素(ISL)在体内外抑制喉癌细胞生长的作用机制。方法采用MTT法检测人喉癌细胞系Hep-2和TU212用不同浓度的异甘草素(0,20,40,80,160μmol/L)培养24 h以及20μmol/L的异甘草素培养12,24,48 h的细胞存活率。将喉癌细胞分为对照组(未处理)和ISL 20μmol/L组(20μmol/L异甘草素处理24 h),通过Hoechst 33258染色观察细胞形态。通过细胞划痕实验检测细胞迁移,通过Transwell实验检测细胞侵袭,通过流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和p53的蛋白表达水平。将接种Hep-2细胞的裸鼠随机分为2组:对照组(注射0.2 ml DMEM培养基)和异甘草素组(注射0.2 ml含有25 mg/kg异甘草素的DMEM培养基),每组5只裸鼠,均连续给药7 d,末次给药21 d后测量肿瘤体积。结果与0μmol/L异甘草素相比,当异甘草素浓度≥20μmol/L时,Hep-2和TU212细胞存活率均显著降低(P<0.05)。与培养0 h相比,当培养24 h和48 h时,Hep-2和TU212细胞存活率均显著降低(P<0.05)。ISL 20μmol/L组细胞出现染色质固缩和明亮的凋亡小体。与对照组相比,ISL 20μmol/L组Hep-2和TU212细胞的伤口愈合面积、侵袭细胞数均降低,细胞凋亡率均升高(P<0.001)。与对照组相比,ISL 20μmol/L组Hep-2和TU212细胞中Bcl-2和p-STAT3蛋白表达水平均降低,Bax、cleaved Caspase-3和p53的蛋白表达水平均升高(P<0.01)。末次给药21 d后,与对照组相比,异甘草素组裸鼠的肿瘤体积显著降低(P<0.01)。结论异甘草素通过激活线粒体凋亡途径并抑制STAT3信号通路来诱导喉癌细胞凋亡。

HPLC双波长法测定复方甘草合剂中甘草苷、甘草素及异甘草素的含量

目的 :研究以HPLC法同时测定甘草合剂中甘草苷、甘草素及异甘草素含量的方法。方法 :采用CromasilC18柱 ,以甲醇 - 0 .5 %冰醋酸为流动相 ,梯度洗脱 ,双波长检测 ,测定波长λ1=2 76nm ,λ2 =372nm。结果 :甘草苷在 5 0～ 12 5 0ng范围内线性关系良好 ,r =0 .9999;甘草素在 5 .0～ 12 5 .0ng范围内线性关系良好 ,r =0 .9998;异甘草素在 3.0～ 6 .0ng范围内线性关系良好 ,r =0 .9999。平均加样回收率 :甘草苷为 98.30 % ,RSD为 1.0 1% (n =6 ) ;甘草素为 98.0 1% ,RSD为0 .6 8% (n =6 ) ,异甘草素为 98.73% ,RSD为 0 .89% (n =6 )。结论 :操作简便 ,结果可靠 ,重现性好 。

异甘草素的药理作用研究

异甘草素(isoliquiritigenin)为甘草中异黄酮类化合物,近年来其广泛药理活性备受关注。文章对异甘草素国内外药理活性研究文献进行了综述。异甘草素有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等作用,并能扩张动脉,对心脏和脑有保护作用。

高效液相色谱法同时测定甘草中甘草酸、甘草苷、异甘草素的含量

目的建立同时测定甘草中甘草酸、甘草苷和异甘草素含量的方法。方法采用高效液相色谱法对甘草粉末的67%甲醇提取物进行分析。用C18反相色谱柱,1%磷酸水-乙腈梯度洗脱,对不同色谱峰分别采用248、276、360、370nm紫外波长检测。结果甘草酸的回归方程为Y=1×106X+16220,r2=1;甘草苷的回归方程为Y=2×106X+49444,r2=0.9995;异甘草素的回归方程为Y=1×107X+4.4667,r2=1。甘草酸、甘草苷和异甘草素的加样回收率分别为98.01%、102.63%、98.18%。结论本方法准确、稳定、可靠,可用于甘草中甘草酸、甘草苷和异甘草素3种成分的同时测定。

正交实验优化异甘草素超声提取工艺

采用超声法提取乌拉尔甘草中异甘草素,通过乙醇体积分数、液固质量体积比(g/mL)、超声提取时间和提取次数4个因素对异甘草素提取率的影响进行了正交实验,确定超声提取最佳工艺条件为:体积分数80%乙醇,液固质量体积比(g/mL)10∶1,超声20 m in,提取3次,异甘草素的提取率为0.37‰,是乙醇热回流提取的2.06倍,是索氏提取的1.54倍。超声提取浸膏中异甘草素的质量分数为0.55%,是乙醇热回流提取的3.24倍,是索氏提取的1.45倍。结果表明:超声提取甘草中异甘草素具有提取温度低、速度快、提取率高、纯度高等特点。

超临界CO_2萃取异甘草素的提取工艺

采用正交试验与单因素试验相结合方法对异甘草素的超临界CO2提取工艺进行了研究,并与常规索氏提取法的实验结果进行了对比。得到的最佳工艺参数为:萃取压力30 MPa、萃取温度45℃、夹带剂85％乙醇、液固比为5:1、CO2流量10 kg／h、分离压力5．5 MPa、分离温度35℃。实验结果表明,在优化的条件下,超临界CO2萃取异甘草素的提取率为0．035％,异甘草素在提取物中的质量分数为0．84％,分别是索氏提取法提取率的3．5倍,质量分数的3．0倍。超临界CO2萃取异甘草素所用时间短、溶剂用量少、提取效率高、环境友好,是一种高效、快速提取异甘草素的方法。

异甘草素抑制α-葡萄糖苷酶的分子机制

α-葡萄糖苷酶活性与糖尿病患者的餐后血糖水平有重要关联,寻找食源性的α-葡萄糖苷酶抑制剂是当前功能性食品研究的热点。异甘草素是甘草的重要活性成分,相关研究表明甘草提取物具有α-葡萄糖苷酶抑制活性,推测与异甘草素有关。鉴于此,本实验通过酶抑制、荧光猝灭以及分子对接等方法研究异甘草素抑制α-葡萄糖苷酶活性的机制。结果表明,异甘草素以竞争性与非竞争性相混合的方式抑制α-葡萄糖苷酶,其抑制效果明显优于阿卡波糖。荧光猝灭分析结果表明在疏水作用力驱动下异甘草素可与α-葡萄糖苷酶结合生成复合物,结合位点数为1。分子对接结果验证了相关实验结论:异甘草素位于酶的疏水口袋中,与残基Asp202和Arg400以氢键结合,并与周围众多的疏水残基存在疏水作用,共同维持该复合物结构。本研究对于开发新型的食源性α-葡萄糖苷酶抑制剂、推动异甘草素在功能性食品和医药领域的应用具有一定的参考意义。