含异硫氰酸胍一次性使用真空采血管无菌检查方法的研究

建立适用于含异硫氰酸胍一次性使用真空采血管的无菌检查法,通过方法适用性试验表明,使用中和剂对异硫氰酸胍进行中和并采用薄膜过滤法进行试验,可有效消除异硫氰酸胍对微生物生长的抑制作用,解决含异硫氰酸胍成分医疗器械的无菌检查问题。

异硫氰酸胍法快速提取二球悬铃木组织总RNA的研究

针对二球悬铃木组织中多酚物质含量较高的特点,采用异硫氰酸胍法从二球悬铃木花序和叶片中提取到质量高、完整性好的总RNA,28S rRNA的亮度约为18S rRNA的2倍,通过RT-PCR克隆到二球悬铃木中与拟南芥Leafy基因同源的部分编码区。高质量的RNA为Northern杂交和利用同源序列法克隆二球悬铃木的相关基因提供了前提条件。

改良异硫氰酸胍一步法提取红豆杉细胞RNA

将Chomczynski建立的RNA一步分离法加以适当改进 ,用以提取红豆杉细胞株E2、TC、H2 1的总RNA ,所获RNA样品的A2 60 /A2 80 比值分别是 :1.82± 0 .0 3、1.85± 0 .0 4、1.74± 0 .0 3;A2 60 /A2 3 0 比值分别为 :2 .0 2± 0 .0 3、2 .15± 0 .0 3、2 .0 3± 0 .0 5 ;得率分别为 :5 1.36± 0 .0 5 μg/g、5 2 .4 0± 0 .0 4 μg/g、5 1.0 8± 0 .0 6 μg/g新鲜细胞。变性琼指糖凝胶电泳图谱显示每一样品均具有完好的 2 8S和

改良异硫氰酸胍法提取玛咖(Maca)叶片中总RNA研究

为了获得质量较高的玛咖总RNA,对其总RNA的提取进行了研究。以玛咖无菌苗叶片为材料,通过改良的异硫氰酸胍法提取其总RNA。结果:所提取的总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值达到1.90±0.03,总RNA的得率达到252.57±1.12μg/g。表明改良的异硫氰酸胍法适合于玛咖叶片中RNA的提取,所提取的总RNA纯度高、完整性好,为进一步的玛咖分子生物学研究打下良好基础。

研磨-CTAB法与碱性异硫氰酸胍沸腾法提取真菌DNA的比较分析

目的对两种病原真菌基因组DNA提取方法[研磨-CTAB(十六烷基三甲基溴化胺)法及碱性异硫氰酸胍沸腾法]的提取效果进行比较,为临床真菌标本的前期处理提供有效参考。方法对来自于同一批培养基的4株申克孢子丝菌及6株普通真菌菌株分别采用研磨-CTAB法及碱性异硫氰酸胍沸腾法抽提基因组DNA,并用紫外分光光度计测定基因组DNA样品OD260和OD280值,计算提取样品的浓度并估计核酸的纯度,然后采用配对资料t检验的统计学方法进行比较。结果碱性异硫氰酸胍沸腾法提取的DNA浓度及纯度均高于研磨-CTAB法,两者在统计学上存在显著差异(P<0·05)。结论碱性异硫氰酸胍沸腾法提取病原性真菌基因组DNA具有简便、快速、价廉等特点,适用于病原真菌分子生物学研究的标本前期处理。

一种改进的异硫氰酸胍法结合硅胶膜离心吸附柱提取孕妇外周血微量胎儿RNA的方法

孕妇外周血中存在胎儿RNA为无创性产前诊断提供了基础.但血液中富含RNA酶和微量胎儿RNA的特点,对从孕妇血浆中提取胎儿RNA带来困难.我们以ε血红蛋白基因和胎盘特异表达基因4(PLAC4)mRNA作为研究对象,用改进的异硫氰酸胍法结合硅胶膜离心吸附柱法探索孕妇外周血中胎儿微量RNA的提取方法,获得满意效果.30例孕妇和9例非孕妇外周血样品中总RNA经凝胶电泳测定显示3条带,分别为28S,18S和5.8S.其28S条带亮度为18S亮度的2倍.总RNA质量浓度(A260/A280)为1.97 g/L,光密度比值(A260-A320)/(A280-A 320)为1.86.30例孕妇外周血样本有7例提取到ε血红蛋白基因mRNA,ε血红蛋白基因mRNA的最小浓度为0.537μg/mL,最大浓度为1.79μg/mL,ε血红蛋白基因mRNA的浓度中位数为1.24μg/mL.30例孕妇外周血样本提取到PLAC4基因mRNA,浓度最小值为2.105×103 copies/mL,最大值为12.760×103 copies/mL,而9例非孕妇中均未提取到(P<0.01),浓度中位数为6.612×103 copies/mL.因此,改进的异硫氰酸胍法与硅胶膜离心吸附柱纯化法相结合,可有效抑制RNA降解,用于提取、纯化孕妇血液中微量胎儿RNA.

异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取组织中的RNA

为寻找一种简便、低消耗、提取高质量ＲＮＡ的方法，基于异硫氰酸胍酚氯仿一步法，省去变性液Ｄ二次溶解ＲＮＡ提取组织中的ＲＮＡ。结果：从２００多例肿瘤组织中提取出高质量的ＲＮＡ，所需费用与购买试剂盒相比节约了７５％。结果提示：异硫氰酸胍酚氯仿一步法是一种简便、经济、适合大量样本的ＲＮＡ提取方法。

异硫氰酸胍法提取梅花鹿鹿茸组织总RNA

采集6只2岁梅花鹿鹿茸样品，应用异硫氰酸胍法提取其总RNA，建立了鹿茸总RNA适宜提取条件。实验最终提取RNA的紫外吸收值为：A260／A280=1．73～1.86，A260／A230=2．16～2．53，经甲醛变性凝胶电泳可以清晰看到28s、18s、5s 3条带，其亮度满足未降解RNA的特征，且无明显DNA污染。

用改进的异硫氰酸胍一步法提取完熟水果RNA

以完熟水果为材料提取RNA，除了要最大限度地抑制内源RNA酶活性，严格杜绝外源RNA酶污染外，选择合适的试验材料也是试验成功的关键。选取健壮植株上发育正常的果实，剖取果皮或近果皮果肉组织，在Chomczynski硫氰酸肌一步法的基础上，进行了2次变性，反复抽提，无菌操作等技术改进，获得了满意的纯化效果。

异硫氰酸胍法提取大鼠睾丸总RNA及质量鉴定

本实验应用改良的异硫氰酸胍法从睾丸中提取总ＲＮＡ。经紫外分光光度计检测，ＯＤ２６０ｎｍ／ＯＤ２８０ｎｍ≥１．８，表明蛋白质污染少，ＲＮＡ纯度较高。经变性琼脂糖凝胶电泳可见清晰的１８ｓ和２８ｓ两条带，经ＲＮａｓｅＡ消化的样品中条带消失，表明所提取物质确为ＲＮＡ，并无降解。以雄激素受体ｃＤＮＡ为探针，应用分子杂交法检定杂交信号居１８ｓ稍后，表明总ＲＮＡ中这种特定的ｍＲＮＡ未发生降解。同时证明ＲＮＡ提取过程中，如第一步－２０℃沉淀时间过长，可引起ＲＮＡ降解。

异硫氰酸β-苯基乙基酯抑制小鼠前胃鳞癌及癌前病变的研究

目的观察硫苷的降解产物异硫氰酸β-苯基乙基酯(PEITC)对甲硝基亚硝基胍(MNNG)诱发小鼠前胃鳞癌及癌前病变的影响。方法实验分4组,即MNNG组和PEITC大、中、小三个剂量组,所有组用MNNG 100μg/ml稀释液代替饮用水由小鼠自由饮取12个月,诱发小鼠前胃鳞癌及癌前病变。PEITC组每天按100,30和10 mg/kg灌胃给药至16个月(MNNG组灌等量蒸馏水),处死动物,解剖作病变诊断和病检。结果 MNNG组和PEITC大、中、小三个剂量组分别诱发小鼠癌前病变26只(92.8%)、9只(33.3%)、11只(40.7%)和13只(46.4%);癌变18只(64.3%)、3只(11.1%)、5只(18.5%)和8只(28.6%)。经统计学处理,PEITC治疗组与MNNG组比较有显著性差异(P<0.05)。结论 PEITC对MNNG诱发小鼠前胃鳞癌及癌前病变有抑制作用。

N-烷基/芳基-N′-(4-芳基噻唑-2-基)-N"-糖基胍的合成及生物活性研究

2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯(1)与2-氨基-4-取代苯基噻唑(2a～2b)反应,生成糖基硫脲衍生物3a～3b,再在伯胺存在下经氯化汞脱硫,得到一系列新的N-烷基/芳基-N'-(4-芳基噻唑-2-基)-N"-糖基胍类化合物(4a～4e,5a～5e).所有新化合物的结构均经IR,1HNMR,MS谱和元素分析证实,所得产物均为β-构型.生物活性测试结果表明,化合物4b和5d对HIV-1PR表现出了较高的抑制活性.

新型胍基葡萄糖苷的合成及生物活性

将2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯(1)与2-氨基-4/6-取代-苯并噻唑(2a～2e)反应,生成糖基硫脲衍生物(3a～3e),再在伯胺存在下经氯化汞脱硫,得到一系列新的多乙酰基胍基糖苷类化合物(4a～4d,5a～5d,6a～6d,7a～7d),糖基的保护基团在甲醇钠/甲醇条件下脱除.所有新化合物的结构均经IR,1H NMR,MS谱和元素分析证实,所得产物均为β-构型.生物活性测试结果表明,化合物4c,6c,8b,8c等对HIV-1蛋白酶表现出了较高的抑制活性;化合物7c具有抗流感乙型病毒活性;化合物5e,7c,7d等对血管紧张素转化酶具有抑制活性.

含苯并噻唑基乳糖基胍的合成

2,3,6,2',3',4'.6'-七-O-乙酰基-β-乳糖基异硫氰酸酯(1)分别与2-氨基-4/6-取代苯并噻唑2a～2e反应,制得糖基硫脲3a～3e,将其在HgCl2作用下与伯胺反应,制得一系列新化合物N-烷基/芳基-N'-(4/6-取代-苯并噻唑-2-基)-N''-(2,3,6,2',3',4',6'-七-O-乙酰基-β-乳糖基)胍4～6.然后,在CH3ONa/CH3OH作用下,脱乙酰基得含苯并噻唑基的乳糖基胍类化合物7～9.所有新化合物的结构均经IR,1H NMR,MS谱和元素分析证实,所得产物均为β-构型.对代表性化合物的生物活性测试结果表明,乳糖基胍类化合物对HIV-1蛋白酶、血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性较差.

胍基木吡喃糖苷的合成及其抗HIV蛋白酶活性

2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-木吡喃糖基异硫氰酸酯1与2-氨基-4/6-取代-苯并噻唑2a～2e反应,生成糖基硫脲衍生物3a～3e,再在伯胺存在下经氯化汞脱硫,得到一系列新的胍基木吡喃糖苷类化合物4a～4e,5a～5e,6a～6e,7a～7e,所有新化合物的结构均经IR,^1H NMR,MS谱和元素分析证实,所得产物均为β-构型.生物活性测试结果表明,化合物4c,5b,6b～6d,7b等对HIV-1蛋白酶表现出了较高的抑制活性.

新型胍基半乳糖苷的合成及生物活性研究

2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基异硫氰酸酯1与2-氨基-4/6-取代苯并噻唑2a^2d反应,生成糖基硫脲衍生物(3a^3d),再在仲胺存在下经氯化汞脱硫,得到一系列新的多乙酰基胍基糖苷类化合物(4a^7a,4b^7b),糖基的保护基团在甲醇/甲醇钠条件下脱除,得到游离羟基的胍基糖苷(4c^7c,4d^7d).所有新化合物的结构均经IR,1H NM R,M S谱和元素分析证实,所得产物均为β-构型.对代表性化合物的生物活性测试结果表明,与相应的葡萄糖基胍相比,半乳糖基胍类化合物对H IV-1蛋白酶,血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性较差.

半乳糖基胍的合成

利用半乳糖基异硫氰酸酯1与2-氨基-4／6-取代苯并噻唑2a-2d在无水苯中回流得到半乳糖基硫脲3a-3d，在HgCl2作用下，与二乙胺发生亲核加成反应，合成半乳糖基胍（4a-4d）．甲醇／甲醇钠的体系中，4a-4d脱去保护基团，得到游离羟基的半乳糖基胍（5a-5d）．结构均经IR，^1HNMR，MS和元素分析确证，所有新化合物均为口-构型．

一种高效的树木总DNA提取方法

高质量的DNA是林木分子生物学研究的关键因素之一。在高浓度离液剂异硫氰酸胍(GuSCN)存在的条件下,核酸具有与硅珠(SiO2)颗粒结合、并能在较高温度下被低盐浓度溶液洗脱的特性。基于这一原理建立了一种新的树木叶片总DNA提取方法。此方法操作简单、快速,经过浓度、纯度测定,以及PCR扩增和限制性内切酶消化证明,从不同树木叶片中均得到了高质量的DNA样品。

一种玉米叶片基因组DNA快速提取新方法的初步研究

在玉米分子标记辅助育种工作中,需要对大量群体的个体样本进行分子标记分析,其中DNA的高效快速提取是关键的技术环节。以异硫氰酸胍为主要提取试剂,结合使用组织研磨器(Qiagen Tissuelyser),建立了一种玉米叶片基因组DNA的快速提取新方法。利用此方法提取玉米叶片基因组DNA,具有使用药品少、操作步骤简单、快速、成本低、DNA质量稳定等优点,通常情况下每人每个工作日可以提取300个DNA样品。此DNA提取方法可有效地用于玉米分子标记分析。

甘蔗茎RNA提取方法的比较

以甘蔗茎为材料,分别用异硫氰酸胍法与Trizol提取法,比较从蔗汁、蔗渣和汁渣混合物匀浆中提取甘蔗茎总RNA的效果。结果表明,从蔗汁和汁渣混合物匀浆中提取到28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA,而蔗渣中仅提取到5S RNA;蔗汁中提取的mRNA,其转录水平可代表甘蔗茎mRNA的转录水平;异硫氰酸胍法提取的蔗汁总RNA纯度和产量均优于Trizol提取法的。