异硫氰酸荧光素标记人血清白蛋白

目的 :用异硫氰酸荧光素 (FITC)对人血清白蛋白 (HSA)进行荧光标记。方法 :采用直接标记法 ,并考查不同投料比时的荧光素分子与蛋白分子的结合情况、荧光标记物 (FITC HSA)的荧光光谱及荧光寿命情况。结果 :FITC HSA的激发波长为 5 0 0nm ,荧光波长为 5 30nm ;其固态和液态低温保存时荧光寿命分别为一年和

5-异硫氰酸酯荧光素的合成与荧光性能研究

对标题化合物的合成进行了系统研究,以4-硝基邻苯二甲酸、间苯二酚为原料,甲磺酸为缩合剂,乙酸酐为酰化剂、九水硫化钠为还原剂,经缩合、乙酰化、还原制得5-氨基荧光素,再在二硫化碳-三乙胺-铁盐体系下经异硫氰酸化制得。目标产物结构经1HNMR、13CNMR、MS及IR表征,并测试了其荧光性能。与文献报道醇碱皂化再还原路线相比,采用"一锅法"合成5-氨基荧光素减少分离纯化合成步骤与设备数量,具有效率高、成本低、绿色环保等优点。

大肠杆菌O157:H7异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价

目的:制备高效价、高纯度、特异性好、荧光强度高及稳定的抗大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,初步探讨其在大肠杆菌荧光免疫检测试验中的应用。方法:复苏培养E.coli O157∶H7标准菌株,甲醛灭活制备疫苗免疫家兔。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,经辛酸-饱和硫酸铵法粗提后应用蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行IgG纯化,借助SDS-PAGE电泳、BCA试剂盒法、间接ELISA法分别对蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价进行测定。应用不同FITC与蛋白量比值以及不同标记反应条件对多克隆抗体进行标记。比较荧光抗体F485/535,结合差异性显著分析对FITC与蛋白量比值及反应条件进行合理选择,应用标记抗体与E.coli O157∶H7和金黄色葡萄球菌混合菌液反应验证标记效果。结果:HiTrap Protein G进行E.coli O157∶H7多克隆抗体纯化的最佳纯化方法为35%、100%二梯度洗脱,制备抗体效价为1∶25 600,与沙门氏菌、阴沟肠杆菌等8种肠杆菌无交叉反应,最佳FITC与蛋白量比值为1∶10,最佳标记反应条件为20℃、2h。由最佳条件制得的荧光抗体与E.coli O157∶H7反应明显,强荧光连续照射15min后仍显示高亮度荧光反应,且不与金黄色葡萄球菌反应。结论:本实验首次制备出纯度高、荧光强度高、持续时间长的E.coliO157:H7FITC标记多克隆抗体,为E.coli O157:H7荧光免疫检测方法的建立完成了关键步骤。

异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白标记物的化学发光反应

采用反相流动注射法 ,系统地研究了碱性介质中和阳离子在表面活性剂CTMAB存在下 ,NaClO氧化异硫氰酸荧光素 牛血清白蛋白标记物的化学发光行为和化学发光反应的条件 ,提出了反相流动注射化学发光测定牛血清白蛋白的新方法。该法测定牛血清白蛋白线性范围为 0 .0 8～ 16mg L ;检出限为 0 .0 32mg L。讨论了蛋白质标记物化学发光增强作用的原因。

异硫氰酸荧光素标记抗体的固体基质室温磷光性质研究

研究了异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的羊抗人抗体 (GAHAb FITC)和兔抗羊抗体 (RAGAb FITC) ,及其以三种免疫方式与人免疫球蛋白 (IgG)反应所得免疫复合物在多种固体薄膜基质上发射室温磷光 (RTP)的适宜条件及其光谱、强度和寿命等性质。研究发现 ,标记抗体及其免疫复合物保留了FITC优良的固体基质室温磷光性质 ,λ(max)ex λ(max)em =5 2 5 6 5 0nm ,其RTP强度与其浓度线性相关 ,并有很高的灵敏度。更为重要的是 ,免疫反应及其RTP检测能结合于同一基质 ,方便地相继完成。在聚酰胺膜 (PM )上 ,以Pb(Ac) 2 为重原子微扰剂 ,稀释比为 1∶10 (φ)的GAHAb FITC ,RAGAb FITC及其与人IgG形成的免疫复合物均能发射较强的RTP信号并有较长的RTP寿命。本结果为建立相应的固体基质室温磷光免疫分析 (SS RTP IA)新方法奠定了相应的实验基础。

异硫氰酸荧光素-葡聚糖眶后注射观察鼠视网膜血管的可行性研究

背景糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等视网膜血管性疾病的发病率逐年提高，客观有效地评价视网膜的血管情况是视网膜血管性疾病防治研究的关键。异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC—dextran）眶后注射法是评价C57BL／6J小鼠视网膜血管的新方法，但目前少有关于此方法是否适合于其他小鼠及大鼠研究的报道。目的评估用FITC—dextran眶后注射法观察实验常用鼠种视网膜血管的可行性，为相关的实验研究提供参考依据。方法选择SPF级C57BL／6J小鼠、昆明小鼠、SD大鼠、Wistar大鼠各12只，均分为实验组和对照组各6只。实验组动物右眼眶后注射9ml／kgFITC—dextran溶液，对照组右眼眶后注射等体积PBS溶液。注射10S后大鼠以过量麻醉法处死，小鼠以颈椎脱臼法处死，摘取双侧眼球，荧光显微镜下行双侧眼球后组织以及视网膜铺片检查。结果C57BL／6J小鼠、昆明小鼠实验组双眼均可以观察到FITC—dextran绿色荧光标识的视网膜血管，但对照组各眼均观察不到视网膜血管形态；SD大鼠、Wistar大鼠实验组及对照组受检眼在荧光显微镜下均未观察到FITC—dextran标识的视网膜血管。小鼠、大鼠实验组右眼均可见由FITC—dextran浸染的绿色球后组织，而左眼球后组织均未见荧光。结论FITC—dextran眶后注射法适合于观察小鼠的视网膜血管，不适于观察大鼠的视网膜血管。

以异硫氰酸荧光素为指示剂的pH荧光自组装传感膜

利用自组装膜技术在石英片表面构建了异硫氰酸荧光素自组装膜(FITC SAMs)。考察了组装液浓度、组装时间等组装条件对膜发光性能的影响,并用紫外可见吸收光谱仪、荧光光谱仪、共聚焦荧光显微镜对其进行了表征。研究结果表明,当γ-氨基丙基三乙氧基硅烷水溶液浓度为4%(V/V),组装时间为6 h;异硫氰酸荧光素乙醇溶液浓度为5.0×10"5mol/L,组装时间为12 h时,组装效果最好。基于H+对该SAMs的荧光强度有猝灭效应,建立了一种快速灵敏检测溶液pH的界面荧光分析法,线性响应范围为pH 1.14～5.05。所制备的SAMs具有良好的可逆性和稳定性,膜的响应信号在30 s内就可达到稳态响应的95%,2 min内达到平衡,膜在干燥避光处放置半年后,仍可正常检测。

异硫氰酸荧光素标记鳗弧菌条件优化及应用条件对荧光信号的影响

为了实现对目标细菌的有效示踪，实验以异硫氰酸荧光素（FITC）为标记物，分别设置FITC标记浓度0．2、2、20、50、100、200ixg／mL，标记时间1、15、30、60、120、240min，研究了FITC标记浓度与标记时间对鳗弧菌标记效果的影响，同时对在不同温度（25、4、-20、-70℃）及不同时间（24、48、96、192h）存储条件下鳗弧菌标记荧光的稳定性进行了比较，对标记鳗弧菌经甲醛灭活后的荧光变化进行了观察，研究了不同光照条件（0、150、1500、25000lx）对标记鳗弧菌的荧光衰减影响，以及在-20和-70℃条件下反复冻融对标记鳗弧菌荧光强度的影响。结果表明，FITC的最适标记浓度范围为20—100ug／mL，最适标记时间范围60—120min，储藏在-20和-70℃条件下，标记后的鳗弧菌荧光信号比储藏在4和25℃条件下稳定，标记后的鳗弧菌经甲醛灭活后的荧光信号稳定性优于对照组，不同强度自然光照对标记鳗弧菌的荧光衰减效果不明显，标记细菌经3次冻融，发现在一70℃条件下冻存的细菌荧光信号稳定性保持良好。本研究结果为FITC用于标记海洋细菌提供了实用的技术参数。

异硫氰酸荧光素标记壳聚糖的研究

[目的]探究FITC和壳聚糖不同物料比对反应产物标记率和特性粘数的影响,并研究2种不同pH值下FITC-Chitosan吸收光谱和荧光光谱的变化。[方法]采用异硫氰酸荧光素对壳聚糖进行荧光标记,考查不同物料比时荧光素与壳聚糖的结合情况、产物的特性粘数以及标记物在pH值1.0、6.0的吸收光谱和荧光光谱。[结果]结果表明,物料比在小于0.5%时,标记物的特性粘数变化较小,适合用于标记壳聚糖;FITC-Chitosan在pH值1.0时可见吸收波长为438 nm,荧光激发波长440 nm,发射波长520 nm;在pH值6.0时可见吸收波长为488 nm,荧光激发波长493 nm,发射波长515 nm。[结论]该研究为FITC-Chitosan获得更深入的关注和更广泛的应用提供了试验依据。

链霉亲和素-异硫氰酸荧光素偶联核壳型Fe_3O_4/Au纳米晶的合成及性质

采用改进的Polyol合成法,以PEO-PPO-PEO为表面活性剂制备了链霉亲和素-异硫氰酸荧光素偶联的Fe3O4/Au纳米粒子;利用透射电镜和X射线衍射仪分析证实了Fe3O4/Au的核壳型纳米结构,确定了其粒径和分布;采用紫外-可见吸收光谱仪和荧光光谱仪测定了所制备的纳米粒子的光学活性和荧光特性,并采用振动样品磁强计(VSM)测量了其磁化率.结果表明,所制备的Fe3O4/Au纳米粒子具有光学活性和荧光特性,以及优异的磁性.

异硫氰酸荧光素-人血清白蛋白标记物化学发光反应的研究

采用反相流动注射分析方法 ,研究了异硫氰酸荧光素 ( FITC) -人血清白蛋白( HSA)标记物的化学发光性能和反应的最佳条件 ,建立了化学发光测定人血清白蛋白的新方法。体系的化学发光强度与人血清白蛋白的含量在 0 .0 8～ 1 6μg/m L内呈线性关系 ,方法的检出限为 0 .0 4μg/m L。

利用荧光素异硫氰酸酯检测季铵盐阳离子表面活性剂的方法

使用荧光素异硫氰酸酯(FITC)实现了对季铵盐阳离子表面活性剂(QAS)在水溶液中临界胶束浓度(CMC)的准确测量及其在CMC以下的浓度定量。用该法测得十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)在水中的CMC分别为12～13mmol·L-1和0.70～0.96mmol·L-1,与电导率法、表面张力法和芘荧光法的检测值相近。对DTAB和CTAB的检测下限分别是0.11mmol·L-1和1.7μmol·L-1,定量范围分别为0.11～9.73mmol·L-1(0.034～3.0g·L-1)和1.7μmol·L-1～0.27mmol·L-1(6.2×10-4～0.1g·L-1)。结果表明,使用FITC荧光探针检测QAS具有安全、简便、灵敏度和准确度高的优点。

异硫氰酸荧光素染色在真菌性角膜炎中的应用

目的:寻找真菌性角膜炎组织切片快速、准确、方便操作的特殊染色方式。方法:采用经真菌培养均为阳性的真菌性角膜炎患者的角膜标本38例,常规固定脱水透明浸蜡,进行4μm石蜡切片,脱蜡至水,选用异硫氰酸荧光素(FITC)荧光法和过碘酸雪夫氏染色法(PAS)进行染色对比。结果:异硫氰酸荧光素法检测阳性率为97.4%(37/38),过碘酸雪夫氏染色法检测阳性率为86.8%(33/38)。结果比较有统计学差异(P<0.001)。结论:异硫氰酸荧光素法镜检真菌性角膜炎优于过碘酸雪夫氏染色法镜检。

异硫氰酸荧光素-溶菌酶的制备及晶体生长预研究

迄今尚未有适用于光源为488nm激光扫描共聚焦显微镜研究用的溶菌酶.为此,用异硫氰酸荧光素作为探针标记了溶菌酶,测定了溶菌酶标记物的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱,摸索了其晶体的生长条件.实验结果表明,在标记过程中异硫氰酸荧光素没有影响溶菌酶的生化性质,标记后的溶菌酶可用于激光扫描共聚焦显微镜进行后续研究.

膜联蛋白V的异硫氰酸荧光素标记和应用研究

目的制备一种新型的膜联蛋白V,用异硫氰酸荧光素进行标记,观察它对外露磷脂酰丝氨酸(PS)红细胞的荧光染色情况。方法带有金属螯合位点的膜联蛋白V通过毕赤酵母的培养和甲醇诱导表达获得,膜联蛋白V粗品通过离子交换和硫酸铵沉淀得到纯化产物。在硼酸盐缓冲液完成膜联蛋白V的异硫氰酸荧光素标记,标记产物经过离子交换进行纯化。红细胞经过戊二醛处理后PS外露于细胞表面。在荧光显微镜下观察异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V对外露PS红细胞的结合。结果毕赤酵母重组表达的新型膜联蛋白V经过离子交换和硫酸铵沉淀后得以纯化和浓缩。经过异硫氰酸荧光素进行标记后观察到它对外露PS红细胞的结合。结论毕赤酵母系统重组表达的膜联蛋白V具有结合外露PS红细胞的能力,可以应用于细胞凋亡的体外检测。

利用异硫氰酸荧光素标记亲合素荧光法测定生物素含量

利用异硫氰酸荧光素标记亲合素与生物素反应能引起荧光强度增强，在一定范围内，生物素与荧光强度存在一定函数关系。该方法灵敏度高（０．５ｎｇＶＨ／ｍｌ）、测定范围为５．０～６０．０ｎｇＶＨ／５ｍｌ。大孔吸附树脂对玉米浆，谷氨酸发酵液进行预处理，其生物素的回收率达９０％。

异硫氰酸荧光素荧光猝灭法测定痕量碘酸根

碘酸根与碘离子反应生成游离碘使异硫氰酸荧光素的荧光猝灭 ,λex为 487nm ,λem为 5 17nm ,碘酸根含量在2～ 8μg/L范围内与荧光猝灭程度有良好线性关系 ,检测限为 0 .74μg/L .该法灵敏度高 ,操作简便 ,用于含碘食盐中微量碘酸根的测定 。

17α－羟基孕酮－丁二酸－牛血清白蛋白－异硫氰酸荧光素结合物的合成

以１７α－羟基孕酮为原料，通过酰化反应，得１７α－羟基孕酮丁二酸半酯。与其氯代甲酸异丁酯作用后再与牛血清白蛋白结合，然后接上异硫氰酸荧光素即得到１７α－羟基孕酮－丁二酸－牛血清白蛋白－异硫氰酸荧光素结合物。该物作为雌、孕激素受体的检测试剂，制备方法较简便。

异硫氰酸荧光素标记的蚓激酶纳米粒的分离

目的 :分离除去蚓激酶白蛋白纳米粒溶液中未成粒的BSA ,利于FITC标记在纳米粒上 ;分离除去未与蚓激酶纳米粒结合的FITC ,降低FITC对检测荧光纳米粒的影响。方法 :采用SephadexG - 1 0 0和SephadexG - 5 0凝胶柱分离纯化。结果 :流速为 3ml/min时 ,SephadexG - 1 0 0柱 (2 1 .5cm ,φ1 .9cm)能够分离除去 (2 9.3± 3.6 ) %未形成纳米粒的BSA ;流速为 0 .2 5ml/min时 ,SephadexG - 5 0凝胶柱 (1 0cm ,φ2cm)可以完全分离除去未与纳米粒结合的FITC。结论 :通过分离 ,FITC有效地标记在纳米粒上 ;降低了背景荧光 ,使荧光纳米粒在荧光显微镜下清晰显现。