异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法同时测定18种氨基酸

建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定 18种氨基酸的方法。以正亮氨酸为内标物 ,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂 ,用C18色谱柱在柱温 38℃下采用二元梯度洗脱 ,于 2 5 4nm波长处检测。氨基酸质量浓度在 3 5mg/L～ 5 5 6mg/L时 ,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度的线性相关系数 ,除胱氨酸 (0 96 2 )外均大于 0 99;18种氨基酸的加标回收率在 96 0 %～ 10 2 .4 %。信噪比为 2时 ,亮氨酸最低检测限为 0 5mg/L。应用该方法对小牛血去蛋白注射液中的游离氨基酸含量进行了测定 。

异硫氰酸苯酯衍生化-HPLC法测定龟甲中胶原蛋白

目的 采用异硫氰酸苯酯衍生化法分析龟甲中胶原蛋白。方法 龟甲中胶原蛋白经酸水解后分解为含有羟脯氨酸的氨基酸混合物，经异硫氰酸苯酯衍生化后，以0．1mol／L醋酸钠溶液-乙腈（94：6，pH6．5）与乙腈-水（80：20）为二元流动相，经C18色谱柱分离，254nm处测定羟脯氨酸。通过测定样品中羟脯氨酸的量来计算样品中胶原蛋白的量。结果 羟脯氨酸在0．02～0．20mg／mL时与峰面积呈良好的线性关系，回收率为102．0％。结论 建立的龟甲中胶原蛋白的HPLC分析方法分离效果好、准确、快速、干扰少。

异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度

目的：建立一种异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱同时测定人血浆中10种氨基酸的方法。方法：以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,Venusil-AA柱为分析柱,柱温40℃,采用二元梯度洗脱,254 nm波长处检测。结果：氨基酸血浆浓度在15.6-250μmol/L时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸血浆浓度的线性相关系数,均大于0.99;10种氨基酸的加样回收率在96.3%-103.4%;日间和日内变异系数均在4.8%以下。应用该方法对小儿血浆中氨基酸含量进行了测定,取得了满意的结果。结论：该法简便、稳定,并且分离效果好,可用于人血浆中氨基酸浓度的检测。

异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液含量

目的:建立一种用异硫氰酸苯酯柱前衍生的高效液相色谱方法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量。方法:选用 Dia-monsil(TM)钻石 C_(18)(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相 A 为0.1 moL·L^(-1)醋酸钠缓冲液(pH 6.5)-乙腈(93:7);流动相 B 为乙腈-水(80:20),进行梯度洗脱。检测波长为254 nm。结果:门冬氨酸鸟氨酸溶液在101.06～303.18μg·mL^(-1)浓度范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9990),回收率为99.1%(RSD=0.60%)。结论:本方法重复性好,定量准确,可用于门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量测定。

检测癫痫大鼠脑组织中Glu、Gly、GABA含量的异硫氰酸苯酯柱前衍生HPLC技术的建立

目的建立检测癫痫大鼠脑组织谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)含量的异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生高效液相色谱(HPLC)技术,并验证其检测效果。方法将海人藻酸(KA)或等量生理盐水注射入大鼠海马CA3区建立癫痫模型或对照,2周后分别取其海马和皮层组织,采用PITC柱前衍生法处理样品,采用醋酸钠缓冲液和乙腈梯度洗脱,Venusil-AA氨基酸分析柱结合紫外检测器检测,计算Glu、GABA、Gly含量。结果在30 min内3种氨基酸完全出峰。在0.20~12.50 mg/L范围内Glu线性关系良好,相关系数为0.999 3,日内精密度为1.46%,日间精密度为1.84%,加样回收率为97.12%±2.98%;在0.01~6.25 mg/L范围内Gly线性关系良好,相关系数为0.998 4,日内精密度为1.17%,日间精密度为1.62%,加样回收率为96.63%±1.28%;在0.10~6.25mg/L范围内GABA线性关系良好,相关系数为0.999 4,日内精密度为1.00%,日间精密度为1.53%,加样回收率为99.25%±2.98%。模型组海马和皮层中Glu含量均高于对照组相应组织(P均<0.05)。结论成功建立了检测癫痫大鼠脑组织Glu、Gly、GABA含量的PITC柱前衍生HPLC技术检测效果较好。

异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定奶粉中的牛磺酸

采用异硫氰酸苯酯为衍生剂,反相液相色谱法测定牛磺酸的含量.使用VP-ODS柱,以醋酸钠缓冲液-乙腈体系为流动相,流速为1.0mL/min,在254nm波长处紫外检测.牛磺酸在5～100μg/mL范围与峰面积呈良好线性关系,相关系数r=0.9993,平均回收率为99.2,RSD=1.32%（n=6）.该方法结果准确,重现性好.

异硫氰酸苯酯衍生法测定孵育液中的3-甲基组氨酸与酪氨酸

目的 :探讨用异硫氰酸苯酯 (PITC)衍生法高效液相色谱检测 3 甲基组氨酸 (3 MH)和酪氨酸 (Tyr)。 方法 :将PITC作为高效液相色谱柱前衍生剂 ,干燥后存放在冰箱 ,样品进样后 ,用乙酸钠和乙腈作为二元梯度洗脱5 0min完成分析。 结果 :本实验中建立的方法 3 MH和Tyr均具有良好的线性 ,相关系数分别为 0 9991与 0 .9992 ,回收率为 82 6 %与 87 6 %。 结论 :PITC衍生法高效液相色谱检测 3 MH和Tyr稳定可靠 ,灵敏度高 。

磺基异硫氰酸苯酯化学辅助方法对新蛋白质进行从头测序

利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间(MALDI-TOF-TOF)质谱结合磺基异硫氰酸苯酯化学辅助的方法对一种从拟青霉(Paecilomyces bainier)分离纯化到的新人参皂苷Rb1水解酶的部分肽段进行了从头测序.共获得了这个新蛋白质8条肽段的序列,一些磺化后信噪比非常低的肽段也获得了比较完整的序列.同时通过从头测序分析确定了一对甲硫氨酸非氧化和氧化肽段的序列.结果表明,磺化后的肽段离子化效率大大增强,在PSD(源后裂解)过程中只有肽键断裂产生的C端的碎片离子系列(y离子系列)出现在质谱图中,图谱背景清晰,信噪比高,单纯的y离子系列使得图谱解析变得非常容易.将这8条序列在NCBI(美国国立生物技术信息中心)数据库中进行BLAST(蛋白质序列比对工具)检索印证这种β-葡萄糖甘酶是一个新蛋白质,发现的两条相对保守的序列为进一步研究奠定了基础.

异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定安尿通中3种氨基酸含量

本文介绍安尿通中 3种氨基酸的柱前衍生后以RP -HPLC测定的方法。PhenomenexLunaODS(4 .6× 2 5 0mm)色谱柱 ,移动相A∶0 . 1mol·L 1醋酸钠溶液 (pH6 . 5 ) -乙腈(93∶7) ,移动相B :水和乙腈 (2 0∶80 ) ,梯度洗脱检测波长是 2 5 4nm ,柱温 4 0℃ ,氨基酸的重复性是 99. 2 %～ 99 .5 %。

异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定复方氨基酸注射液(3AA)中氨基酸含量

目的:建立采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量。方法:色谱柱:Diamonsil C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:A为0.1 mol/L醋酸钠溶液(pH 6.5)-乙腈(93∶7);B为乙腈-水(80∶20)梯度洗脱,流速:1.0 ml/min;柱温:40℃;检测波长:254 nm。结果:各个氨基酸的浓度与其相应色谱峰面积的线性相关系数均达到0.999以上;各个氨基酸的浓度与其相应色谱峰面积呈良好的线性关系,回收率在98.5%～99.6%。结论:该方法适用于测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量,具有准确、快速和灵敏度高等优点。

异硫氰酸苯酯的合成

利用苯胺,二硫化碳,氨水及重金属盐反应,合成异硫氰酸苯酯。对反应物的物料比,搅拌时间及重金属盐的种类进行了研究。实验结果表明:在反应原料物质的量比为苯胺∶二硫化碳∶氨∶硫酸铜=1∶1.18∶1.97∶1.62,搅拌时间0.5h,为最佳条件,产品收率可达16.8％。

Edman降解中异硫氰酸苯酯新修饰位点的发现和验证

Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法,该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用,该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端,并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异硫氰酸苯酯是否可以修饰其他氨基酸侧链并影响多肽序列分析的研究。为了探究其修饰其他氨基酸的可能性,本文利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)研究了异硫氰酸苯酯对一个模型肽的化学修饰。质谱数据解析后发现在高浓度异硫氰酸苯酯的反应条件下,组氨酸上可以引入一个新的异硫氰酸苯酯修饰位点。这一修饰位点的发现预示着通过改变实验条件或分析方法,可以更准确地利用Edman降解和蛋白质组学技术分析多肽和蛋白质。

异硫氰酸苯酯柱前衍生RP-HPLC法同时测定莲雾中15种游离氨基酸的含量

采用异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱法,建立了同时测定莲雾果实中15种游离氨基酸含量的方法。采用Atlantis T3柱为固定相,以0.1 mol/L乙酸钠缓冲液(pH6.5,含0.5%三乙胺)和乙腈-水(4∶1)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温35℃,紫外检测器波长254 nm。各氨基酸组分在2.0~500 mg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数r均大于0.99,检出限为0.08~0.35 mg/L,定量限为0.35~1.25 mg/L,加标回收率为85.61%~106.68%,相对标准偏差RSD均小于5%。该方法使得15种氨基酸很好的分离,且准确度和精密度好,灵敏度和回收率高,适用于莲雾果实游离氨基酸含量的分析。

含异硫氰酸苯酯裂解碎片的铁硫羰合簇取代衍生物的合成与表征

本文使用Ｓｃｈｌｅｎｋ操作技术，以Ｆｅ３（ＣＯ）（１２）与ｐｈＮＣＳ在温和条件下反应，除了制得一取代物外，还制得一个新的二取代产物，通过元矛分析、ＩＲ、ＭＳ、１ＨＮＭＲ和１３ＣＮｈＩＲ表征，确定它们的化学式为Ｆｅ３（ＣＯ）３（ＣＮＰｈ）（μ３－Ｓ）２和Ｆｅ３（ＣＯ）７（ＣＮＰｈ）２（μ３－Ｓ）２。

异硫氰酸苯酯柱前衍生反相高效液相色谱法测定复序橐吾中21种氨基酸的含量

目的:测定复序橐吾中游离和水解氨基酸的含量。方法:以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定复序橐吾中氨基酸的含量。结果:21种氨基酸的检测浓度线性范围为0.0022-2.1000μmol/L,精密度RSD在0.38%-1.05%之间;稳定性RSD在0.46%-1.28%之间;游离氨基酸和水解氨基酸的重复性RSD在1.20%-2.38%和0.86%-2.43%之间;游离氨基酸和水解氨基酸的加样平均回收率分别在97.89%-101.05%和98.04%-103.03%之间且RSD均小于4%,游离和水解氨基酸的含量分别为0.2307%和8.7943%。结论:复序橐吾中含有21种氨基酸,并确定了其含量。

异硫氰酸苯酯法测定清开灵注射液中氨基酸的含量

目的建立准确测定清开灵注射液中氨基酸含量的方法。方法采用异硫氰酸苯酯为衍生化试剂,清开灵注射液衍生化反应后,进行HPLC分析。色谱柱为Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L醋酸钠-乙腈(pH 6.5)(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速为1 mL/min;检测波长为254 nm。结果该方法可以对清开灵注射液中20种氨基酸准确定量,其浓度在0.019～24.855 g/L范围内,线性关系良好(r=0.999 7～0.999 9)。方法重复性的RSD(%)在0.766%～4.49%之间;20种氨基酸的加样回收率在92.2%～106.8%之间。结论该方法准确、可靠、灵敏,可用于清开灵注射液中氨基酸的含量测定。

异硫氰酸苯酯柱前衍生化HPLC测定盐酸氨基葡萄糖的含量

目的:采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定复方制剂中盐酸氨基葡萄糖的含量。方法:以氨基半乳糖为内标,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,采用Agilent TC C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相10 mmol.L-1pH 5.8的磷酸盐缓冲液-乙腈(90!10),检测波长254 nm,流速0.8 mL.min-1,柱温30℃。结果:盐酸氨基葡萄糖质量浓度在350～550 mg.L-1,经衍生化后其衍生物峰面积与内标衍生物峰面积的比值与盐酸氨基葡萄糖浓度呈线性相关(r=0.999 1)。制剂中盐酸氨基葡萄糖含量测定的平均回收率98.3%(RSD 2.3%)。结论:异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定结果准确灵敏、方法可靠,适用于复方制剂中等复杂样品中盐酸氨基葡萄糖的含量测定。

异硫氰酸苯酯柱前衍生RP-HPLC测定大鼠脑组织中9种氨基酸类神经递质含量

目的 建立一种脑组织中氨基酸类神经递质的测定方法。方法 醋酸钠-乙腈-水为流动相,反相高效液相色谱洗脱,异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生和紫外检测器检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体、中脑、小脑和下丘脑6个脑区中9种氨基酸类神经递质（谷氨酸、门冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸、谷氨酰胺、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸）的含量。结果 9种氨基酸在50 min内洗脱完全,分离效果良好;浓度在5-400μmol·L-1内线性关系良好,且相关系数〉0.99,平均回收率≥80%。结论 本方法简便、准确、灵敏度高、重复性好,适用于一般实验室脑组织中氨基酸类神经递质的测定。

芸薹属植物提取液与异硫氰酸酯类制剂对烟草疫霉菌的抑制作用

为寻找有效防治烟草黑胫病的生物材料,采用生长速率法和抑菌圈法测定了3种芸薹属植物提取液和3种异硫氰酸酯类制剂对烟草疫霉菌菌丝的抑制作用。结果表明:(1)与对照相比,不同浓度的芸薹属芜菁、芥菜和油菜提取液均显著抑制烟草疫霉菌菌丝的生长,EC_(50)值分别为11.39、9.18和5.88 mg/mL,油菜提取液对烟草疫霉菌菌丝生长的抑制效应最佳。(2)与对照相比,不同浓度的异硫氰酸烯丙酯(AITC)和甲基异硫氰酸酯(MITC)制剂也均显著抑制烟草疫霉菌菌丝的生长,EC_(50)值分别为2.07和4.44 mg/L,AITC对烟草疫霉菌菌丝生长的抑制效应最佳;而异硫氰酸苯酯(PITC)对烟草疫霉菌菌丝生长无明显的抑制作用。可见,3种芸薹属植物和2种异硫氰酸酯类制剂(AITC和MITC)对烟草疫霉菌具有较好的生防效应。