异硫氢酸苯酯法(PITC)分析氨基酸

自从1958年Moore等人建立氨基酸测定方法以来,氨基酸分析方法发展迅速,日新月异。除采用阳离子交换柱,茚三酮柱后反应测定氨基酸方法外,70年代起,各种采用柱前衍生,反相色谱法分离测定氨基酸方法相继问世,为氨基酸分析开辟了新的领域。异硫氢酸苯酯(PITC)法作为其中一种,以其灵敏度高(可检测,1Pmal),分析速度快(水解液为10分钟。

两种柱前衍生反相高效液相色谱法测定血液和尿液中游离氨基酸

建立以PITC法和AQC法为柱前衍生试剂测定血液和尿液中游离氨基酸含量的测定方法。采用Waters-e2695操作系统,色谱柱为Shim-vp,ODS(250mm×4.6mm,5μm)(日本,岛津公司),以甲醇/乙腈/水和醋酸钠溶液(pH 6.5)为流动相,梯度洗脱。分别采用紫外和荧光检测器对血液和尿液中游离氨基酸进行含量测定。结果显示,两种衍生化方法灵敏度好、分离度高,具有良好的线性范围(r>0.990 0),准确度高(平均回收率为75.1%～127.0%),进样精密度好(RSD为0.12%～3.42%)。PITC法在尿液中游离氨基酸含量测定中显示了良好的测试准确性;而AQC法测定尿液中组氨酸、苏氨酸、脯氨酸超出线性范围,需要对尿样的前处理进行深入研究。

HPLC法测定糖尿病患者血浆和尿中氨基酸含量

目的 建立异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生高效液相法测定糖尿病患者血浆和尿液中游离氨基酸含量。方法 用Waters-e2695操作系统,PITC为柱前衍生试剂,色谱柱为Shim-pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-水和醋酸钠溶液,用醋酸调p H至6.5,梯度洗脱,用紫外254 nm检测。结果 该方法线性范围为2~200μg·m L-1,线性关系良好（r〉0.991 8）,回收率RSD为88.5%~123.4%,精密度RSD为1.03%~7.50%。结论 本方法有良好的准确性,适用于糖尿病患者血、尿中游离氨基酸含量的测定。