用RT-PCR法对猪瘟病毒检测的研究

用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取病料细胞总RNA并进行反转录 ,再以此产物为模板对CSFV可疑病料进行了PCR扩增。结果用CSFV特异性引物扩增能得到与设计片段大小相同的产物 (2 72bp) ,并且不扩增猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒的核酸 ;其敏感性要高于猪瘟荧光抗体染色法、猪瘟强弱毒酶标单克隆抗体染色法和电镜负染法 ,为临床上猪瘟的诊断提供了一个快速、有效的诊断方法。

四种全血基因组DNA提取方法的比较

为比较酚 氯仿抽提法、经典Miller盐析法、改进的Miller盐析法及胍盐酸法提取人全血基因组DNA的方法 ,分别测定所获DNA的效率和纯度。结果发现四种方法提取的DNA纯度分别为 1.6 2± 0 .2 6、1.5 8± 0 .2 8、1.6 1± 0 .2 8、1.5 6± 0 .2 7,各组间差异无显著性 ;5mL全血所提DNA总量分别为 6 4 .0± 33.0 μg、30 .3± 2 6 .9μg、11.1± 9.2μg和 6 5 .2± 2 4 .0 μg。酚 氯仿法和胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其他两种方法。四种方法提取DNA的纯度相似 ,酚 氯仿法和胍盐酸法的提取效率高 ,胍盐酸法和盐析法的操作较简单、安全。胍盐酸法相对简单快速、安全、效率高 。

利用不同方法从深加工牦牛肉产品中提取基因组DNA效果的比较

为了从深加工牦牛肉产品中获得片段较大、数量较多的基因组DNA,以用于分子追溯的检测,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法的提取效果。通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段,对利用3种方法提取的基因组DNA的数量和质量进行了比较。结果显示,利用酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA质量不佳,异硫氰酸胍法和试剂盒提取法的提取效果相当,PCR可以扩增出730 bp左右的核外基因细胞色素b,而核内基因只能扩增出300bp左右的核基因DNA片段(内乳铁蛋白基因,271 bp;BoLA-DRB3基因,302 bp)。综合考虑提取时间、费用、数量和质量等各方面的因素,认为异硫氰酸胍法操作简便、快速、廉价、有效,是较好的从动物深加工肉产品中提取基因组DNA的方法。

血清HCV RNA不同提取方法的对比研究

目的:探讨不同方法提取丙型肝炎患者血清HCVRNA,比较每种方法提取的RNA用于RT-PCR荧光定量检测的敏感度。方法:分别采用异硫氰酸胍-酚氯仿法、蛋白酶K-酚氯仿法、固相吸附法、柱式总RNA抽提法提取7例疑似HCV感染者血清标本中的HCVRNA,采用实时荧光定量PCR法进行检测。结果:采用异硫氰酸胍-酚氯仿法、蛋白酶K-酚氯仿法提取HCVRNA用于核酸检测有漏检现象,而采用固相吸附法和柱式总RNA抽提法,敏感度均可达到100%。结论采用固相吸附法和柱式总RNA抽提法提取血清HCVRNA具有较高的敏感度,在实时荧光定量PCR法检测中具有重要的临床价值。