含异硫氰酸胍一次性使用真空采血管无菌检查方法的研究

建立适用于含异硫氰酸胍一次性使用真空采血管的无菌检查法,通过方法适用性试验表明,使用中和剂对异硫氰酸胍进行中和并采用薄膜过滤法进行试验,可有效消除异硫氰酸胍对微生物生长的抑制作用,解决含异硫氰酸胍成分医疗器械的无菌检查问题。

异硫氰酸胍法快速提取二球悬铃木组织总RNA的研究

针对二球悬铃木组织中多酚物质含量较高的特点,采用异硫氰酸胍法从二球悬铃木花序和叶片中提取到质量高、完整性好的总RNA,28S rRNA的亮度约为18S rRNA的2倍,通过RT-PCR克隆到二球悬铃木中与拟南芥Leafy基因同源的部分编码区。高质量的RNA为Northern杂交和利用同源序列法克隆二球悬铃木的相关基因提供了前提条件。

改良异硫氰酸胍一步法提取红豆杉细胞RNA

将Chomczynski建立的RNA一步分离法加以适当改进 ,用以提取红豆杉细胞株E2、TC、H2 1的总RNA ,所获RNA样品的A2 60 /A2 80 比值分别是 :1.82± 0 .0 3、1.85± 0 .0 4、1.74± 0 .0 3;A2 60 /A2 3 0 比值分别为 :2 .0 2± 0 .0 3、2 .15± 0 .0 3、2 .0 3± 0 .0 5 ;得率分别为 :5 1.36± 0 .0 5 μg/g、5 2 .4 0± 0 .0 4 μg/g、5 1.0 8± 0 .0 6 μg/g新鲜细胞。变性琼指糖凝胶电泳图谱显示每一样品均具有完好的 2 8S和

改良异硫氰酸胍法提取玛咖(Maca)叶片中总RNA研究

为了获得质量较高的玛咖总RNA,对其总RNA的提取进行了研究。以玛咖无菌苗叶片为材料,通过改良的异硫氰酸胍法提取其总RNA。结果:所提取的总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值达到1.90±0.03,总RNA的得率达到252.57±1.12μg/g。表明改良的异硫氰酸胍法适合于玛咖叶片中RNA的提取,所提取的总RNA纯度高、完整性好,为进一步的玛咖分子生物学研究打下良好基础。

研磨-CTAB法与碱性异硫氰酸胍沸腾法提取真菌DNA的比较分析

目的对两种病原真菌基因组DNA提取方法[研磨-CTAB(十六烷基三甲基溴化胺)法及碱性异硫氰酸胍沸腾法]的提取效果进行比较,为临床真菌标本的前期处理提供有效参考。方法对来自于同一批培养基的4株申克孢子丝菌及6株普通真菌菌株分别采用研磨-CTAB法及碱性异硫氰酸胍沸腾法抽提基因组DNA,并用紫外分光光度计测定基因组DNA样品OD260和OD280值,计算提取样品的浓度并估计核酸的纯度,然后采用配对资料t检验的统计学方法进行比较。结果碱性异硫氰酸胍沸腾法提取的DNA浓度及纯度均高于研磨-CTAB法,两者在统计学上存在显著差异(P<0·05)。结论碱性异硫氰酸胍沸腾法提取病原性真菌基因组DNA具有简便、快速、价廉等特点,适用于病原真菌分子生物学研究的标本前期处理。

一种改进的异硫氰酸胍法结合硅胶膜离心吸附柱提取孕妇外周血微量胎儿RNA的方法

孕妇外周血中存在胎儿RNA为无创性产前诊断提供了基础.但血液中富含RNA酶和微量胎儿RNA的特点,对从孕妇血浆中提取胎儿RNA带来困难.我们以ε血红蛋白基因和胎盘特异表达基因4(PLAC4)mRNA作为研究对象,用改进的异硫氰酸胍法结合硅胶膜离心吸附柱法探索孕妇外周血中胎儿微量RNA的提取方法,获得满意效果.30例孕妇和9例非孕妇外周血样品中总RNA经凝胶电泳测定显示3条带,分别为28S,18S和5.8S.其28S条带亮度为18S亮度的2倍.总RNA质量浓度(A260/A280)为1.97 g/L,光密度比值(A260-A320)/(A280-A 320)为1.86.30例孕妇外周血样本有7例提取到ε血红蛋白基因mRNA,ε血红蛋白基因mRNA的最小浓度为0.537μg/mL,最大浓度为1.79μg/mL,ε血红蛋白基因mRNA的浓度中位数为1.24μg/mL.30例孕妇外周血样本提取到PLAC4基因mRNA,浓度最小值为2.105×103 copies/mL,最大值为12.760×103 copies/mL,而9例非孕妇中均未提取到(P<0.01),浓度中位数为6.612×103 copies/mL.因此,改进的异硫氰酸胍法与硅胶膜离心吸附柱纯化法相结合,可有效抑制RNA降解,用于提取、纯化孕妇血液中微量胎儿RNA.

异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取组织中的RNA

为寻找一种简便、低消耗、提取高质量ＲＮＡ的方法，基于异硫氰酸胍酚氯仿一步法，省去变性液Ｄ二次溶解ＲＮＡ提取组织中的ＲＮＡ。结果：从２００多例肿瘤组织中提取出高质量的ＲＮＡ，所需费用与购买试剂盒相比节约了７５％。结果提示：异硫氰酸胍酚氯仿一步法是一种简便、经济、适合大量样本的ＲＮＡ提取方法。

异硫氰酸胍法提取梅花鹿鹿茸组织总RNA

采集6只2岁梅花鹿鹿茸样品，应用异硫氰酸胍法提取其总RNA，建立了鹿茸总RNA适宜提取条件。实验最终提取RNA的紫外吸收值为：A260／A280=1．73～1.86，A260／A230=2．16～2．53，经甲醛变性凝胶电泳可以清晰看到28s、18s、5s 3条带，其亮度满足未降解RNA的特征，且无明显DNA污染。

用改进的异硫氰酸胍一步法提取完熟水果RNA

以完熟水果为材料提取RNA，除了要最大限度地抑制内源RNA酶活性，严格杜绝外源RNA酶污染外，选择合适的试验材料也是试验成功的关键。选取健壮植株上发育正常的果实，剖取果皮或近果皮果肉组织，在Chomczynski硫氰酸肌一步法的基础上，进行了2次变性，反复抽提，无菌操作等技术改进，获得了满意的纯化效果。

异硫氰酸胍法提取大鼠睾丸总RNA及质量鉴定

本实验应用改良的异硫氰酸胍法从睾丸中提取总ＲＮＡ。经紫外分光光度计检测，ＯＤ２６０ｎｍ／ＯＤ２８０ｎｍ≥１．８，表明蛋白质污染少，ＲＮＡ纯度较高。经变性琼脂糖凝胶电泳可见清晰的１８ｓ和２８ｓ两条带，经ＲＮａｓｅＡ消化的样品中条带消失，表明所提取物质确为ＲＮＡ，并无降解。以雄激素受体ｃＤＮＡ为探针，应用分子杂交法检定杂交信号居１８ｓ稍后，表明总ＲＮＡ中这种特定的ｍＲＮＡ未发生降解。同时证明ＲＮＡ提取过程中，如第一步－２０℃沉淀时间过长，可引起ＲＮＡ降解。

三七总RNA提取方法的对比研究

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas'RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT-PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。

一种高效的树木总DNA提取方法

高质量的DNA是林木分子生物学研究的关键因素之一。在高浓度离液剂异硫氰酸胍(GuSCN)存在的条件下,核酸具有与硅珠(SiO2)颗粒结合、并能在较高温度下被低盐浓度溶液洗脱的特性。基于这一原理建立了一种新的树木叶片总DNA提取方法。此方法操作简单、快速,经过浓度、纯度测定,以及PCR扩增和限制性内切酶消化证明,从不同树木叶片中均得到了高质量的DNA样品。

非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒 (RNeasyPlantMiniKit)提取非洲菊 (Gerberahy brida)花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,在RNA沉淀后 ,再次加入适量变性液 ,冻融 2次 ,再加热至 45℃使RNA完全溶解 ;试剂盒提取时 ,适当延长各提取步骤的离心时间 ,并增加DEPCH2 O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰 ,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达 ,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。

花生幼胚RNA提取方法研究

花生(ArachishypogaeaL.)幼胚体积很小,不易剥取且富含多糖、酚类等化合物,因此以花生幼胚为材料提取RNA时会遇到很大困难.采用改进的Trizol法和异硫氰酸胍一步法成功提取出了高质量的花生幼胚总RNA,后续实验证明具有良好的逆转录活性.介绍了花生幼胚快速剥取的方法.

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较。结果表明,Trizol法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法。

从血液中提取总RNA的一种快速高效方法

血液中含有大量的RNA酶 ,可引起RNA的降解 .防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键 .目前提取RNA的方法较多 ,但有些方法尚不能完全防止RNA降解 .将TRIZOL方法稍加改进 ,将TRIZOL与异硫氰酸胍联用提取血液淋巴细胞总RNA .琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值为 2∶1,优于单独使用其中任何一种试剂者 .此方法同样适用于从其它细胞中提取RNA .

百合花瓣总RNA提取方法的研究

以亚洲百合品种Pollyanna和东方百合品种Sorbonne为试材,在比较异硫氰酸胍法、SDS/酚法与CTAB-L i Cl法提取总RNA效果的基础上,针对百合组织中富含多糖的特点,在Sorbonne提取RNA中加入特殊除多糖步骤,改进了CTAB- L i Cl法.结果表明,改进CTAB- L i Cl法能有效去除多糖,提取到的RNA2 8S r RNA亮度约为18S r RNA的2倍,A2 6 0 / 2 80介于1.8～2 .0之间,A2 6 0 / 2 30为2 .0 ,Pollyanna RNA产率为36 .3μL·g- 1 ,Sor-bonne RNA产率为10 .2 μL·g- 1 ,经RT- PCR获得了特异性条带,说明用改进CTAB- L i Cl法从百合花瓣中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究.

一种玉米叶片基因组DNA快速提取新方法的初步研究

在玉米分子标记辅助育种工作中,需要对大量群体的个体样本进行分子标记分析,其中DNA的高效快速提取是关键的技术环节。以异硫氰酸胍为主要提取试剂,结合使用组织研磨器(Qiagen Tissuelyser),建立了一种玉米叶片基因组DNA的快速提取新方法。利用此方法提取玉米叶片基因组DNA,具有使用药品少、操作步骤简单、快速、成本低、DNA质量稳定等优点,通常情况下每人每个工作日可以提取300个DNA样品。此DNA提取方法可有效地用于玉米分子标记分析。

2种大豆总RNA提取方法的改良

对大豆总RNA的提取方法T rizo l法和异硫氰酸胍法进行了改良,比较了改良前后2种方法的提取效果。结果表明,2种改良方法提取的大豆总RNA质量较高、完整性较好,完全可以满足后续研究要求,RNA产率均超过220μg/g。改良T rizo l法适用于大豆根、茎、叶及生长点总RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法适用于大豆根、茎及生长点总RNA的提取。

一种改进的多浆旱生植物霸王叶和根总RNA提取方法

针对多浆旱生植物霸王富含多酚和多糖类物质的特点,在常规异硫氰酸胍方法的基础上进行改进,摸索出一种霸王叶和根总RNA提取的方法。本方法主要通过在提取缓冲液中加入4%β-巯基乙醇以去除多酚物质的干扰;用2mol/L醋酸钠(pH4.0)、水饱和酚和氯仿:异戊醇(24:1)抽提以去除多糖和蛋白物质。采用该方法提取的霸王总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值在1.8￣2.0之间,其质量完全可以满足进一步分子生物学研究的要求。